Bước đầu đánh giá bất hoạt virut trên chế phẩm huyết tương tươi tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ BẤT HOẠT VIRUT TRÊN CHẾ PHẨM<br /> HUYẾT TƯƠNG TƯƠI TẠI BV TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC TP.HCM<br /> Trương Thị Kim Dung*, Châu Trần Minh Nghĩa*, Mai Thanh Truyền*, Nguyễn Duy Hiếu*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: Đánh giá chất lượng của chế phẩm huyết tương tươi bất hoạt virut được xử lý với bộ kit<br /> Theraflex Methylene blue Plasma và máy Maco Tronic, Maco Pharma.<br /> Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả tiến cứu.<br /> Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Các sản phẩm huyết tương tươi được điều chế và xử lý bất hoạt<br /> virut tại Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP HCM.<br /> Kết quả: Đơn vị huyết tương tươi bất hoạt virut đảm bảo an toàn, chất lượng và hiệu quả khi sử dụng. Các<br /> chỉ số đánh giá chất lượng như số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu, yếu tố VIII, protein đều đạt theo tiêu chuẩn<br /> chất lượng của UK. Quy trình điều chế chế phẩm huyết tương tươi bất hoạt virut hiện tại là hoàn toàn phù hợp<br /> và có thể triển khai thực hiện ngay.<br /> Từ khóa: Bất hoạt virut, Huyết tương tươi bất hoạt virut, Theraflex MB-Plasma System, Methylene Blue<br /> (MB).<br /> <br /> SUMMARY<br /> FIRST STAGE EVALUATION PATHOGEN INACTIVATION OF FRESH PLASMA USING<br /> THERAFLEX METHYLENE BLUE SYSTEM<br /> Trương Thi Kim Dung, Chau Tran Minh Nghia, Mai Thanh Truyen,<br /> Nguyen Duy Hieu* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 4 - 2011: 380 - 384<br /> Objective: Evaluate the quality of pathogen inactivation fresh frozen plasma is treated with Methylene blue<br /> Theraflex Plasma kit and Maco Tronic machine, Maco Pharma.<br /> Research Methodology: describe prospective study.<br /> Subjects and Methods: The product is prepared fresh plasma and pathogen inactivation treatment in the<br /> Blood Transfusion Hematology hospital.<br /> Results: MB treated plasma is safety, quality and efficiency. The quality indicators such as leukocyte count,<br /> platelet count, factor VIII, Total protein. The process of preparing products pathogen inactivation of fresh frozen<br /> plasma is suitablet and can be implemented.<br /> Key word: pathogen inactivation, Methylene blue treated Fresh Frozen Plasma, Theraflex MB-Plasma<br /> System, Methylene blue (MB).<br /> được nâng cao hơn bằng cách lọc bạch cầu và<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> bất hoạt virut. Lọc bạch cầu không chỉ làm giảm<br /> Hiện nay, các xét nghiệm sàng lọc đã được<br /> các phản ứng do truyền máu, các bất phù hợp<br /> cải tiến cùng với việc tuyển chọn người hiến<br /> HLA mà còn loại bỏ được các tác nhân gây bệnh<br /> máu nghiêm ngặt hơn góp phần đảm bảo an<br /> có kết hợp với tế bào bạch cầu như<br /> toàn không có nguy cơ lây nhiễm trong truyền<br /> cytomegalovirus (CMV) và Human T-cell<br /> máu. Ở một số quốc gia, việc đảm bảo an toàn<br /> * Bệnh viện Truyền máu Huyết học TPHCM<br /> Tác giả liên lạc: BS. CKII. Trương Thị Kim Dung, ĐT: 0913607677, Email: tynikd@yahoo.com<br /> <br /> 380<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> lymphotropic viruses (HTLV) I và II. Bất hoạt<br /> virut là làm bất hoạt các tác nhân lây nhiễm<br /> chưa được phát hiện do đang ở giai đoạn cửa sổ<br /> hoặc test bị lỗi. Thêm vào đó, việc bất hoạt virut<br /> cũng làm bất hoạt đi những tác nhân lây nhiễm<br /> nhưng chưa được thực hiện xét nghiệm sàng lọc<br /> như: West Nile Virut, Parvovirus B19,…<br /> <br /> - Hoàn thiện quy trình thực hiện điều chế<br /> sản phẩm huyết tương tươi đông lạnh có bất<br /> hoạt virut tại BV. Truyền máu Huyết Học.<br /> <br /> Việc sử dụng Methylen Blue (MB) trong quá<br /> trình bất hoạt virut đối với chế phẩm huyết<br /> tương được sử dụng để điều trị cho bệnh nhân<br /> đã được áp dụng trên hơn 10 quốc gia trên thế<br /> giới bao gồm: Anh, Pháp, Đức, Tây Ban Nha, Ý,<br /> Ai cập, Nga, Malaysia, Singapore, Brazil,<br /> Argentina.<br /> <br /> Đối tượng nghiên cứu<br /> <br /> Theo xu hướng phát triển của ngành truyền<br /> máu trên thế giới nói chung và trong nước nói<br /> riêng, Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học chúng<br /> tôi đã thử nghiệm để đưa vào sử dụng chế<br /> phẩm huyết tương tươi bất hoạt virut với hệ<br /> thống “MacoPharma Theraflex MB plasma”. Với<br /> mục tiêu đem đến sự an toàn cho người nhận<br /> máu, chúng tôi tiến hành nghiên cứu bước đầu<br /> thực hiện kỹ thuật bất hoạt virut trên sản phẩm<br /> là huyết tương tươi.<br /> <br /> Địa điểm nghiên cứu<br /> <br /> Mục tiêu nghiên cứu<br /> Mục tiêu tổng quát<br /> Đánh giá chất lượng của sản phẩm huyết<br /> tương tươi đông lạnh bất hoạt virut được xử lý<br /> với bộ kit Theraflex MB Plasma và máy Maco<br /> Tronic, Maco Pharma.<br /> <br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Thiết kế nghiên cứu<br /> Nghiên cứu mô tả tiến cứu.<br /> Các sản phẩm huyết tương tươi được điều<br /> chế và xử lý bất hoạt virut tại Bệnh viện Truyền<br /> Máu Huyết Học TP HCM.<br /> <br /> Thời gian nghiên cứu<br /> Tháng 08 năm 2011.<br /> Tại Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP<br /> Hồ Chí Minh.<br /> <br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> Vật liệu nghiên cứu<br /> Bộ kit bất hoạt virut: THERAFLEX – MB<br /> PLASMA bao gồm:<br /> - Màng lọc huyết tương có thể loại bỏ hồng<br /> cầu, bạch cầu, tiểu cầu trước khi được xử lý với<br /> MB.<br /> - 85µg Anhydro Methylen Blue có thể xử lý<br /> được 235ml đến 315ml huyết tương.<br /> - Màng lọc loại bỏ Methylen Blue sau khi đã<br /> hoàn tất việc chiếu đèn trên máy.<br /> <br /> Mục tiêu cụ thể<br /> Xác định các chỉ số chất lượng của sản phẩm<br /> huyết tương tươi sau khi đã bất hoạt virut: kiểm<br /> tra các chỉ số: số lượng tiểu cầu, số lượng bạch<br /> cầu, số lượng hồng cầu, Yếu tố VIII, Total<br /> Protein.<br /> Đối chiếu các chỉ tiêu chất lượng được kiểm<br /> tra với các tiêu chuẩn chất lượng của sản phẩm<br /> này theo tiêu chuẩn của Châu Âu với các tiêu<br /> chí.<br /> - Tiểu cầu: < 30 x 109/L.<br /> - Số lượng bạch cầu: < 5 x 106/ Đơn vị.<br /> <br /> Hình: Hệ thống kit Theraflex MB - Plasma<br /> <br /> - Định lượng yếu tố VIII: > 0.5 IU/mL.<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> 381<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> Máy bất hoạt virut Maco Tronic, Maco<br /> Pharma bao gồm các đặc điểm:<br /> <br /> - Kiểm tra viên MB đảm bảo toàn bộ viên<br /> này đã tan hoàn toàn vào túi huyết tương.<br /> <br /> - Máy được trang bị hệ thống “sodium<br /> lamp” với độ dài sóng 590nm; và ngăn chứa túi<br /> máu luôn duy trì nhiệt độ ≤ 22 oC.<br /> <br /> - Kiểm tra bộ lọc huyết tương đảm bảo toàn<br /> bộ huyết tương đã được lọc hết.<br /> <br /> - Quá trình thực hiện trên máy hoàn tất<br /> trong khoảng 20 phút với liều chiếu sáng là<br /> 180J/cm3.<br /> - Sau khi được chiếu đèn, lượng MB còn dư<br /> được loại bỏ bởi bộ lọc Blueflex.<br /> <br /> Phương pháp chọn mẫu<br /> Tiêu chuẩn chọn mẫu<br /> Chọn túi máu toàn phần để điều chế huyết<br /> tương tươi:<br /> - Người hiến máu đủ điều kiện hiến máu<br /> 450ml, đã hiến máu nhiều lần và có xét nghiệm<br /> sàng lọc âm tính trong tất cả các lần trước đó.<br /> - Túi máu toàn phần có thể tích 450ml và<br /> thời gian lấy máu không quá 15 phút, tính thời<br /> gian từ lúc lấy máu đến lúc hoàn thành đông<br /> lạnh không quá 08 giờ.<br /> - Điều chế huyết tương từ túi máu toàn<br /> phần: túi máu toàn phần được quay ly tâm lạnh<br /> ở RPF: 5000g trong 12 phút ở nhiệt độ 4oC, tách<br /> lấy phần huyết tương.<br /> - Túi huyết tương được chọn có thể tích từ<br /> 235ml đến 315ml.<br /> <br /> Tiêu chuẩn loại trừ<br /> - Túi máu của người hiến máu lần đầu.<br /> - Túi máu toàn phần 250ml hoặc 350ml.<br /> - Thời gian lấy máu quá 15 phút.<br /> - Thời gian tính từ lúc lấy máu đến lúc đông<br /> lạnh quá 08 giờ.<br /> <br /> Quy trình thực hiện<br /> Thao tác với bộ kit<br /> - Nối túi huyết tương với bộ kit bất hoạt<br /> virut, mở khóa để huyết tương chảy vào bộ lọc<br /> để loại bỏ bạch cầu.<br /> - Bẻ đường ống thông để huyết tương thấm<br /> vào viên Methylen blue và chảy vào túi chứa để<br /> chiếu đèn.<br /> <br /> 382<br /> <br /> - Lắc đều túi chứa huyết tương trong 20 giây<br /> để chắc rằng MB đã được hòa tan hoàn toàn vào<br /> huyết tương.<br /> - Đuổi khí ra khỏi túi chứa huyết tương, chú<br /> ý không làm mất đi huyết tương trong quá trình<br /> đuổi khí.<br /> - Hàn dây túi huyết tương đã được đuổi khí<br /> ra hết: hàn dây để bỏ đi phần túi rỗng chứ huyết<br /> tương ban đầu đã được chảy qua túi để chiếu<br /> đèn, giữ lại phần bộ kít có chứa bộ lọc loại bỏ<br /> MB sau khi đã hoàn tất việc chiếu đèn trên máy<br /> MACOTRONIC.<br /> <br /> Thao tác trên máy bất hoạt virut<br /> MACOTRONIC<br /> - Quét mã vạch của túi máu vào máy bất<br /> hoạt virut.<br /> - Đặt túi máu vào ngăn chiếu đèn của máy,<br /> đóng máy lại, chương trình sẽ tự động chiếu<br /> đèn, thời gian hoàn thành việc chiếu đèn trong<br /> khoảng 20 phút.<br /> - Lấy túi máu ra khỏi ngăn chiếu đèn.<br /> Cho huyết tương trong túi máu lọc qua bộ<br /> lọc để loại bỏ Methylen Blue sau khi hoàn tất<br /> việc chiếu đèn.<br /> Huyết tương được chảy qua túi chứa đã<br /> được loại bỏ Methylen Blue có màu vàng.<br /> Hàn dây túi huyết tương và lấy mẫu để kiểm<br /> tra các tiêu chuẩn chất lượng trước khi đưa vào<br /> tủ đông lạnh để lưu trữ.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Chúng tôi đã tiến hành quy trình bất hoạt<br /> virut trên 10 đơn vị huyết tương tươi và thu<br /> được kết quả như sau:<br /> <br /> Số lượng bạch cầu và tiểu cầu<br /> Theo tiêu chuẩn của Châu Âu ( của Anh)(4):<br /> Số lượng bạch cầu: < 5 x 106/Đơn vị.<br /> Số lượng tiểu cầu: < 30 x 109/L.<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> Bảng 1. Số lượng bạch cầu và tiểu cầu<br /> STT<br /> <br /> Số lượng<br /> <br /> Số lượng<br /> <br /> Thể tích<br /> <br /> Tiểu cầu<br /> (K/uL)<br /> <br /> (ml)<br /> <br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> 7<br /> 8<br /> 9<br /> 10<br /> <br /> Bạch cầu<br /> 6<br /> (x 10 / Đơn vị)<br /> 2,52<br /> 2,50<br /> 5,24<br /> 2,56<br /> 4,39<br /> 2,50<br /> 2,47<br /> 2,54<br /> 2,41<br /> 4,47<br /> <br /> 0,25<br /> 0,25<br /> 0,00<br /> 0,00<br /> 0,44<br /> 0,50<br /> 0,00<br /> 0,25<br /> 0,24<br /> 0,00<br /> <br /> 252<br /> 250<br /> 262<br /> 256<br /> 219<br /> 250<br /> 247<br /> 254<br /> 241<br /> 223<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> virut có thời gian lấy máu không quá 15 phút<br /> và thời gian từ lúc lấy máu đến lúc đông lạnh<br /> không quá 8 giờ nên giữ được yếu tố VIII đạt<br /> với tiêu chuẩn chất lượng đã đề ra. Và sau khi<br /> bất hoạt virut cũng không có ảnh hưởng gì<br /> lớn đến chỉ số này. Kết quả này phù hợp với<br /> các nghiên cứu khác(1,2).<br /> <br /> Chỉ số Protein<br /> Ngoài các tiêu chuẩn chất lượng theo tiêu<br /> chí của Châu Âu (của Anh)(3). Chúng tôi cũng<br /> tiến hành kiểm tra thêm chỉ số Protein và thu<br /> được các số liệu như sau:<br /> Protein (g/L)<br /> <br /> 6.00<br /> 68<br /> <br /> 5.00<br /> <br /> 66<br /> 64<br /> <br /> 4.00<br /> <br /> 62<br /> SL BC (X 10^6/ĐV)<br /> <br /> 3.00<br /> <br /> SL TC (10^9/L)<br /> <br /> 60<br /> <br /> Protein (g/L)<br /> <br /> 58<br /> <br /> 2.00<br /> <br /> 56<br /> 54<br /> <br /> 1.00<br /> <br /> 52<br /> 0.00<br /> <br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6<br /> <br /> 7<br /> <br /> 8<br /> <br /> 9<br /> <br /> Biểu đồ 1. Số lượng bạch cầu, tiểu cầu trên đơn vị<br /> huyết tương.<br /> Nhận xét: Số lượng bạch cầu và tiểu cầu<br /> nằm trong giới hạn chất lượng đạt 100%.<br /> <br /> Yếu tố VIII<br /> Theo tiêu chuẩn của Châu Âu ( của Anh)(4)<br /> FVIII: > 0,5 IU/mL<br /> <br /> 1<br /> 0.8<br /> <br /> Yế u t ố VIII (UI/mL)<br /> <br /> 0.6<br /> <br /> Linear (Y ếu t ố VIII<br /> (UI/mL))<br /> <br /> 0.4<br /> 0.2<br /> 0<br /> 5<br /> <br /> 10<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6<br /> <br /> 7<br /> <br /> 8<br /> <br /> 9<br /> <br /> 10<br /> <br /> Biểu đồ 3. Chỉ số Protein sau bất hoạt<br /> Chỉ số protein được kiểm tra từ những đơn<br /> vị huyết tương tươi có bất hoạt virut và 100% có<br /> số lượng Protein lớn hơn 57 g/L.<br /> Tham khảo với tiêu chuẩn của Châu Âu (<br /> của Anh)(3). Đối với huyết tương tươi không có<br /> bất hoạt virut là Protein > 50g/L(3,4).<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> <br /> 1.2<br /> <br /> 0<br /> <br /> 2<br /> <br /> 10<br /> <br /> 15<br /> <br /> Biểu đồ 2. Yếu tố VIII sau bất hoạt<br /> Theo quy trình của chúng tôi, túi máu<br /> được chọn để điều chế huyết tương bất hoạt<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Qua nghiên cứu 10 đơn vị huyết tương tươi<br /> bất hoạt virut với bộ kit Theraflex-MB plasma và<br /> chiếu đèn trên máy Macotronic, Macopharma<br /> tại Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học Tp. Hồ<br /> Chí Minh chúng tôi có kết luận rằng:<br /> 1.Đơn vị huyết tương tươi bất hoạt virut<br /> đảm bảo an toàn, chất lượng và hiệu quả khi sử<br /> dụng.<br /> 2.Các chỉ số đánh giá chất lượng như số<br /> lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu, yếu tố VIII,<br /> protein đều đạt theo tiêu chuẩn chất lượng của<br /> Châu Âu (của Anh)(3)<br /> <br /> 383<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> 3.Quy trình điều chế chế phẩm huyết tương<br /> tươi bất hoạt virut hiện tại là hoàn toàn phù<br /> hợp.<br /> <br /> 3.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 384<br /> <br /> Lambrecht B, Mohr H, Knuver-Hopf J, Schmitt H (1991). Photo<br /> inactivation of virues in human fresh plasma by phenothiazine<br /> dyes in combination with visible light. Vox Sang; 60:207-13.<br /> Politis C, Kavallierou L, Hantziara S, Katsea P, Triantaphylou V,<br /> Richardson C, et al (2007). Quality and safty of fresh frozen<br /> <br /> 4.<br /> <br /> plasma inactivated and leucoreduced with the theraflex<br /> methylene blue system including the Blueflex filter: 5<br /> years’experience. Vos Sang; 92:319-26.<br /> UK Blood Tranfusion & Tissue Transplantation Guidelines<br /> (2007). Guide to the reparation, use and quality assurance of<br /> blood components, 13th edition. Concil of Europe.<br /> UK Blood Tranfusion & Tissue Transplantation Guidelines,<br /> Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United<br /> Kingdom – 6th Edition.<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br />