Độc tính của xi măng nhựa tự dán trên nguyên bào sợi chuột 3t3

TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC<br /> <br /> ĐỘC TÍNH CỦA XI MĂNG NHỰA TỰ DÁN<br /> TRÊN NGUYÊN BÀO SỢI CHUỘT 3T3<br /> Đặng Thị Lan Anh1, Trần Xuân Vĩnh2<br /> 1<br /> <br /> Bệnh viện Răng Hàm Mặt Trung ương, thành phố Hồ Chí Minh<br /> Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh<br /> <br /> 2<br /> <br /> Nghiên cứu đánh giá độc tính của xi măng nhựa tự dán (G Cem), xi măng GI tăng cường nhựa (Fuji<br /> Plus) và xi măng GI (Fuji I). Nguyên bào sợi chuộc 3T3 tiếp xúc với dịch chiết trực tiếp được pha loãng thành<br /> nhiều nồng độ của mỗi loại xi măng. Xác định tỉ lệ sống của tế bào (%) bằng thực hiện thử nghiệm MTS.<br /> Trung vị ± khoảng tứ phân vị của tỉ lệ sống của tế bào (%) ở các nhóm được so sánh với nhau sử dụng phép<br /> kiểm Kruskall Wallis và phép kiểm Mann - Whitney. Kết quả độc tính tế bào phụ thuộc loại xi măng: Fuji I<br /> không gây độc cấp tính; Fuji Plus gây độc cấp tính, tuy nhiên, khi pha loãng đến nồng độ 1/8, không còn gây<br /> độc; G-Cem gây độc tế bào cao nhất trong ba loại vật liệu nghiên cứu (tỉ lệ sống của nguyên bào sợi 3T3 <<br /> 70% ở tất cả các nồng độ dịch chiết).<br /> Từ khóa: tương hợp sinh học, độc tính tế bào, xi măng gắn, xi măng nhựa tự dán, nguyên bào sợi<br /> 3T3, xi măng glass ionomer tăng cường nhựa, xi măng glass ionomer<br /> <br /> I. ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Từ thực tế thực hiện phục hình cố định<br /> <br /> 2]. Xi măng Glass Ionomer tăng cường nhựa<br /> <br /> trên răng tủy sống, có sự tiếp xúc trực tiếp<br /> <br /> (RMGIC) ra đời là sự kết hợp của GIC với các<br /> monomer nhựa nhằm cải thiện các đặc điểm<br /> <br /> giữa xi măng gắn với phức hợp ngà tủy, được<br /> cho là một trong những nguyên nhân gây<br /> <br /> cơ học của xi măng GIC. Tuy nhiên, xi măng<br /> GI tăng cường nhựa phóng thích flour gây độc<br /> <br /> nhạy cảm và ê buốt sau can thiệp. Như vậy,<br /> ngoài các đặc điểm cơ học đảm bảo cho khả<br /> <br /> tế bào và ngoài ra, hầu hết các tác giả đều<br /> cho rằng các monomer tự do không được<br /> <br /> năng gắn dính của xi măng, đặc điểm tương<br /> hợp sinh học của xi măng gắn là một yêu cầu<br /> <br /> trùng hợp có khả năng xuyên qua các ống ngà<br /> <br /> quan trọng và cần thiết.<br /> <br /> và gây độc tế bào [3; 4; 5]. Một số nghiên cứu<br /> kết luận xi măng RMGIC độc tính cao hơn so<br /> <br /> Ra đời từ năm 1969, xi măng Glass<br /> Ionomer (GIC) có khả năng gắn hóa học vào<br /> <br /> với GIC truyền thống [4; 6; 7].<br /> <br /> cấu trúc răng, khả năng phóng thích fluor, và<br /> khả năng tái khoáng hóa thương tổn sâu răng.<br /> <br /> nhựa, xi măng nhựa có những ưu điểm về<br /> <br /> Tuy nhiên, một số nghiên cứu in vitro kết luận<br /> flour gây độc lên tế bào tủy răng ở người bằng<br /> việc ngăn cản sự tăng trưởng của tế bào, sự<br /> tăng sinh, hoạt động nội bào, tổng hợp protein<br /> và gây ra sự chết tế bào theo chương trình [1;<br /> <br /> So sánh với xi măng GI và GI tăng cường<br /> thẩm mỹ và khả năng gắn dính. Tuy nhiên, xi<br /> măng được cho là gây độc do chứa các<br /> monomer nhựa và qui trình xử lí ngà răng<br /> bằng acid trước khi gắn làm tăng tính thấm<br /> ngà.<br /> Xi măng nhựa tự dán ra đời năm 2002, với<br /> <br /> Địa chỉ liên hệ: Trần Xuân Vĩnh, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại<br /> học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh<br /> Email: vinhdentist@yahoo.com<br /> Ngày nhận: 25/12/2017<br /> Ngày được chấp thuận: 18/3/2018<br /> <br /> 34<br /> <br /> các đặc điểm: lưỡng trùng hợp đảm bảo chất<br /> lượng polymer hóa của xi măng, kết hợp tác<br /> nhân dán và xi măng trong một sản phẩm, rút<br /> gọn qui trình gắn chỉ gồm một bước, giảm thời<br /> TCNCYH 112 (3) - 2018<br /> <br /> TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC<br /> gian trên lâm sàng. Do không cần các bước<br /> <br /> Vì vậy, nghiên cứu in vitro này được thực<br /> <br /> xử lí bề mặt răng trước khi gắn, lớp mùn ngà<br /> <br /> hiện nhằm đánh giá độc tính trên tế bào<br /> <br /> không bị loại bỏ, nên được cho là không gây<br /> <br /> nguyên bào sợi 3T3 của xi măng nhựa tự dán<br /> <br /> nhạy cảm sau gắn. Sự dán dính vào các<br /> <br /> lưỡng trùng hợp (G-Cem) theo phương pháp<br /> <br /> cấu trúc mô răng không có sự hình thành của<br /> <br /> dịch chiết trực tiếp, so sánh với hai loại xi<br /> <br /> các đuôi nhựa trong ống ngà, từ đó có thể<br /> <br /> măng thông dụng là xi măng Glass Ionomer<br /> <br /> ngăn chặn làm giảm tác động gây hại cho tủy<br /> <br /> tăng cường nhựa (Fuji Plus) và xi măng Glass<br /> <br /> [5; 8; 9].<br /> <br /> Ionomer (Fuji I).<br /> <br /> Với tính thuận tiện và đa năng, xi măng<br /> nhựa tự dán hiện được nhiều nhà lâm sàng<br /> <br /> II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> <br /> lựa chọn. Tuy nhiên, các nghiên cứu đánh giá<br /> độc tính tế bào của xi măng này chưa được<br /> <br /> 1. Đối tượng<br /> - Dòng tế bào nguyên bào sợi chuột 3T3:<br /> <br /> thực hiện nhiều. Năm 2015, Rita TrumpaiteVanagiene [10] nghiên cứu dịch chiết trực tiếp<br /> <br /> được cung cấp từ phòng thí nghiệm Trung<br /> <br /> của xi măng trên nguyên bào sợi nướu răng<br /> <br /> tâm Sinh học phân tử Trường Đại học Y Dược<br /> <br /> đã kết luận xi măng nhựa tự dán gây độc tế<br /> bào. Hiện tại chưa có nghiên cứu nào ở Việt<br /> <br /> Thành Phố Hồ Chí Minh.<br /> <br /> Nam đánh giá độc tính tế bào của xi măng<br /> nhựa tự dán.<br /> <br /> nhóm chứng: Fuji plus, Fuji I.<br /> <br /> - Vật liệu: Nhóm nghiên cứu: G - Cem;<br /> <br /> Bảng 1. Các loại xi măng sử dụng trong nghiên cứu<br /> Vật liệu<br /> Fuji I<br /> <br /> Fuji Plus<br /> <br /> Loại<br /> GIC<br /> <br /> RMGIC<br /> <br /> Số lô<br /> 1607111<br /> <br /> 1605261<br /> <br /> Xi măng<br /> G cem<br /> <br /> nhựa tự<br /> dán<br /> <br /> 1511261<br /> <br /> Cơ chế<br /> đông<br /> <br /> Thành phần<br /> <br /> Hóa học<br /> <br /> Bột: fluoroaluminosilicate glass<br /> Lỏng: polyacrylic acid, nước<br /> <br /> Hóa học<br /> <br /> Lưỡng<br /> trùng hợp<br /> <br /> 2. Phương pháp<br /> Thời gian nghiên cứu: Tháng 10/2016<br /> đến tháng 4/2017.<br /> Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu in vitro<br /> có nhóm chứng.<br /> TCNCYH 112 (3) - 2018<br /> <br /> Bột: fluoroaluminosilicate glass;<br /> Lỏng: copolymer of acrylic and maleic acids,<br /> HEMA, UDMA, tartaric acid, nước, chất khơi<br /> mào hóa trùng hợp<br /> Bột: fluoro-aluminio-silicate glass<br /> Lỏng: thành phần nhựa có tính axit, nước,<br /> UDMA, Dimethacrylates, 4-META, phosphoric<br /> ester monomer, camphorquinone<br /> Quy trình nghiên cứu<br /> - Nghiên cứu đánh giá độc tính của của 3<br /> loại xi măng với nguyên bào sợi 3T3 bằng thử<br /> nghiệm MTS.<br /> - Trộn từng loại xi măng theo hướng dẫn<br /> 35<br /> <br /> TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC<br /> của nhà sản xuất, cho vào khuôn cao su hình<br /> trụ tròn, đường kính đáy 4 mm, chờ đến khi xi<br /> măng đông.<br /> <br /> liệu.<br /> OD492b: mật độ quang của chứng âm.<br /> <br /> - Ngâm khối xi măng vào môi trường<br /> DMEM/F12 theo tiêu chuẩn ISO 1099312:2012 [11]. Sau 24 giờ, thu được dịch chiết<br /> xi măng nồng độ 100% (nồng độ 1). Pha loãng<br /> dịch chiết thành các nồng độ 1/2, 1/4, 1/8,<br /> 1/16.<br /> <br /> Nếu tỉ lệ sống < 70%: vật liệu có khuynh<br /> hướng độc.<br /> Lặp lại thử nghiệm 3 lần.<br /> Các biến số trong nghiên cứu<br /> Biến số độc lập<br /> <br /> - Chuyển tế bào 3T3 lên đĩa 96 giếng với<br /> mật độ 1 x 104 tế bào/ml rồi ủ 24 giờ. Sau đó,<br /> hút bỏ môi trường ở tất cả các giếng, rửa<br /> sạch nhẹ nhàng tế bào bằng dung dịch muối<br /> đệm phosphate PBS.<br /> <br /> - Loại vật liệu: Fuji I, Fuji Plus, G - Cem.<br /> - Năm nồng độ dịch chiết: 1, 1/2, 1/4, 1/8,<br /> 1/16.<br /> Biến số phụ thuộc: biến số định lượng.<br /> <br /> - Cho 100 µl dịch chiết xi măng vào giếng<br /> tương ứng (02 giếng/từng nồng độ dịch chiết<br /> của mỗi loại xi măng) rồi tiếp tục ủ 24 giờ.<br /> - Sau 24 giờ, hút bỏ dịch chiết. Rửa với<br /> 100 µl BPS. Thêm vô mỗi giếng 100 µl môi<br /> trường DMEM và 20 µl MTS, trộn đều, ủ trong<br /> trong tủ cấy ở 370C, 5% CO2 trong 4 giờ. Tiến<br /> hành đo mật độ quang (OD) ở bước sóng 492<br /> nm bằng máy đo OD. Mô hình nghiên cứu sử<br /> dụng chứng âm là môi trường DMEM/F12 và<br /> chứng dương là dịch chiết latex theo tiêu<br /> chuẩn ISO 10993 - 5:2009 [12].<br /> Số đo OD được chuyển thành tỷ lệ phần<br /> trăm tế bào sống theo công thức:<br /> 100 x OD492e<br /> % tế bào sống =<br /> OD492b<br /> <br /> 36<br /> <br /> OD492e: mật độ quang của dịch chiết vật<br /> <br /> - Tỉ lệ sống của tế bào (%).<br /> 3. Xử lý số liệu: Số liệu được xử lý bằng<br /> phần mềm SPSS 16.0.<br /> Thống kê mô tả: Số liệu được trình bày<br /> dưới dạng trung vị và khoảng tứ phân vị.<br /> Thống kê suy lý<br /> Sử dụng phép kiểm Kruskal-Wallis, MannWhitney U để so sánh tỉ lệ sống của tế bào ủ<br /> với dịch chiết trực tiếp ở từng nồng độ của 3<br /> loại xi măng. Các kiểm định với giá trị p < 0,05<br /> được cho là có ý nghĩa thống kê.<br /> 4. Đạo đức nghiên cứu<br /> Nghiên cứu in vitro đảm bảo các nguyên<br /> tắc đạo đức trong nghiên cứu y sinh học.<br /> <br /> III. KẾT QUẢ<br /> <br /> TCNCYH 112 (3) - 2018<br /> <br /> TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC<br /> Bảng 2. Tỷ lệ phần trăm tế bào sống của nguyên bào sợi 3T3 khi tiếp xúc với dịch chiết<br /> trực tiếp của Fuji I, Fuji Plus, G-Cem ở các nồng độ 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16<br /> Loại<br /> vật liệu<br /> <br /> Nồng độ dịch chiết trực tiếp<br /> Trung vị (Khoảng tứ phân vị)<br /> Chưa pha loãng<br /> <br /> Nồng độ 1/2<br /> <br /> Nồng độ 1/4<br /> <br /> Nồng độ 1/8<br /> <br /> Nồng độ 1/16<br /> <br /> Fuji I<br /> <br /> 70,45<br /> (70,16 - 70,82)<br /> <br /> 90,71<br /> (82,13 91,36)<br /> <br /> 99,88<br /> (97,97 - 100,06)<br /> <br /> 100,05<br /> (99,06 - 100,14)<br /> <br /> 100,08<br /> (99,59 - 100,18)<br /> <br /> Fuji<br /> Plus<br /> <br /> 46,08<br /> (43,95 - 47,01)<br /> <br /> 50,75<br /> (50,43 50,97)<br /> <br /> 68,54<br /> (66,50 - 70,62)<br /> <br /> 97,68<br /> (93,83 - 100,14)<br /> <br /> 99,14<br /> (96,98 - 100,18)<br /> <br /> G Cem<br /> <br /> 43,23<br /> (39,09 - 45,91)<br /> <br /> 45,15<br /> (44,89 45,65)<br /> <br /> 47,48<br /> (46,86 - 48,50)<br /> <br /> 50,79<br /> (50,04 - 51,72)<br /> <br /> 66,26<br /> (64,30 - 67,38)<br /> <br /> Chứng<br /> âm<br /> <br /> 100,00<br /> <br /> Chứng<br /> dương<br /> <br /> 53,94<br /> <br /> Biểu đồ 1. Tỷ lệ phần trăm tế bào sống của nguyên bào sợi 3T3 khi tiếp xúc với dịch chiết<br /> trực tiếp của Fuji I, Fuji Plus, G-Cem ở các nồng độ 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16<br /> TCNCYH 112 (3) - 2018<br /> <br /> 37<br /> <br /> TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC<br /> <br /> Biểu đồ 2. Tỷ lệ phần trăm tế bào sống của nguyên bào sợi 3T3 khi tiếp xúc với dịch chiết<br /> trực tiếp của Fuji I, Fuji Plus ở các nồng độ 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16<br /> *: p < 0,05 (Kiểm định Mann-Whitney U).<br /> <br /> Biểu đồ 3. Tỷ lệ phần trăm tế bào sống của nguyên bào sợi 3T3 khi tiếp xúc với dịch chiết<br /> trực tiếp của Fuji I, G-Cem ở các nồng độ 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16<br /> *: p < 0,05 (Kiểm định Mann-Whitney U).<br /> <br /> 38<br /> <br /> TCNCYH 112 (3) - 2018<br /> <br />