Độc tính của xi măng nhựa tự dán qua rào cản ngà trên nguyên bào sợi chuột 3T3

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> ĐỘC TÍNH CỦA XI MĂNG NHỰA TỰ DÁN<br /> QUA RÀO CẢN NGÀ TRÊN NGUYÊN BÀO SỢI CHUỘT 3T3<br /> Đặng Thị Lan Anh*, Trần Xuân Vĩnh**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: Đánh giá độc tính của xi măng nhựa tự dán lưỡng trùng hợp (G Cem) qua rào cản ngà trên tế bào<br /> nguyên bào sợi 3T3, so sánh với xi măng Glass Ionomer tăng cường nhựa (Fuji Plus) và xi măng Glass Ionomer<br /> (Fuji I).<br /> Phương pháp nghiên cứu: Thu thập 48 răng khôn hàm trên. Tiến hành tạo các xoang I trên mặt nhai. Sau<br /> khi tách rời thân răng, thu được một bề mặt ngà phẳng và bề dày lớp ngà răng còn lại được điều chỉnh bằng<br /> 0,5mm. Sau đó, chia các xoang thành 3 nhóm và đặt vào ba loại xi măng: Nhóm I: Fuji I, Nhóm 2: Fuji Plus,<br /> Nhóm 3: G Cem. Dùng sáp inay dán kín bề mặt xoang. Các thân răng được ngâm trong môi trường nuôi cấy<br /> trong 24 giờ và độc tính của dung dịch thu được trên nguyên bào bào sợi 3T3 được đánh giá định lượng qua thử<br /> nghiệm MTS trên 5 nồng độ. Dữ liệu được phân tích bằng phép kiểm Kruskall Wallis và phép kiểm Mann-<br /> Whitney ở độ tin cậy 95%.<br /> Kết quả: Các loại xi măng đều gây giảm tỉ lệ tế bào sống của nguyên bào sợi 3T3, theo thứ tự: Fuji I gây<br /> giảm tỉ lệ tế bào sống ít nhất, Fuji Plus gây giảm tỉ lệ tế bào sống trung bình, G Cem gây giảm tỉ lệ tế bào sống cao<br /> nhất. Tuy nhiên các loại xi măng đều không gây độc cấp tính (ISO 10993-5:2009) (tỉ lệ tế bào sống >70%).<br /> Kết luận: Nghiên cứu sử dụng mô hình rào cản ngà răng, điều này mô phỏng thực tế lâm sàng, xi măng<br /> gắn không tiếp xúc trực tiếp mà ngăn cách với mô tủy qua bề dày lớp ngà còn lại. Khi bề dày lớp ngà >= 0,5mm xi<br /> măng gắn không gây độc (độc cấp tính) với tế bào (ISO 10993-5:2009).<br /> Từ khóa: Tương hợp sinh học, độc tính tế bào, thử nghiệm rào cản ngà, xi măng nhựa tự dán, nguyên bào<br /> sợi 3T3.<br /> ABSTRACT<br /> CYTOTOXICITY OF SELF ADHESIVE RESIN CEMENT BY DENTIN BARRIER TEST<br /> ON 3T3 MOUSE FIBROBLASTS<br /> Dang Thi Lan Anh, Tran Xuan Vinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement Vol. 22 - No 2- 2018: 5- 11<br /> <br /> Objectives: The present study evaluated the cytotoxic effects of self adhesive resin cement (G Cem) by dentin<br /> barrier test on 3T3 fibroblasts, compared with Resin Modified Glass Ionomer cement (Fuji Plus) and Glass<br /> Ionomer cement (Fuji I)<br /> Method: Fourty-eight human upper wisdom teeth were included. Class I cavity preparations were prepared<br /> on occlusal surfaces. After crown separation, a flat dentinal surface was provided and RDT (remaining dentinal<br /> thickness) was adjusted at 0.5 mm. Then, cavities were treated in three groups with experimental cements: Group<br /> 1: Fuji I, Group 2: Fuji Plus, Group 3: G Cem. Blue inlay wax sealed the cavities. Crowns were immersed in<br /> culture medium for 24 hours and the cytotoxicity of the resultant toxic medium on 3T3 mouse fibroblast was<br /> measured quantitatively with MTS assay in 5 serial dilutions. Data were analyzed with Kruskall Wallis test and<br /> Mann-Whitney test at 95% significance level.<br /> Results: All experimental materials decreased the cell metabolic activity: Fuji I decreased the cell survival<br /> * Bệnh viện Răng Hàm Mặt Trung Ương, thành phố Hồ Chí Minh<br /> **Bộ môn Nha khoa cơ sở, Khoa Răng-Hàm-Mặt, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: : TS. Trần Xuân Vĩnh ĐT: 0946920818 Email: vinhdentist@yahoo.com<br /> Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 5<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 2 * 2018<br /> <br /> rate the least, Fuji Plus came next, G Cem decreased the cell survival rate the most. However, all cements did not<br /> cause acute cytotoxicity (ISO 10993-5:2009)( all cell survival rate >70%)<br /> Conclusion: The study used the dentin barrier model, which simulates clinical reality, cement that does not<br /> contact directly but separates from the pulp tissue through the remaining dentinal thickness. When the thickness<br /> of dentin>= 0.5mm, cement is not toxic (acute toxic) to the cell (ISO 10993-5: 2009).<br /> Keywords: Biocompatibility, cytotoxicity, dentin barrier test, self ahesive resin cement, 3T3 mouse<br /> fibroblast.<br /> MỞ ĐẦU 2009, Ulker HE và Sengun A(14) kết luận trừ<br /> <br /> Từ thực tế gắn những phục hình cố định trên MaxCem, các loại xi măng nhựa tự dán gây độc<br /> răng tủy sống, sẽ có sự tiếp xúc trực tiếp giữa xi tế bào. Trong khi đó, năm 2016, Fonseca(3) kết<br /> măng gắn với phức hợp ngà tủy, được cho là luận xi măng nhựa tự dán không gây độc cho tế<br /> một trong những nguyên nhân gây nhạy cảm và bào. Từ các kết luận khác nhau như vậy, cho<br /> ê buốt sau can thiệp. Do đó, ngoài các đặc điểm thấy đây cũng là vấn đề cần được nghiên cứu<br /> cơ học đảm bảo khả năng gắn dính, đặc điểm<br /> thêm.<br /> tương hợp sinh học của xi măng gắn là một yêu<br /> Nhiều nghiên cứu độc tính tế bào in vitro<br /> cầu quan trọng và cần thiết.<br /> dựa trên đánh giá mức độ sống của tế bào khi<br /> So sánh với các xi măng gắn truyền thống tiếp xúc với dịch chiết trực tiếp của vật liệu. Tuy<br /> như xi măng Glass Ionomer (GIC) và Glass nhiên, trên thực tế, khả năng gây độc của vật liệu<br /> Ionomer tăng cường nhựa (RMGIC), xi măng nha khoa, phụ thuộc vào khả năng của vật liệu<br /> nhựa có những ưu điểm về thẩm mỹ và khả khuếch tán qua ngà răng và tích lũy trong tủy ở<br /> năng gắn dính. Tuy nhiên xi măng được cho là nồng độ đủ cao để gây ra các vấn đề trên tủy. Vì<br /> vậy, mô hình sử dụng rào cản ngà răng là<br /> gây độc do chứa các monomer nhựa và qui trình<br /> phương pháp tốt để đánh giá các độc tính trên<br /> xử lí ngà răng bằng acid trước khi gắn làm tăng<br /> tủy của vật liệu nha khoa.<br /> tính thấm ngà. Xi măng nhựa tự dán ra đời năm<br /> Vì vậy, nghiên cứu in vitro này được thực<br /> 2002, với các đặc điểm: lưỡng trùng hợp đảm hiện nhằm đánh giá độc tính của xi măng nhựa<br /> bảo chất lượng polymer hóa của xi măng, kết tự dán lưỡng trùng hợp (G-Cem) qua rào cản<br /> hợp tác nhân dán và xi măng trong một sản ngà răng trên tế bào nguyên bào sợi 3T3, so sánh<br /> phẩm, rút gọn qui trình gắn chỉ gồm một bước, với hai loại xi măng thông dụng là xi măng Glass<br /> giảm thời gian trên lâm sàng. Do không cần các Ionomer tăng cường nhựa (Fuji Plus) và xi măng<br /> Glass Ionomer (Fuji I).<br /> bước xử lí bề mặt răng trước khi gắn, lớp mùn<br /> ngà không bị loại bỏ, nên được cho là không gây ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> nhạy cảm sau gắn. Sự dán dính vào các cấu trúc Đối tượng nghiên cứu<br /> mô răng không có sự hình thành của các đuôi Dòng tế bào nguyên bào sợi chuột 3T3 được<br /> nhựa trong ống ngà(2), từ đó có thể ngăn chặn cung cấp từ phòng thí nghiệm trung tâm sinh<br /> làm giảm tác động gây hại cho tủy(6,14). Với tính học phân tử trường Đại học Y Dược Thành Phố<br /> Hồ Chí Minh.<br /> thuận tiện và đa năng, xi măng nhựa tự dán hiện<br /> được nhiều nhà lâm sàng lựa chọn. Tuy nhiên, Các loại xi măng sử dụng trong nghiên cứu<br /> các nghiên cứu đánh giá độc tính tế bào của xi (Bảng 1).<br /> măng này vẫn chưa được thực hiện nhiều. Năm<br /> <br /> <br /> <br /> 6 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 1. Các loại xi măng sử dụng trong nghiên cứu<br /> Vật liệu Loại Số lô Cơ chế đông Thành phần<br /> Bột: fluoroaluminosilicate glass<br /> Fuji I GIC 1607111 Hóa học<br /> Lỏng: polyacrylic acid, nước,<br /> Bột: fluoroaluminosilicate glass;<br /> Fuji Plus RMGIC 1605261 Hóa học Lỏng: copolymer of acrylic and maleic acids, HEMA, UDMA, tartaric acid, nước, chất<br /> khơi mào hóa trùng hợp<br /> Xi măng Bột: fluoro-aluminio-silicate glass<br /> Lưỡng<br /> G cem nhựa 1511261 Lỏng: thành phần nhựa có tính axit, nước, UDMA, Dimethacrylates, 4-META,<br /> trùng hợp<br /> tự dán phosphoric ester monomer, camphorquinone<br /> <br /> Quy trình nghiên cứu môi trường ở tất cả các giếng, rửa sạch nhẹ<br /> Bốn mươi tám thân răng khôn hàm trên nhàng tế bào bằng dung dịch muối đệm<br /> được cắt rời khỏi chân răng. Sau đó, bề mặt phía phosphate PBS.<br /> dưới của thân răng được mài cho đến khi được<br /> Cho 100 µl dịch chiết xi măng vào giếng<br /> bề mặt ngà phẳng ngang mức trần tủy (không<br /> tương ứng (02 giếng/từng nồng độ dịch chiết của<br /> còn thấy được sừng tủy). Sau đó, từ phía mặt<br /> nhai thân răng, sửa soạn xoang hình trụ tròn với mỗi loại xi măng) rồi tiếp tục ủ 24 giờ.<br /> độ sâu của xoang được điều chỉnh cho đến khi Sau 24 giờ, hút bỏ dịch chiết. Rửa với 100<br /> bề dày ngà răng phía trên buồng tủy dày 0,5 µl BPS. Thêm vô mỗi giếng 100 µl môi trường<br /> mm. Bề mặt ngà răng phía tủy được xoi mòn với DMEM và 20 µl MTS, trộn đều, ủ trong trong<br /> axit citric 50% trong 30 giây để loại bỏ lớp mùn<br /> tủ ủ ở 370C, 5% CO2 trong 4 giờ. Tiến hành đo<br /> ngà do tác động mài răng. Sau đó, hệ thống thân<br /> mật độ quang (OD) ở bước sóng 492 nm bằng<br /> răng được hấp tiệt trùng.<br /> máy đo OD. Mô hình nghiên cứu sử dụng<br /> chứng âm là môi trường DMEM/F12 và chứng<br /> dương là dịch chiết latex theo tiêu chuẩn ISO<br /> 10993-5:2009(12).<br /> Số đo OD được chuyển thành tỷ lệ phần<br /> trăm tế bào sống theo công thức:<br /> <br /> Hình 1. Hệ thống thân răng trong nghiên cứu. 100 x OD492e<br /> Trộn từng loại xi măng theo hướng dẫn của % Tế bào sống =<br /> OD492b<br /> nhà sản xuất, cho vào xoang đã sửa soạn trong<br /> thân răng, chờ đến khi xi măng đông. Sử dụng<br /> OD492e: mật độ quang của dịch chiết vật liệu<br /> sáp cứng inlay (Kerr, USA) che kín bề mặt xoang<br /> OD492b: mật độ quang của chứng âm<br /> phía mặt nhai thân răng.<br /> Nếu tỉ lệ sống