Biến thế Ebnai ở bệnh nhân ung thư vòm múi họng Việt Nam, Trung Quốc và ở người Việt Nam bình thường

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Thêm vào BST

Báo xấu

64
lượt xem 5
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Virút Epstein - Barr (EBV), một virut thuộc nhóm herpes, được lây nhiễm ở hầu hết các quần thể dân cư trên thế giới. Sự tồn tại của virut trong cơ thể bị nhiễm có hai dạng lμ thể dung giải vμ thể tiềm ẩn. Khởi đầu của chu kỳ dung giải lμ sự xâm nhập của các virut vμo liên bμo lympho B ở vòm họng nhờ các rêxepơ thích hợp. Virut được nhân lên trong tế bμo vμ tạo ra các hạt virut. Các hạt virut nμy lại được giải phóng ra vμ lây nhiễm sang các tế bμo lμnh khác hoặc các cơ thể khác qua con...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Biến thế Ebnai ở bệnh nhân ung thư vòm múi họng Việt Nam, Trung Quốc và ở người Việt Nam bình thường

TCNCYH 25 (5) - 2003 BiÕn thÓ ebnai ë bÖnh nh©n ung th− vßm mòi häng ViÖt Nam, Trung Quèc vµ ë ng−êi ViÖt Nam b×nh th−êng NguyÔn V¨n §«1, TrÇn ThÞ ChÝnh1, Phan ThÞ Phi Phi1, Ingemar Ernberg2, Li Fu Hu2 1 Bé m«n MiÔn dÞch - Sinh lý bÖnh tr−ëng ®¹i häc Y Hµ Néi 2 MTC, ViÖn Karolinska, Stockholm, Thuþ §iÓn EBNA (EBV - nuclear antigen1) lµ mét protein duy nhÊt ®−îc biÓu lé ë tÊt c¶ c¸c tÕ bµo bÞ nhiÔm virut Epstein - Barr. BiÕn thÓ cña EBNA1 ®· ®−îc ®Þnh nghÜa dùa vµo acid amin ë vÞ trÝ thuéc m· bé ba 487 cña DNA vµ bao gåm c¸c d−íi nhãm lµ P (prototype): P- ala (B95 -8) vµ P- thr; V (variant): V - val, V - leu vµ V - pro. Chóng t«i ®· ph©n tÝch tr×nh tù DNA ë ®Çu cacboxy cña EBNA1 tõ s¶n phÈm PCR. C¸c mÉu DNA cho kü thuËt PCR ®−îc chiÕt t¸ch tõ khèi u vßm häng vµ m¸u ngo¹i vi cña bÖnh nh©n ung th− vßm häng ng−êi ViÖt Nam vµ Trung Quèc, thÓ biÓu m« kh«ng biÖt ho¸; m¸u ngo¹i vi cña ng−êi cho m¸u ViÖt Nam. KÕt qu¶ cho thÊy EBNA1 ë ng−êi b×nh th−êng vµ bÖnh nh©n ung th− vßm mòi häng cã c¸c ®ét biÕn ®iÓm dÉn ®Õn thay ®æi c¸c acid amin vµ c¸c biÕn thÓ nµy thuéc d−íi nhãm cña V - val: V - val - v1 (9/10 cÆp mÉu vµ 5 ng−êi b×nh th−êng) vµ V - val - v2 (1/10 cÆp mÉu). Trong sè 15 cÆp mÉu cña bÖnh nh©n ung th− vßm häng ng−êi Trung Quèc, ë khèi u cã d−íi nhãm lµ V - val - v1 (15/15), cßn m¸u ngo¹i vi chØ cã 2 mÉu (2/15) lµ P - ala vµ mét mÉu nghi ngê cã c¶ P - ala vµ V- val - 1. I. §Æt vÊn ®Ò EBNA2 - 6 biÓu lé. EBV lµ nguyªn nh©n g©y ra bÖnh t¨ng b¹ch cÇu ®¬n nh©n nhiÔm khuÈn vµ Virót Epstein - Barr (EBV), mét virut thuéc lµ virut cã liªn quan ®Õn mét sè bÖnh lý ¸c tÝnh nhãm herpes, ®−îc l©y nhiÔm ë hÇu hÕt c¸c ë ng−êi nh− u lympho Burkitt (BL) [1], ung th− quÇn thÓ d©n c− trªn thÕ giíi. Sù tån t¹i cña vßm mòi häng (UTVMH) [2,3]. virut trong c¬ thÓ bÞ nhiÔm cã hai d¹ng lµ thÓ dung gi¶i vµ thÓ tiÒm Èn. Khëi ®Çu cña chu kú EBNA1 lµ mét protein cña EBV ®−îc biÓu lé dung gi¶i lµ sù x©m nhËp cña c¸c virut vµo liªn ë tÊt c¶ c¸c thÓ nhiÔm tiÒm Èn trong tÕ bµo bµo lympho B ë vßm häng nhê c¸c rªxep¬ nhiÔm EBV. Nã cã vai trß rÊt quan träng lµ yÕu thÝch hîp. Virut ®−îc nh©n lªn trong tÕ bµo vµ tè hÖ thèng c¸c gen khëi ®éng cña EBV gióp t¹o ra c¸c h¹t virut. C¸c h¹t virut nµy l¹i ®−îc cho qu¸ tr×nh sao chÐp ADN vµ ph©n chia cña gi¶i phãng ra vµ l©y nhiÔm sang c¸c tÕ bµo EBV ®Ó duy tr× sù tån t¹i cña EBV trong tÕ bµo, lµnh kh¸c hoÆc c¸c c¬ thÓ kh¸c qua con ®−êng ®ång thêi ®iÒu hoµ sù biÓu lé cña chÝnh EBNA1 n−íc bät. ThÓ nhiÔm tiÒm Èn xuÊt hiÖn sau khi vµ c¸c gen kh¸c cña thÓ nhiÔm tiÒm Èn nh− nhiÔm dung gi¶i ë c¸c c¬ thÓ bÞ nhiÔm. ThÓ nµy EBNA 2 - 6, LMP1,2. gåm c¸c h×nh th¸i I, II, III vµ sù biÓu lé gen cña Tr×nh tù gen cña EBV thuéc dßng tÕ bµo EBV kh¸c nhau tuú theo h×nh th¸i nhiÔm, ë c¸c B95 -8 ®· ®−îc ph©n tÝch hoµn chØnh vµ cÊu bÖnh kh¸c nhau. ë thÓ nhiÔm tiÒm Èn I chØ cã tróc cña gen EBNA1 liªn quan ®Õn c¸c chøc EBER vµ EBNA1, h×nh th¸i II cã thªm c¸c gen n¨ng cña nã ®· ®−îc nghiªn cøu vµ lµm s¸ng kh¸c biÓu lé nh− LMP1, LMP2 vµ h×nh th¸i III tá. Mét sè t¸c gi¶ ®· ph¸t hiÖn thÊy c¸c ®ét tÊt c¶ c¸c gen cña h×nh th¸i I vµ II vµ thªm biÕn ®iÓm cña gen EBNA1 dÉn ®Õn sù thay ®æi 23
TCNCYH 25 (5) - 2003 c¸c acid amin trong chuçi protein ë c¸c chñng 2. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu EBV tõ c¸c vïng ®Þa lý kh¸c nhau trªn thÕ giíi 2.1. ChiÕt t¸ch DNA vµ tõ nh÷ng bÖnh lý kh¸c nhau cã liªn quan. 2.1.1. ChiÕt t¸ch DNA tõ m¸u toµn phÇn C¸c c«ng tr×nh nghiªn cøu ®Òu cho thÊy c¸c ®ét biÕn th−êng x¶y ra ë vïng cã chøc n¨ng 5ml m¸u ®−îc chèng ®«ng b»ng EDTA b¶o g¾n DNA thuéc ®Çu cocboxy cña EBNA1 [4,5]. qu¶n trong vßng 24 giê ë nhiÖt ®é 40C. Cho Bhatia vµ céng sù 1996 còng ®· ph©n tÝch tr×nh 10ml dung dÞch ph¸ hång cÇu (1mM NH4HCO3 tù gen EBNA1 cña EBV thuéc dßng B95 - 8 so 115mM NH4Cl) vµo falcon 15ml ®· ®ùng s½n s¸nh víi mét sè chñng EBV kh¸c vµ ®· ph©n m¸u chèng ®«ng, l¾c ®Òu vµ ly t©m 1200g x 10 lo¹i EBNA1 thµnh 5 d−íi nhãm kh¸c nhau, ®ã phót. Lo¹i bá dÞch vµ gi÷ l¹i phÇn cÆn. Lµm tan lµ P - ala, P - thr, V - pro, V - leu vµ V - val (P cÆn vµ cho 10ml dung dÞch ph¸ hång cÇu lÇn 2, lµ prototype thuéc chñng B95 - 8, cßn V lµ ly t©m lÊy cÆn nh− trªn. Cho 1,8ml dung dÞch variant). ph¸ b¹ch cÇu (100mM tris - C1, pH 7,6; 40mM EDTA, pH 8.0; 50mM NaCl; 0,2% SDS; 0,05% ë ViÖt Nam ch−a cã c«ng tr×nh nµo nghiªn sodium azide) vµo cÆn b¹ch cÇu thu ®−îc vµ cøu vÒ ph©n tÝch tr×nh tù gen vµ ph¸t hiÖn ®ét l¾c m¹nh theo chiÒu däc èng nghiÖm ®Ó lµm biÕn gen EBNA1 cña EBV. tan hÕt c¸c b¹ch cÇu, dung dÞch trë nªn ®Æc vµ Môc tiªu cña c«ng tr×nh nµy lµ: nhÇy. Cho 10µl proteinase K nång ®é 1. Ph©n tÝch tr×nh tù gen EBNA1 ë ®Çu tËn 20mg/mL vµo b¹ch cÇu ®· ®−îc lµm tan vµ ñ ë cacboxy cña DNA, t¸ch chiÕt tõ m« sinh thiÕt 500C, 2 giê cã l¾c theo chu kú. Thªm 600µl ung th− vßm mòi häng (UTVMH) vµ m¸u ngo¹i NaCl 6M, l¾c 10 phót vµ ly t©m 1200 vßng/ vi ng−êi kháe m¹nh. phót x 5 phót, lo¹i bá n−íc næi. Cho 5ml cån 2. So s¸nh tr×nh tù gen EBNA1 cña bÖnh 700 vµo cÆn DNA, ly t©m 1200 vßng/ phót x 5 nh©n UTVMH ViÖt Nam víi tr×nh tù gen nµy ë phót. Lµm kh« DNA ë nhiÖt ®é phßng vµ hoµ bÖnh nh©n UTVMH Trung Quèc víi gen EBNA tan trong 400µl - 500µl TE. cña chñng B95 - 8 ch©u ¢u vµ cña m¸u cña 2.1.2. ChiÕt t¸ch DNA tõ m« sinh thiÕt t−¬i ng−êi khoÎ m¹nh ViÖt Nam. Cho 560µl dung dÞch ph¸ huû tÕ bµo (0,6% II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p SDS; 10mM EDTA; 10mM Tris, pH 7,5; nghiªn cøu 200µg/ml RNaseA) vµo cèi nghiÒn thñy tinh v« trïng ®ùng s½n mÉu sinh thiÕt t−¬i. NghiÒn cho 1. §èi t−îng ®Õn khi mÉu sinh thiÕt tan hoµn toµn sau ®ã ñ 1.1. BÖnh nh©n ung th− vßm mòi häng 600C x 1 giê. Cho 15µl proteinase K (20mg/ml), DNA ®−îc chiÕt t¸ch tõ 10 cÆp mÉu gåm tiÕp tôc ñ 600C tõ 1 - 1,5 giê. Thªm 640µl dung sinh thiÕt khèi u vßm häng ®−îc chÈn ®o¸n x¸c dÞch phenol b·o hoµ vµ l¾c nhÑ 10'. Ly t©m ®Þnh b»ng gi¶i phÉu bÖnh lý lµ ung th− biÓu m« 5000 vßng/ phót x 10'. Hót lÊy n−íc næi chuyÒn kh«ng biÖt ho¸ vµ m¸u cña mçi bÖnh nh©n sang tube míi, cho 660µl phenol/ CHISAM t−¬ng øng. C¸c bÖnh nh©n nµy ®−îc chÈn (1:1) l¾c ®Òu 5', ly t©m lo¹i bá cÆn. Cho 660µl ®o¸n vµ ®iÒu trÞ t¹i bÖnh viÖn K Hµ Néi. 15 cÆp CHISAM (clorofom/ isoamyl alchohol: 24:1) l¾c mÉu bÖnh nh©n ung th− vßm häng thÓ biÓu m« ®Òu 5', ly t©m vµ hót lÊy phÇn n−íc næi. Thªm kh«ng biÖt ho¸ ®−îc lÊy tõ Qu¶ng §«ng, Trung 40µl NaOAc, pH 5,2, cån tuyÖt ®èi gÊp 2 lÇn Quèc. thÓ tÝch dung dÞch thu ®−îc vµ l¾c nhÑ nhµng. 1.2. Ng−êi b×nh th−êng Tña DNA h×nh thµnh, ly t©m lÊy tña, röa tña DNA ®−îc chiÕt t¸ch tõ 5 mÉu m¸u lÊy tõ b»ng cån tuyÖt ®èi vµ cån 700. Hoµ tan DNA ng−êi cho m¸u t¹i ViÖn HuyÕt häc vµ TruyÒn trong TE hoÆc n−íc cÊt. KiÓm tra chÊt l−îng m¸u Trung −¬ng. DNA b»ng ®iÖn di trªn th¹ch agarose 0,8% cã ethidium bromide. §äc kÕt qu¶ b»ng ®Ìn UV. 24
TCNCYH 25 (5) - 2003 Nång ®é vµ ®é tinh khiÕt cña DNA ®−îc ®o ng−îc: 5' - gcc att cca aag aga cg - 3' b»ng quang phæ kÕ. C¸c mÉu DNA ®Òu ®¹t ®é (109580nt - 109561nt). NhiÖt ®é g¾n måi t¨ng tinh khiÕt tiªu chuÈn (OD 260/280) lín h¬n 1,7. lªn 590C vµ sè chu kú nhiÖt gi¶m xuèng cßn 2.2. Kü thuËt PCR (Polymerase Chain 27. S¶n phÈm PCR cã kÝch th−íc lµ 146bp. Reaction) 2.3. Kü thuËt ph©n tÝch tr×nh tù nucleotid 2.2.1. X¸c ®Þnh gen EBNA1 tõ khèi u C¸c s¶n phÈm PCR (DNA tõ m« sinh thiÕt) CÆp måi sö dông cho kü thuËt khuyÕch ®¹i vµ nested - PCR (DNA tõ m¸u ngo¹i vi) lµ 1 ®o¹n gen EBNA1 tõ m« sinh thiÕt lµ: måi nguyªn liÖu dïng ®Ó ph©n tÝch tr×nh tù. ChuÈn xu«i, 5' - tgg gttt gga aag cat cgt ggt c - 3' bÞ mÉu ®Ó ph©n tÝch tr×nh tù b»ng mét ph¶n øng (109339nt - 109360nt) vµ mçi ng−îc, 5' - gtt PCR cã mét måi xu«i, 5' - Thñ t−íng gttt gga gtg ggc cgg gtc cag gg - 3' (109600nt - aag cat cgt ggt c - 3' (109339nt - 109360nt). Bé 109581nt). ThÓ tÝch cña ph¶n øng lµ 25µl trong kit sö dông lµ "BigDye Terminator Cycle ®ã 2,5µl mçi måi xu«i vµ ng−îc nång ®é 2µl, 1 Sequencing Ready Reaction Kit". KÕt qu¶ ®−îc ph©n tÝch b»ng phÇn mÒm chuyªn dông. ®¬n vÞ Taq polymerase (Perkin - Elmer), 2µl dNPTs nång ®é 2.5µM vµ 200ng DNA vµ III. KÕt qu¶ H2O. Tr×nh tù c¸c ph¶n øng gåm cã biÕn tÝnh 1. §ét biÕn thay thÕ nucleotid ®Çu DNA tiÒn ph¶n øng lµ 950C x 2', 35 chu kú cacboxy cña EBNA1 ë m« sinh thiÕt bÖnh nhiÖt lµ 950C x 15'', 520C30'', 720C30'' thêi gian nh©n ung th− vßm mòi häng vµ m¸u ngo¹i hoµn thµnh ph¶n øng lµ 5' ë 720C. S¶n phÈm vi PCR cã chiÒu dµi 246bp. §iÖn di s¶n phÈm Ph©n tÝch tr×nh tù 1 ®o¹n gen m· ho¸ cho PCR trong th¹ch agarose 2%. §äc kÕt qu¶ vµ c¸c acid amin n»m ë nh÷ng vÞ trÝ cã c¸c acid chôp ¶nh bëi hÖ thèng GelDoc 2000. amin tõ 487 ®Õn 533, chóng t«i nhËn thÊy r»ng 2.2.3. X¸c ®Þnh gen EBNA1 tõ m¸u ngo¹i vi sù ®ét biÕn thay thÕ nucleotid dÉn ®Õn thay ®æi §Ó khuyÕch ®¹i gen EBNA1 tõ m¸u ngo¹i acid amin xuÊt hiÖn ë c¸c vÞ trÝ 487, 499, 502, vi, chóng t«i ph¶i dïng 2 lÇn ph¶n øng PCR 524 vµ 533 so víi EBNA1 cña chñng B95 - 8. (PCR1 vµ PCR2). C¸c vÞ trÝ thay thÕ acid amin nµy gièng víi d−íi PCR1: Tr×nh tù nucleotid cña cÆp måi thø nhãm V - val theo ph©n lo¹i d−íi nhãm cña nhÊt gièng víi cÆp måi dïng cho ph¶n øng Bhatia 1996 vµ Sandvej 2000 [4,6]. Nh−ng PCR ®èi víi DNA tõ khèi u vßm häng. 25µl hçn trong nghiªn cøu cña chóng t«i, vÞ trÝ c¸c acid hîp ph¶n øng chøa 2,5µl mçi lo¹i måi xu«i vµ amin lµ V - val - v1 vµ Va - val - v2, d−íi nhãm ng−îc nång ®é 2µl, 1 ®¬n vÞ AmpliTaq DNA cña V - val (b¶ng 1). polymerase (Perkin Elmer), 2.0µl dNTPs Dùa vµo acid amin sè 487, chuçi EBNA1 2.5mM vµ 200ng DNA. BiÕn tÝnh DNA tiÒn ®−îc xÕp thµnh 2 lo¹i: P (prototype) - ala (hoÆc ph¶n øng ë 950C x 2', 35 chu kú nhiÖt lµ: 940C thr) vµ V (viriant) - val (hoÆc - leu). P - ala lµ x 15'', 520C x 30'' vµ 720C x 30'', giai ®o¹n EBNA1 thuéc dßng B95 -8. P - ala - v1, v2, v3 hoµn thµnh viÖc kÐo dµi lµ 720C x 5' . KÝch lµ c¸c d−íi nhãm cña P -ala. V- val - v1 vµ V - th−íc cña s¶n phÈm lµ 246bp. val - v2 lµ c¸c d−íi nhãm cña V - val. C¸c PCR2: Kü thuËt PCR lång (nested - PCR) nucleotide cã ®ét biÕn thay thÕ ®−îc ®¸nh dÊu víi cÆp måi lµ: måi xu«i 5' - tgg gtt gga aag cat b»ng g¹ch ch©n. C¸c « trèng lµ c¸c nucleotide cgt ggt c - 3' (109339nt - 109360nt) vµ måi cã tr×nh tù gièng víi P -ala cña B95 - 8. 25
TCNCYH 25 (5) - 2003 B¶ng 1: C¸c d−íi nhãm EBNA1 trong nghiªn cøu cña chóng t«i so víi EBNA1 cña B95 - 8 vµ c¸c d−íi nhãm kh¸c 471 475 476 487 492 499 500 502 520 524 525 528 533 P-ala CAA AAC CCG GCT AGT GAC GAA ACT CTA ACT GCC ATT CTT Gln Agn Pro Ala Ser Asp Glu Thr Leu Thr Ala Ile Leu P-ala-v1 GAA ATT Glu Ile P-ala-v2 GAA GTT Glu val P-ala-v3 GAA GTT GTT Glu Val Val P-thr CAG ACT TGT GAT CTC ATT Gln Thr Cys Asp Leu Ile P-thr-v CAG ACT TGT GAG CTC ATT Gln Thr Cys Glu Leu Ile V-leu GAA AGC CAG CTT TGT GAG GAT AAT CTC ATT GGC Glu Ser Gln Leu Cys Glu Asp Agn Leu Ile Gly V-val GTT GAG AAT CTC ATT ATT Val Glu Agn Leu Ile Ile V-val-v1 GTT GAG AAT CTC ATT GTT ATT Val Glu Agn Leu Ile Val Ile V-val-v1 GTT GAG AAT CTC ATT CTT ATT Val Glu Agn Leu Ile Leu Ile 2. Tû lÖ c¸c d−íi nhãm cña EBNA1 ë bÖnh nh©n UTVMH ViÖt Nam, Trung Quèc vµ ng−êi b×nh th−êng B¶ng 2: Sù ph©n bæ c¸c d−íi nhãm EBNA1 ë m¸u ngo¹i vi ng−êi b×nh th−êng, m¸u vµ khèi u cña c¸c bÖnh nh©n ung th− vßm Trung Quèc vµ ViÖt Nam Sè mÉu P - ala P - ala + Va-val-v1 Va-val-v2 Ghi chó Va-val-v1 T: 10 0 0 9 1 UTVMH ViÖt Nam CÆp mÉu L: 10 0 0 9 1 UTVMH Qu¶ng §«ng 1 T: 15 0 0 15 0 L: 15 2 1? 12 0 Ng−êi cho m¸u ViÖt Nam L: 5 0 0 5 0 T: Khèi u; L : m¸u ngo¹i vi; cÆp mÉu: cã mÆt ë hÇu hÕt c¸c cÆp mÉu vµ kh«ng gåm sinh thiÕt vµ m¸u ngo¹i vi cña cïng thÊy mét tr−êng hîp nµo cã d−íi nhãm V- mét bÖnh nh©n. val-v2. Trong khi ®ã ë m¸u ngo¹i cña mét Trong tæng sè 10 cÆp mÉu cña bÖnh sè bÖnh nh©n UTVMH l¹i cã P-ala hoÆc nghi nh©n UTVMH ViÖt Nam cã 9 cÆp mÉu cã ngê cã c¶ P-ala vµ V-val-v1. Sù cã mÆt cña d−íi nhãm lµ V - val - v1 vµ 1 cÆp mÉu cã V c¶ 2 d−íi nhãm P-ala vµ V-val trong m¸u - val - v2. §èi víi c¸c bÖnh nh©n UTVMH ngo¹i vi còng ®· ®−îc th«ng b¸o [7]. Mét cña Trung Quèc d−íi nhãm V-val-v1 còng ®iÒu ®¸ng chó ý lµ trong 5 mÉu DNA tõ m¸u 26
TCNCYH 25 (5) - 2003 ngo¹i vi cña ng−êi cho m¸u ViÖt Nam còng 3. Chang, Y.S., et al., (1990), chØ cã mét d−íi nhãm lµ V-val-vq Detection of Epstein - Barr virus DNA KÕt qu¶ nµy còng phï hîp víi nhËn xÐt sequences in nasopharygeal carcinoma cña Sandvej 2000 khi nghiªn cøu trªn c¸c cells by enzymatic DNA amplification. J Clin ®èi t−îng bÖnh nh©n ung th− vßm häng cña Microbiol, 28 (11): p.2398 - 402. ng−êi Trung Quèc vµ chØ ®Æc tr−ng cho biÕn 4. Bhatia, K., et al. (1996), Variation in thÓ EBNA1 ë Ch©u ¸, n¬i cã tû lÖ m¾c bÖnh the sequence of Epstein Barr virus nuclear ung th− vßm häng cao nh− Trung Quèc. Tuy antigen 1 in normal peripheral blood nhiªn, viÖc nghiªn cøu chøc n¨ng cña ®o¹n lymphocytes and in burkitt's lymphomas. protein EBNA1 cã ®ét biÕn thay thÕ acid Oncogene, 13(1): p. 177 - 81 amin còng cÇn ®−îc tiÕn hµnh ®Ó xem c¸c 5. Bhatia, K. and I. Magrath, EBNA - 1 ®ét biÕn nµy cã ¶nh h−ëng ®Õn chøc n¨ng sequences iin endemic and sporadic cña nã hay kh«ng. Burkitt's lymphoma. J. Virol, 1999, 73 (8): p.7096 - 7 IV. KÕt luËn 6. Sandvej K., X.G. Zhou and D−íi nhãm cña EBNA1 ë bÖnh nh©n ung S.Hamilton - Dutoit, EBNA - 1 sequence th− vßm häng vµ ng−êi b×nh th−êng ViÖt variation in Danish and Chinese EBV - Nam chñ yÕu lµ V-val-v1. KÕt qu¶ nµy còng associated tumours: evidence for t−¬ng tù ë c¸c mÉu nghiªn cøu lÊy tõ bÖnh geographical polymorphism butnot for nh©n ung th− vßm häng ë Trung Quèc. tumour - specific subtype restriction. J. Tµi liÖu tham kh¶o Pathol, 2000, 191 (2): p.127 - 31. 1. Frank, D. et al, (1995): Gutierrez, M.I., et al. (1997), Sequence Postransplantation lymphoproliferative variations in EBNA - 1 may dictaterestriction disorders frequently contain type A and not of tissue distribution of Epstein - Barr virus type B Epstein - Barr virus. Blood, 85 (5): p. in normal and tumour cells. J. Gen Virol, 78 1396 - 403. (pt 7): p.1663 – 70. 2. Zur Hausen H., et al., (1970), EBV DNA in biopsies of Burkitt tumours and anaplastic carcinomas of the nasopharynx. Nature, 228 (276): p.1056 - 8. Variation of EBNA1 in Vietnamese, chinese NPC and healthy blood donors EBNA1 (Epstein – Barr virus nuclear antigen-1) is the only viral protein expressed consistently in all virus-infected cells. It’s sequence variations were defined based on amino acid signature at codon 487. Those are prototype containing P-ala (identical to prototype B95-8 strain) and (P)-thr and variant that has V-val, V-leu and V-pro. We analyzed DNA sequence in C-terminus of EBNA1 from PCR products. DNA samples for PCR were isolated from tumours and periferal blood of Vietnamese nasopharyngeal carcinoma and from peripheral blood of healthy blood donors. The results show that there are two EBNA1 sub-subtypes in Vietnamese NPC (nasopharyngeal carcinoma), V-val-v1 (9/10 DNA matches samples and 5 DNA samples from healthy blood donors and V-val-v2 (1/10 matched samples). Among 15 Chinese matched samples, 15/15 samples from tumors contained V-val-1, only 2/15 (blood samples) contained P-ala and 1/15 (blood sample) may be mixed P-ala and V-val-1. 27