Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật
lượt xem 17
download
Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật nêu lên một số kỹ thuật nuôi cấy tế bào, cấy chuyền, tạo dòng tế bào. Mời các bạn tham khảo bài giảng để bổ sung thêm kiến thức về lĩnh vực này, với các bạn chuyên ngành Sinh học thì đây là tài liệu hữu ích.
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
Nội dung Text: Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật
- ThS. Phan Lữ Chính Nhân Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật
- Nội dung Tạo dòng tế Nhắc lại bào Kỹ thuật Các ứng cấy dụng chuyền
- THU NHẬN MẪU MÔ CẮT NHỎ (chọn lọc mẫu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Tách tế Cắt nhỏ Tách tế bào bào bằng (mảnh nhỏ bằng cơ học (nghiền, ép) enzym để nuôi) (ủ…) Nuôi mẫu NUÔI SƠ Trypsin Collagenas Trypsin ấm mô sơ cấp CẤP lạnh e Tái huyền Thu nhận Ly tâm Cấy chuyền phù tế bào mới Thu mảnh DÒNG TẾ mô thứ BÀO cấp
- Nuôi sơ cấp Nuôi mô Thu nhận cơ quan Cắt nhỏ Thành Cấy chuyền tế bào đơn Cấy chuyền Cell line 4 Nuôi sơ cấp
- 5
- Tách rời tế bào Tách bằng tác Tách bằng nhân khác enzym (EDTA) Trypsin Collagenase Papain Elastas Trypsin ấm Trypsin lạnh
- Tách bằng enzyme Trypsin: Chymotrypsin Collagenase Papain Elastase • pH6-9, tối ưu 8-9 • pH 7-9, thích • Hoạt động • pH • Phân huỷ • Nồng độ dùng: hợp 8-9 tốt: pH7-8, 4,5-8,5 elastin 0,01%-0,5% • Cắt liên kết < 450C • Bị kìm • Sử dụng • Ca2+ được xem như peptide tạo bởi • Cắt liên kết hãm kết hợp chất bảo vệ Trypsin –COOH acid peptide bởi với • Bị kìm hãm bởi FBS amin thơm với – dạng poly-L chất enzyme hoặc Di-Isopropyl- NH2 prolin; gồm oxy khác Fluorophosphat(DFP) • Tính đặc hiệu 4 loại đặc hoá • Không đặc hiệu cho kém hơn trypsin trưng tắt loại protein: Cắt liên • Bị ức chế bởi từng loại kết –COOH của DFB mô chuyên lysin/arginin và –NH2 • biệt ít có thể gây hư hai làm hư hại cho tế bào tế bào MỘT SỐ ENZYME PHÂN CẮT THƯỜNG DÙNG
- Tế bào bám dính Tế bào không bám dính Cụm tế bào nuôi sơ cấp 1. Huyền phù để tách rời cụm Sau nuôi sơ cấp, tế Sau 1 thời gian, tế bào tế bào thành tế bào bám vào bề mặt tăng sinh, bao phủ đầy đĩa nuôi bề mặt đĩa nuôi bào đơn Tế bào tách khỏi bề Thêm enzym (trypsin, 2. Pha loãng mật mặt đĩa nuôi, chuyển collagenase…) độ tế bào, qua các đĩa nuôi khác 1 chuyển sang các đĩa nuôi mới 3 2 3. Tế bào đơn với Sau cấy chuyền, tế bào tiếp tục tăng sinh mật độ thưa trong đĩa nuôi mới 8 Puck và Marcus (1955)
- Lưu ý • Hạn chế tối đa thời gian tiếp xúc của enzyme phân tách với tế bào • Chọn nồng độ tối thiểu enzyme phân tách tuỳ loại tế bào • Sử dụng các chất ức chế hoạt tính enzym ngay sau khi phân tách (FBS, protease inhibitor)
- TẠO DÒNG TẾ BÀO XÂY DỰNG ĐƯỜNG KHÁI NIỆM- ĐẶC TÍNH MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CONG TĂNG TRƯỞNG VÀ ĐO SỰ PHÁT TRIỂN
- 11
- 12
- Tăng sinh 13 (Regenerative Medicine, 2006)
- 14
- Tiêu chí lựa chọn dòng tế bào cho thí nghiệm • Loài • Đặc điểm chức năng • Hữu hạn hay liên tục • Bình thường hay chuyển dạng • Điều kiện và đặc tính tăng trưởng
- • Cùng kiểu gen, hình thái • quần thể tế bào như nhau ở đặc điểm quan tâm. 16
- Douglas C. McFarland Methods in Cell Science 22: 63–66 (2000). Mô Phân tách Tế bào đơn Nuôi sơ cấp Pha loãng tới hạn Vòng nhẫn Tách tế bào tự động Clone phát triển 17
- Giếng tế bào gốc Chuỗi pha Loãng lần 1 Chuỗi pha Loãng lần 2
- 19
- Nhuộm crystal violet
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Bài giảng về Công nghệ chuyển Gen (Động vật, Thực vật)
126 p | 515 | 192
-
CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỐI VỚI NGÀNH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM
124 p | 174 | 66
-
Bài giảng Những tiến bộ mới trong chuồng trại và quản lý chất thải trong chăn nuôi part 7
5 p | 208 | 55
-
Bài giảng Chương 2: KỸ THUẬT PHÒNG THÍ NGHIỆM NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT
43 p | 202 | 55
-
Bài giảng chọn giống cây trồng
0 p | 224 | 51
-
BÀI GIẢNG NẤM ĂN VÀ VI NẤM - CHƯƠNG 1
10 p | 175 | 49
-
Bài giảng Công nghệ sinh học đại cương: Chương 3 - ThS. Ninh Thị Thảo
208 p | 194 | 44
-
Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy sơ cấp tế bào động vật
68 p | 284 | 26
-
CNSH trong Bảo quản chế biến nông sản - Cà chua chuyển gen
67 p | 103 | 17
-
Kiến thức về Thực vật chuyển gen
35 p | 130 | 12
-
Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật kĩ thuật và ứng dụng: Bài 1 - TS. Vũ Bích Ngọc
64 p | 58 | 6
-
Bài giảng Nhập môn Công nghệ sinh học: Chương 4 - TS. Võ Thị Xuyến
41 p | 25 | 6
-
Bài giảng Cây ăn quả chuyên khoa
29 p | 38 | 5
-
Bài giảng Công nghệ sinh học đại cương: Chương 4 - ThS. Vương Thị Thúy Hằng
35 p | 8 | 5
-
Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng
40 p | 28 | 3
-
Bài giảng Kỹ thuật phân tích trong vi sinh vật - Bùi Hồng Quân
448 p | 35 | 3
-
Bài giảng Công nghệ Gene: Chương 6 - TS. Nguyễn Ngọc Phương Thảo
10 p | 22 | 2
Chịu trách nhiệm nội dung:
Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA
LIÊN HỆ
Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM
Hotline: 093 303 0098
Email: support@tailieu.vn