YOMEDIA
Biểu hiện gen Connexin 43 trên phức hợp Cumulus-tế bào trứng heo ở các giai đoạn phát triển khác nhau
Chia sẻ: _ _
| Ngày:
| Loại File: PDF
| Số trang:5
29
lượt xem
2
download
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
Nghiên cứu này nhằm hiểu rõ hơn sự biểu hiện gen Connexin 43 ở mức độ mRNA trong phức hợp cumulus-oocyte (COC) ở heo theo giai đoạn phát triển của nang noãn, theo giai đoạn nuôi cấy thành thục phức hợp tế bào trứng để làm cơ sở cho các nghiên cứu biểu hiện gen liên quan đến chất lượng tế bào trứng nhằm nâng cao hiệu quả hệ thống nuôi cấy. Mời các bạn cùng tham khảo!
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: Biểu hiện gen Connexin 43 trên phức hợp Cumulus-tế bào trứng heo ở các giai đoạn phát triển khác nhau
- DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI
TÀI LIỆU THAM KHẢO Giống vật nuôi. Viện Chăn nuôi 11/2012. Trang 189-96.
8. Quyết định số 1520/QĐ-TTg ngày 06/102020 của Thủ
1. Vũ Đức Cảnh, Phạm Thùy Linh, Nguyễn Quý Khiêm,
tướng Chính phủ: Phê duyệt chiến lược phát triển chăn
Trần Thị Thu Hằng, Phạm Thị Xuân, Khuất Thị Tuyên,
nuôi giai đoạn 2021 - 2030, tầm nhìn 2045.
Hoàng Đình Trường, Phùng Duy Độ, Lưu Thị Thủy và
Lê Thị Cẩm (2020). Chọn lọc ổn định năng suất 04 dòng 9. Vũ Ngọc Sơn, Phạm Công Thiếu, Đào Đoan Trang và
vịt chuyên thịt CT. Báo cáo khoa học năm 2018 - 2020, Ngô Thị Thắm (2013). Bảo tồn và khai thác nguồn gen
Phần Di truyền - Giống vật nuôi. Viện Chăn nuôi 11/2020. Ngỗng cỏ. Chuyên khảo bảo tồn và khai thác nuồn gen
Trang 216-28. vật nuôi Việt Nam. Nhà xuất bản KH&CN, Hà Nội. Trang
201-05.
2. Phạm Văn Chung (2017). Chọn lọc, lai tạo hai dòng vịt
hướng thịt để tạo tổ hợp lai vịt thương phẩm có năng suất 10. Phùng Đức Tiến, Trần Thị Cương, Vũ Thị Thảo, Tạ Thị
và chất lượng thịt cao. Luận án Tiến sỹ, Viện Chăn nuôi. Hương Giang, Trần Thị Hà, Nguyễn Thị Kim Cúc và
Nguyễn Quyết Thắng (2012). Kết quả chọn lọc một số
3. FAO (2020). Số liệu thống kê năm 2020. http://www.fao.
org/faostat. dòng ngan giá trị kinh tế cao thế hệ 4 và 5. Báo cáo khoa
học năm 2011, Phần Di truyền – Giống vật nuôi. Viện
4. Lê Thanh Hải, Dương Xuân Tuyển và Lê Văn Trang
Chăn nuôi 11/2012. Trang 209-21.
(2020). Chọn lọc ổn định năng suất dòng vịt chuyên thịe
V27. Báo cáo khoa học năm 2018 - 2020, Phần Di truyền 11. Tổng cục Thống kê (2017). Số liệu thống kê tháng 12 năm
- Giống vật nuôi. Viện Chăn nuôi 11/2020. Trang 205-15. 2017.
5. Đỗ Văn Hoan (2015). Thực trạng giống vật nuôi ở Việt Nam 12. Tổng cục Thống kê (2020). Số liệu thống kê tháng 06 năm
và định hướng phát triển. Trang 16. https://mard.gov. 2020.
vn/_CONTROLS/ESPORTAL/PubAnPhamTTChiTiet/ 13. Nguyễn Đức Trọng, Nguyễn Văn Duy, Vương Thị Lan
Service.svc/download/L0FuUGhhbVRUL0xpc3RzL0FuU Anh, Nguyễn Thị Thúy Nghĩa, Lê Thị Mai Hoa, Đặng
GhhbVRU/64. Vũ Hòa và Hoàng Văn Tiệu (2012). Chọn lọc ổn định
6. Chu Hoàng Nga, Vương Thị Lan Anh, Nguyễn Văn Duy, năng suất vịt Đại Xuyên PT. Báo cáo khoa học năm 2011,
Đặng Vũ Bình, Nguyễn Thanh Sơn và Đặng Vũ Hòa Phần Di truyền - Giống vật nuôi. Viện Chăn nuôi. Trang
(2020). Kết quả chọn tạo hai dòng vịt Biển 15 - Đại Xuyên 148-59.
sau hai thế hệ. Báo cáo khoa học năm 2018 - 2020, Phần Di 14. Dương Xuân Tuyển, Lê Thanh Hải và Đào Thị Kim Anh
truyền - Giống vật nuôi. Viện Chăn nuôi 11/2020. Trang (2012). Ảnh hưởng của phương thức nuôi đến khả năng
239-50. sản xuất của vịt bố mẹ SM. Báo cáo khoa học năm 2011,
7. Nguyễn Thị Thúy Nghĩa, Nguyễn Đức Trọng, Nguyễn Phần Di truyền - Giống vật nuôi. Trang 130-41.
Văn Duy, Phạm Văn Chung, Mai Hương Thu, Lương 15. Lý Văn Vỹ và Hoàng Văn Trường (2013). Bảo tồn và khai
Thị Bột, Đồng Thị Quyên và Đặng Thị Vui (2012). Đặc thác nguồn gen vịt Mốc Bình Định. Chuyên khảo bảo tồn
điểm ngoại hình và khả năng sản xuất của vịt Bầu và và khai thác nuồn gen vật nuôi Việt Nam. Nhà xuất bản
vịt Đốm. Báo cáo khoa học năm 2011, Phần Di truyền – Khoa học và Công nghệ, Hà Nội. Trang 172-79.
BIỂU HIỆN GEN CONNEXIN 43 TRÊN PHỨC HỢP CUMULUS-
TẾ BÀO TRỨNG HEO Ở CÁC GIAI ĐOẠN PHÁT TRIỂN KHÁC NHAU
Nguyễn Thị Thạo1 và Nguyễn Ngọc Tấn1*
Ngày nhận bài báo: 02/01/2021 - Ngày nhận bài phản biện: 19/01/2021
Ngày bài báo được chấp nhận đăng: 09/02/2021
TÓM TẮT
Nghiên cứu nhằm đánh giá sự biểu hiện gen connexin 43 (Cx43) trên phức hợp cumulus-tế
bào trứng (cumulus oocyte complexes–COC), trên tế bào trứng hoặc tế bào cumulus theo giai đoạn
phát triển của nang noãn và quá trình nuôi thành thục tế bào trứng heo in vitro. Phức hợp COC
thu nhận từ nang noãn nhỏ (7mm), hoặc theo thời điểm: 0,
22 và 44 giờ sau nuôi cấy và tế bào trứng hoặc tế bào cumulus thu nhận lúc 22 giờ sau nuôi cấy. Ly
trích RNA và áp dụng kỹ thuật one-step RT-PCR để khuyếch đại đoạn gen mục tiêu của Cx43 với
kích thước 270bp, sử dụng GAPDH với kích thước 187bp như là đối chứng nội. Sử dụng kỹ thuật
bán định lượng mức độ biểu hiện bằng phần mềm ImageJ để xác định điểm ảnh cho băng biểu
hiện mRNA của gen Cx43 và GAPDH trên ảnh điện di. Kết quả cho thấy sự biểu hiện Cx43 ở mức
1
Trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh
* Tác giả liên hệ: TS. Nguyễn Ngọc Tấn, Giảng viên chính Khoa Khoa học Sinh học - Trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí
Minh; Email: nntan@hcmuaf.edu.vn; Điện thoại: 0948 993 338
KHKT Chăn nuôi số 266 - tháng 6 năm 2021 21
- DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI
mRNA theo kích thước nang noãn thấp nhất ở COC thu từ nang noãn nhỏ (0,63±0,08), khác biệt
có ý nghĩa (P
- DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI
cumulus-oocyte (COC) ở heo theo giai đoạn Sodium bicarbonate) bổ sung 10% dịch nang
phát triển của nang noãn, theo giai đoạn nuôi noãn, 0,8% BSA (Bovine Serum Albumin), 100
cấy thành thục phức hợp tế bào trứng để làm UI/ml Penicillin G sodium salt và 100 UI/ml
cơ sở cho các nghiên cứu biểu hiện gen liên Streptomycin sulfate salt trong 44 giờ ở điều
quan đến chất lượng tế bào trứng nhằm nâng kiện 39oC, 5% CO2. Bổ sung 10 UI/ml hCG
cao hiệu quả hệ thống nuôi cấy. (human Chorionic Gonadotropin) cho môi
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU trường nuôi cấy trong 22 giờ đầu và không bổ
sung hormone cho môi trường nuôi cấy trong
2.1. Vật liệu, địa điểm và thời gian 22 giờ sau (Nguyễn Ngọc Tấn và ctv, 2019a,b).
Thu nhận buồng trứng của heo 4-5 2.2.3. Thu nhận mẫu để ly trích RNA, khuyếch
tháng tuổi, khối lượng 80-100kg, từ lò mổ địa đại đoạn gen Cx43.
phương. Các hóa chất sử dụng trong nghiên COC thu nhận từ nang noãn có kích thước
cứu này được nhập từ công ty Sigma–Alrich khác nhau, theo giai đoạn nuôi cấy và thu từ
(Hoa Kỳ), ngoại trừ những hóa chất đặc biệt tế bào trứng hoặc tế bào cumulus ở thời điểm
sẽ được chỉ ra trong bài viết. 22 giờ sau nuôi cấy được đưa vào ly trích RNA
Nghiên cứu được tiến hành tại Phòng Công (Hình 1). Sử dụng kỹ thuật one-step RT-PCR
nghệ phôi Động vật, Viện Nghiên cứu Công để khuyếch đại đoạn gen mục tiêu của Cx43
nghệ Sinh học và Môi trường; Khoa Khoa học với kích thước 270bp, sử dụng GAPDH với
sinh học, Trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí kích thước 187bp như là đối chứng nội. Thực
Minh, từ tháng 4/2020 đến tháng 12/2020. hiện phản ứng RT-PCR bằng bộ kit MyTaq
2.2. Phương pháp One-Step RT-PCR (Bioline) trong một phản
2.2.1. Thu nhận buồng trứng và tế bào trứng ứng gồm 2 giai đoạn. Giai đoạn 1: Phản ứng
phiên mã ngược tổng hợp đoạn cDNA; giai
Việc thu nhận buồng trứng và tách tế đoạn 2: Phản ứng PCR, tổng hợp DNA từ
bào trứng được thực hiện theo quy trình của đoạn cDNA trên. Trình tự primer được sử
Nguyễn Ngọc Tấn và ctv (2019a,b). dụng: Cx43 (X86023.1) với primer xuôi là
2.2.2. Nuôi cấy thành thục tế bào trứng (IVM) 5’-CCACTGAGCCCCTCCAAA-3’ và primer
Sau khi tách tế bào trứng từ các nang noãn ngược 5’-TGGCTGTCGTCAGGGAAAAT-3’
có kích thước trung bình (3-7mm), các phức hợp và GAPDH (AF017079) với primer xuôi
COC có từ 2 lớp tế bào cumulus trở lên, đồng 5’-AGCAATGCCTCCTGTACCAC-3’ primer
đều tế bào chất được lựa chọn đưa vào nuôi cấy. ngược 5’-AAGCAGGGATGATGTTCTGG-3’.
Môi trường nuôi cấy thành thục tế bào trứng Điện di sản phẩm PCR bằng gel agarose 1,5%
là TCM 199 (chứa Earl’s salts, L-glutamine và (Bioline).
Hình 1. Hình ảnh đại diện
SF: nang noãn nhỏ; MF: nang noãn trung bình; LF: nang noãn lớn. A) tế bào trứng không có tế bào cumulus (DO);
B) tế bào cumulus (CC); C) phức hợp COC
KHKT Chăn nuôi số 266 - tháng 6 năm 2021 23
- DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI
2.2.4. Nội dung nghiên cứu trên tế bào trứng và/hoặc tế bào cumulus.
Nội dung 1. Đánh giá sự biểu hiện gen Cx43 2.3. Xử lý số liệu
theo giai đoạn phát triển nang noãn. Phức hợp Số liệu được xử lý theo phương pháp
COC được thu nhận từ nang noãn có kích thống kê mô tả và phân tích phương sai một
thước khác nhau (Hình 1): nhỏ (7mm). Đánh giá mức dạng Mean±SEM từ ít nhất 3 lần lặp lại. Giá
độ biểu hiện của gen Cx43 ở mức độ mRNA. trị điểm ảnh thu được từ gen mục tiêu sau khi
Nội dung 2. Đánh giá sự biểu hiện gen Cx43 phân tích bằng phần mềm ImageJ được chuẩn
theo giai đoạn nuôi cấy phức hợp COC in vitro. hóa tương ứng qua giá trị của gen GAPDH
Phức hợp COC có từ 2 lớp CC trở lên được lựa trước khi đưa vào phân tích.
chọn và nuôi cấy thành thục in vitro được sử
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
dụng để đánh giá mức độ biểu hiện của gen
Cx43 ở mức độ mRNA. 3.1. Đánh giá sự biểu hiện gen Cx43 theo giai
Nội dung 3. Đánh giá sự biểu hiện gen Cx43 đoạn phát triển nang noãn
ở tế bào trứng và tế bào cumulus tại thời điểm 22 RNA sau khi ly trích từ COC thu nhận
giờ sau nuôi cấy. Phức hợp COC sau khi nuôi từ các nang noãn khác nhau được dùng để
cấy 22 giờ được rửa và tách hoàn toàn tế bào khuếch đại gen mục tiêu, kết quả điện di sản
cumulus ra khỏi tế bào trứng để đánh giá mức phẩm và mức độ biểu hiện của gen mục tiêu và
độ biểu hiện của gen Cx43 ở mức độ mRNA đối chứng nội được trình bày ở Hình 2a và 2b.
Hình 2a. Hình ảnh đại diện Hình 2b. Mức độ biểu hiện của gen Cx43 trên
(A) điện di của gen Cx43, (B) điện di của gen GAPDH. COC thu từ các nang noãn có kích thước khác
M: thang đo 100bp. SF: COC thu từ nang noãn nhỏ SF: nang noãn nhỏ (7mm) bày dưới dạng Mean±SEM từ 3 lần lặp lại; a,b: P
- DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI
22 giờ (1,19±0,29) và có xu hướng giảm dần trình 8,5 giờ đầu IVM (Santiquet và ctv, 2013).
khi nuôi cấy đến thời điểm 44 giờ (0,43±0,06). Việc bổ sung gonadotropin vào nuôi trường
Kempisty và ctv (2013) cũng cho thấy biểu hiện nuôi cấy có tác động đến thành thục tế bào
của Cx43 mRNA trên tế bào trứng tăng trong chất và giãn nở các lớp tế bào cumulus. Trong
quá trình nuôi thành thục tế bào trứng (IVM). COC, FSH ở chuột, cừu và heo kích thích sự
Khi nghiên cứu sự biểu hiện Cx43 trong suốt mở rộng cumulus (Chen và ctv, 1994). Trong
8,5 giờ đầu IVM kết quả cho thấy rằng sự biểu quá trình phát triển của nang noãn, biểu hiện
hiện của Cx43 trên COC tăng ở 4,5 giờ nuôi của Cx43 tăng lên đáp ứng với nồng độ FSH,
cấy sau đó có xu hướng giữ ổn định (Santiquet sau đó giảm đi đáp ứng với mức tăng của LH
và ctv, 2013). Một số nghiên cứu trước đó đã dẫn đến khởi đầu sự giảm phân và rụng trứng
chứng minh rằng, gonadotropin ảnh hưởng (Norris và ctv, 2008). Trong nghiên cứu này,
đến khe liên kết nội bào giữa các tế bào hCG đã được bổ sung vào môi trường nuôi
cumulus trong suốt IVM. Trong điều kiện nuôi cấy cũng có thể góp phần gia tăng mức biểu
cấy có bổ sung eCG hoặc bổ sung cả eCG và hiện mRNA của gen Cx43 ở thời điểm 22 giờ
hCG biểu hiện của Cx43 tăng cao ở 4,5 giờ đầu sau nuôi cấy và sau đó giảm do sự giãn nở của
IVM và giảm dần ở giai đoạn còn lại của quá tế bào cumulus.
Hình 3a. Hình ảnh điện di đại diện Hình 3b. Mức độ biểu hiện của gen
(A) gen Cx43, (B) gen GAPDH. M: thang đo 100bp. mẫu Cx43 trên COC thu tại thời điểm 0,
COC thu tại thời điểm: 0, 22, 44h sau nuôi cấy 22 và 44 giờ sau nuôi cấy
3.3. Sự biểu hiện gen Cx43 ở tế bào trứng và tế bào cumulus tại thời điểm 22 giờ sau nuôi cấy
Hình 4a. Hình ảnh đại diện
(A) điện di của gen Cx43, (B) hình điện di của gen Hình 4b. Mức độ biểu hiện của gen
GAPDH. M: thang đo 100bp. DO: tế bào trứng không có Cx43 trên COC thu từ DO: tế bào trứng
CC, CC: tế bào cumulus không có CC, CC: tế bào cumulus
Từ Hình 4a và 4b cho thấy, tại thời điểm Cx43 ở mức mRNA trên tế bào CC cao hơn
22 giờ sau nuôi cấy, tế bào DO có mức biểu trên tế bào trứng (không có CC) ở thời điểm
hiện mRNA của Cx43 là 0,67±0,08, thấp 22 giờ sau nuôi cấy. Một số nghiên cứu trước
hơn mức biểu hiện ở tế bào CC là 1,07±0,05 đây đã chứng minh biểu hiện của Cx43 được
(P
Thêm tài liệu vào bộ sưu tập có sẵn:
Báo xấu
LAVA
ERROR:connection to 10.20.1.100:9315 failed (errno=111, msg=Connection refused)
ERROR:connection to 10.20.1.100:9315 failed (errno=111, msg=Connection refused)
Đang xử lý...
Thêm vào BST
Báo xấu
