YOMEDIA
CNSHDV: Nuôi cấy tế bào Động vật
Chia sẻ: Trung Hiếu
| Ngày:
| Loại File: PPT
| Số trang:42
476
lượt xem
77
download
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
• Có 2 kiểu TB:
- TB phụ thuộc vào chỗ neo để bám dính: Bám
vào đáy bình nuôi cấy và tạo thành lớp đơn bao
phủ toàn bộ bề mặt vật thể nuôi cấy
(confluence)
- TB không phụ thuộc vào chỗ neo (là những TB kết hợp với dịch lỏng trong cơ thể, ví dụ: TB máu)
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: CNSHDV: Nuôi cấy tế bào Động vật
- Chương 4. Nuôi cấy tế bào
động vật
- Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật
• Dụng cụ nuôi cấy:
- Bình flask đơn giản
- Máy lên men phức tạp có
màn hình điều khiển
- • Điều kiện nuôi cấy:
• Môi trường nuôi
cấy:
- Khí oxy
- Glucose
- Khí CO2
- Nước
- Amino acid
- Các muối
- • Huyết thanh ĐV: Thường dùng là FBS
- Cần thiết cho sự phát triển của TB ĐV
- Bổ sung 5 - 10% vào môi trường nuôi cấy TB
- • Chất chỉ thị dùng bổ sung vào môi trường
nuôi cấy TB ĐV: phenol red
- Các chất thải từ TB làm thay đổi pH môi
trường
- Môi trường thay đổi từ đỏ sang vàng
- • Kiểm soát nhiệt độ và pH:
- 37.0 OC
- pH 7.5
• Phương pháp đo sự phát triển của TB
ĐV:
- Đếm TB bằng buồng đếm hồng cầu
- Đo mật độ quang bằng máy quang phổ
- • Khử trùng bằng:
- Bổ sung kháng sinh vào môi trường nuôi cấy
- Lọc vô trùng
- Hấp khử trùng dụng cụ
- • Có 2 kiểu TB:
- TB phụ thuộc vào chỗ neo để bám dính: Bám
vào đáy bình nuôi cấy và tạo thành lớp đơn bao
phủ toàn bộ bề mặt vật thể nuôi cấy
(confluence)
- TB không phụ thuộc vào chỗ neo (là những TB
kết hợp với dịch lỏng trong cơ thể, ví dụ: TB
máu)
- • Confluence tối ưu để chuyển TB sang đĩa mới là
70-80%
- • Có 2 dạng TB ĐV được nuôi cấy:
- TB nuôi cấy sơ cấp: tách ra từ mô mới, vòng đời
nuôi cấy bị giới hạn, được xử lý bằng trypsin để
tách thành những TB đơn như TB biểu bì, nguyên
bào sợi
- Dòng TB liên tục: được biến nạp làm mất đi tính
nhạy đối với các nhân tố kiểm soát sự phát triển,
tạo ra những dòng TB bất tử, được tạo hình lại;
dễ nuôi cấy hơn TB sơ cấp
- Các điều kiện nuôi cấy TB ĐV
• Số thế hệ TB: số lần TB được tách
chuyển (“split”) từ đĩa và nuôi cấy sang
đĩa khác
- • Đệm phosphate không có Ca2+ Mg2+ (PBS) được
dùng để rửa và loại bỏ huyết thanh trong môi
trường tránh ức chế chức năng của Trypsin-
EDTA.
- Calcium cũng ức chế chức năng của Trypsin-EDTA.
- Phải làm ấm trước khi sử dụng để TB không bị sốc
bởi dung dịch lạnh
- • Enzym dùng để tách TB khỏi đĩa nuôi cấy là trypsin:
- Trypsin cắt nối peptid (LYS hoặc ARG) trong
fibronectin của chất nền ngoại bào.
- EDTA nối với ion calcium trong môi trường
- Trypsin sẽ tự phân hủy và mất hoạt tính nếu trong
bể nước hơn 20 phút.
- Trypsin hóa TB quá lâu sẽ làm giảm khả năng sống
của TB
- • Chất tẩy: dùng để loại bỏ TB còn lại trong đĩa
hoặc ống nuôi cấy
• Bể nước: dùng để làm ấm môi trường, PBS, ...
Thêm tài liệu vào bộ sưu tập có sẵn:
Báo xấu
LAVA
ERROR:connection to 10.20.1.100:9315 failed (errno=111, msg=Connection refused)
ERROR:connection to 10.20.1.100:9315 failed (errno=111, msg=Connection refused)
Đang xử lý...
Thêm vào BST
Báo xấu
