Bài giảng Chuyển gene - Nguyễn Thái Thủy

Chia sẻ: Năm Tháng Tĩnh Lặng | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:81

Thêm vào BST

Báo xấu

49
lượt xem 4
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Chuyển gene" này cung cấp cho người học các nội dung như: Giới thiệu kỹ thuật chuyển gene, các phương pháp chuyển gene đang được sử dụng, Lipofection, Electroporation, Biolistics, Microinjection,... Mời các bạn cùng tham khảo.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Chuyển gene - Nguyễn Thái Thủy

CHUYEÅN GENE Nguyeãn Thaùi Thuûy, MSc. National Sales Manager Bio-Rad Laboratories VN Email: thai_thuy@bio-rad.com
NOÄI DUNG Giôùi thieäu kyõ thuaät chuyeån gene Caùc phöông phaùp chuyeån gene ñang ñöôïc söû duïng. Lipofection Electroporation Biolistics Microinjection
GIÔÙI THIEÄU KYÕ THUAÄT CHUYEÅN GENE 1928 – Baùo caùo ñaàu tieân veà chuyeån gene: vi khuaån coù theå thu nhaän sinh chaát naøo ñoù töø moâi tröôøng soáng laøm chuùng thay ñoåi. Chuyeån gene = chuyeån gene/genome töø sinh vaät naøy vaøo genome sinh vaät khaùc.
GIÔÙI THIEÄU KYÕ THUAÄT CHUYEÅN GENE Chuyeån toaøn boä nuclear
TAÏI SAO PHAÛI CHUYEÅN GENE Nghieân cöùu: Bieåu hieän gene trong teá baøo soáng Ñieàu hoøa bieåu hieän gene Taàm soaùt caùc höôùng trò lieäu Sinh hoïc ung thö
TAÏI SAO PHAÛI CHUYEÅN GENE ÖÙng duïng: duøng teá baøo soáng ñeå saûn xuaát caùc vector di truyeàn, protein taùi toå hôïp phuïc vuï cho caùc muïc ñích chuyeân bieät: heo saûn xuaát noäi taïng ngöôøi phuï vuï caáy gheùp, protein trò lieäu taùi toå hôïp theá heä thöù ba ñöôïc taïo ra vaø söû duïng ngay trong teá baøo chuû, thöïc vaät khaùng coân truøng, choáng chòu nhieät ñoä cao, choáng chòu laïnh, choáng chòu haïn vaccine DNA trò lieäu gene
Taïi sao phaûi chuyeån gene Cloning: Cöøu vôùi genome xaùc ñònh
CAÙC PHÖÔNG PHAÙP CHUYEÅN GENE Khueách taùn thuï ñoäng: vi khuaån thu nhaän DNA khoâng caàn baát kyø xöû lyù ñaëc bieät naøo. Khueách taùn ñöôïc hoå trôï: ví duï teá baøo vi khuaån xöû lyù CaCl2 keøm soác nhieät ôû 420C. Vector vi khuaån/virus: ví duï Agrobacterium tumefaciens hay CaMV chuyeån DNA vaøo thöïc vaät Lipofection Electroporation Biolistics Microinjection
LIPOFECTION Söû duïng hoùa chaát höõu cô toång hôïp lipid-polyamines thieát keá ñaëc bieät ñeå chuyeån nucleic acid vaøo teá baøo ñoäng vaät höõu nhuõ. Caáu taïo bao goàm ñaàu öa nöùôc (+) vaø ñuoâi kî nöôùc (-). Ñaàu (+) baùm vôùi nucleic acid (-) Lipid micelle phaûn öùng vôùi maøng teá baøo ñeå chuyeån nucleic acid vaøo beân trong teá baøo. Söû duïng ñeå chuyeån DNA/RNA vaøo trong raát nhieàu loaïi teá baøo. Ñoäc tính ñoái vôùi teá baøo thaáp
LIPOFECTION
ELECTROPORATION Electroporation ( chuyeån gene xung ñieän) söû duïng ñieän tröôøng maïnh trong thôøi gian ngaén laøm taïm thôøi maát tính oån ñònh cuûa maøng teá baøo. Trong thôøi gian naøy, maøng teá baøo coù khaû naêng thaám cao ñoái vôùi caùc phaân töû hieän dieän trong moâi tröôøng xung quanh. Nhôø ñoù, DNA/ RNA coù theå ñöôïc chuyeån vaøo teá baøo.
ELECTROPORATION Electroporation
CAÙC ÖU ÑIEÅM CUÛA ELECTROPORATION Khoâng söû duïng hoùa chaát, khoâng laøm thay ñoåi caáu truùc, chöùc naêng cuûa teá baøo ñích Deã thöïc hieän Thôøi gian ngaén Khoâng ñoäc haïi Hieäu quaû cao Coù theå aùp duïng cho nhieàu loaïi teá baøo
ÖÙNG DUÏNG CUÛA ELECTROPORATION Chuyeån caùc gene marker Saùt nhaäp caùc gene chöùc naêng Chuyeån thuoác, protein, moài phaân töû, caùc chaát chuyeån hoùa, khaùng theå … ñeå khaûo saùt chöùc naêng vaø caáu truùc cuûa teá baøo.
CÔ CHEÁ • Teá baøo ñöôïc cho vaøo cuvette cuøng vôùi DNA • Cho xung ñieän qua cuvette vaø ñieän tröôøng taïo caùc loã treân maøng teá baøo. • DNA ñi vaøo trong teá baøo qua caùc loã • Khi xung ñieän taét, caùc loã treân maøng teá baøo ñoùng laïi, giöõ laïi caùc DNA beân.
HEÄ THOÁNG GENE PULSER Xcell PC module (Pulse Controller) CE module (Capacitance Extender) Main unit ShockPod
CHÖÙC NAÊNG Taïo hai loaïi xung: daïng haøm muõ giaûm, daïng soùng vuoâng. Ñaùp öùng toái öu vôùi nhieàu loaïi teá baøo, eukaryote hay prokaryote.