Bài thuyết trình: Tiêu chuẩn hiện hành để kiểm nghiệm Vibrio

Chia sẻ: Ngô Thị Thảo Ngân | Ngày: | Loại File: PPTX | Số trang:36

Thêm vào BST

Báo xấu

121
lượt xem 14
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài thuyết trình: Tiêu chuẩn hiện hành để kiểm nghiệm Vibrio có nội dung giới thiệu về Vibrio, quy trình phân tích, thử nghiệm sinh hóa Vibrio. Tham khảo nội dung tài liệu để nắm bắt nội dung chi tiết.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài thuyết trình: Tiêu chuẩn hiện hành để kiểm nghiệm Vibrio

Tiêu chuẩn hiện hành để kiểm nghiệm Vibrio
1. Giới thiệu chung • Giống Vibrio thuộc họ Vibrionaceae, bộ Vibrionales, lớp Gammaproteobacteria, ngành Proteobacteria. • Vi khuẩn gram âm (), hình phẩy • Di động bằng 1 roi • Kỵ khí tùy ý • Không sinh bào tử • Phát triển tốt ở pH trên 9, dung dịch NaCl 3% • Test Catalase (+), Oxidase (+), H2S (), lên men Glucose không sinh khí
Giống Vibrio gồm 4 loàithuộc tác nhân gây bệnh cho người gồm: • V. Cholerae • V. Parahaemolyticus • V. Vulnificus • V. Alginolyticus • Vibrio parahaemolyticus và Vibrio cholerae có khả năng gây bệnh đường ruột • Vibrio vulnificus có thể vào cơ thể thông qua vết thương hở hoặc do bệnh nhân uống nước biển chứa vi khuẩn. Triệu chứng nhiễm khuẩn
V. cholerae V. parahaemolyticus V. vulnificus V. alginolyticus Phản ứng oxidase (+) Phản ứng oxidase (+) Không lên Không lên Tăng trưởng được trong Phát triển được trong men sucrose men môi trường canh trypton canh trypton ở 24oC Không tăng sucrose ở 42oC Phản ứng ADH (), trưởng được Phát triển Arginine dehydrolase () LDC (+) trong môi được trong Lysine decarboxylase (+) Khử nitrate thành trường môi trường Lên men được sucrose nitrite không có chứa đến Khử nitrate thành nitrite Không lên men muối, ức chế 10% muối. Có thể tăng trưởng trong sucrose trong môi môi trường chứa 03% Không sinh hơi trường có 8 NaCl, không phát triển Tăng trưởng trong 10% muối. được trong môi trường môi trường chứa 8% chứa 6,810% muối. muối, ức chế trong môi trường chứa 10% muối.
2. Quy trình phân tích
2.1 Tăng sinh chọn lọc • Vibrio sinh trưởng bằng cách tăng sinh trong môi trường pepton kiềm chứa 1% muối NaCl cho trường hợp V. cholera, V. alginolyticus và V. vulnificus; canh Colistine cho trường hợp V. parahaemolyticus. • Mẫu lỏng: cho vào nước peptone kiềm, ủ ở 37oC trong 18 – 24 giờ. • Mẫu rắn: cho vào túi PE vô trùng chứa nước peptone kiềm và đồng nhất trong máy dập mẫu rồi ủ ở 37oC trong 18 – 24 giờ.
2.2 Phân lập • Ử trong môi trường TCBS ở 370C trong 18 – 22 giờ. • Cấy khuẩn lạc đặc trưng sang môi trường TSA hay thạch máu. • Ủ 370C để Khu lấạy sinh kh ẩn l c ối cho bước tiKhuếp theo là th ẩn lạc ử nghiệm sinh hóa. V.Cholerae và V.Alginolyticus V.Parahaemolyticus và V.Vulnificus Đường kính 2 – 3 mm Màu vàng Đường kính 3 – 4 mm Láng, hơi phẳng Màu từ xanh đến xanh dương Tâm đục và xung quanh khuẩn lạc có quầng trắng đục.
2.3 Thử nghiệm sinh hóa
Kết luận thử nghiệm sinh hóa của V. Thử nghiệm cholera Kết quả ONPG + Lactose ADH LDC + TDA Indol + Mannose + Sucrose + Oxidase + 0% + 3% + Tính ưa muối 6%
Thử nghiệm sinh hóa: Quan sát tính di động và hình thái của vi khuẩn trên kính hiển vi • Quan sát dưới kính hiển vi ở vật kính 40X. • Ghi nhận kết quả: di động hay bất động, hình dạng tế bào. • Tiến hành: o Lam kính 1: Hoà mẫu phân vào nước muối sinh lý, nhỏ 1 giọt lên lam kính, đậy phiến kính mỏng (lamen) lên trên.Soi tiêu bản trực tiếp trên kính hiển vi thấy vi khuẩn tả di động rất nhanh theo những đường thẳng từ đầu đến cuối vi trường. o Lam kính 2: Nhỏ 1 giọt huyền dịch phân lên lam kính, nhỏ 1 giọt kháng huyết thanh tả đa giá. Nếu là vi khuẩn tả thì vi khuẩn sẽ bị bất hoạt, không di động nữa.
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm khả năng lên men đường • Môi trường: Phenol red broth base pH 7.4 • Chỉ thị pH: đỏ phenol, màu đỏ chuyển sang vàng khi pH dưới 6.8 • Kiểm nghiệm khả năng lên men: lactose, sucrose, mannose • Bổ sung đường vào môi trường rồi khử trùng • Sau đó cấy và ủ 370C trong 18 – 20 giờ
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm khả năng lên men đường •Đánh giá dựa vào sinh acid (làm đổi màu chỉ thị) và sinh hơi (CO2 tạo thành được bẫy lại trong ống Durham). •Kết quả: • Phản ứng (+): môi trường chuyển vàng. • Phản ứng (): môi trường có màu đỏ.
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm Decarboxylase • Enzyme carboxylase do VK tạo ra loại nhóm carboxyl của acid amin tạo amin hay diamin và CO2 . • Môi trường: Decarboxylase Basal Medium • Chỉ thị: Bromothymol purple pH 6.0, vùng chuyển màu pH 5.2 – 6.8 thay đổi từ vàng thành tím • Kiểm nghiệm: ADH, LDC. • Hấp khử trùng môi trường rồi cấy • Bổ sung dầu khoáng hay parafin rồi ủ 370C trong
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm Decarboxylase  Kết quả: • Môi trường đục, màu tím (CO2 sinh ra làm thay đổi pH, đổi màu chỉ thị). • Môi trường trong, màu vàng MT trước khi cấy Pứ dương tính Pứ âm tính
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm khả năng sinh Indol  Môi trường: Trypton  Thuốc thử: Kovac’s  Cho thêm eter để chiết Indol  Ủ 44.50C trong 24 giờ  Kết quả: (+) Bề mặt môi trường màu đỏ () Bề mặt môi trường có màu vàng của thuốc thử (đôi khi có màu cam do Skatol là tiền chất Methyl hóa của Indol tạo ra).
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm khả năng sinh H2S 37oC / 24h Thuốc thử Kovac’s Chủng VSV MT canh trypton Pứ dương tính Pứ âm tính
Thử nghiệm sinh hóa: Thử nghiệm khả năng sinh H2S • Enzym desulfohydrase do VK tổng hợp sẽ xúc tác sự chuyển hóa acid amin chứa lưu huỳnh (cystein, cystin, methionin) và phóng thích H2S. • Môi trường: Ø Thạch nghiêng: KIA, TSI Ø Thạch đứng: SIM, PIA Ø Đĩa petri: BSA • Cấy vào môi trường rồi ủ 370C trong 24 – 48 giờ hoặc đến 7 ngày nếu cần.