zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Luận Văn - Báo Cáo

» Báo cáo khoa học

Góp phần nghiên cứu và ứng dụng kỹ thuật PCR đa mồi (Multiplex) trong phân loại Escherichia Coli gây tiêu chảy

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:6

Báo xấu

63
lượt xem 10
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tiêu chảy là một bệnh khá phổ biến ở các nước trên thế giới, đặc biệt tại các nước đang phát triển. Tỷ lệ mắc và tử vong do tiêu chảy rất cao ở trẻ em. Theo ước tính của Tổ chức Y tế thế giới (WHO), hàng năm có trên 1 tỷ lượt trẻ em dưới 5 tuổi bị tiêu chảy với gần 5 triệu trẻ tử vong [5]. ë nước ta, tiêu chảy là nguyên nhân quan trọng gây suy dinh d−ỡng, là nguyên nhân gây tử vong đứng hàng thứ 2 ở trẻ em (chỉ xếp sau...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Góp phần nghiên cứu và ứng dụng kỹ thuật PCR đa mồi (Multiplex) trong phân loại Escherichia Coli gây tiêu chảy

TCNCYH 22 (2) - 2003 Gãp phÇn nghiªn cøu vµ øng dông kü thuËt PCR ®a måi (multiplex) trong ph©n lo¹i Escherichia coli g©y tiªu ch¶y TrÇn TrÝ TuÖ1, Lª V¨n Phñng2 1 Trung t©m Y tÕ dù phßng Lµo cai 2 §¹i häc Y Hµ Néi §é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu cña ph¶n øng PCR ®a måi trong x¸c ®Þnh c¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y ®· ®−îc nghiªn cøu chi tiÕt. Sù ph©n bè cña 300 chñng E. coli ph©n lËp tõ c¸c bÖnh phÈm: ph©n (150), n−íc tiÓu (40), m¸u (30), dÞch mËt (40), mñ (40) còng ®· ®−îc x¸c ®inh b»ng PCR ®a måi dïng trong tiªu ch¶y. ADN ®−îc t¸ch chiÕt tõ c¸c chñng E. coli vµ c¸c chñng chuÈn kh¸c thuéc Enterobacteriaceae, sau ®ã tiÕn hµnh ph¶n øng PCR víi 8 cÆp måi. KÕt qu¶ nh− sau: 1. §é nh¹y cña ph¶n øng PCR ®a måi (8 cÆp) so víi chñng chuÈn lµ 100%. 2. §é ®Æc hiÖu cña ph¶n øng PCR víi 8 cÆp måi ®· chän tõ c¸c vi khuÈn: Citrobacter freundii, Salmonella typhi, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Edwasdsiella tarda, Escherichia coli ATCC 25922 lµ 100%. 3. Kh«ng ph©n biÖt ®−îc EIEC víi Shigella b»ng ph¶n øng PCR víi bé måi ®· thiÕt kÕ cho EIEC Jal. 4. C¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y ®−îc ph©n lËp tõ trÎ em khoÎ m¹nh lµ 10% (EAEC 6,7%; EHEC 0,66%; EIEC 1,33%; EPEC 0%; ETEC 1,33%). 5. C¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y ®−îc ph©n lËp tõ mñ, dÞch mËt, m¸u, n−íc tiÓu lµ 1,33% vµ cã sù ph©n bè kh«ng ®ång ®Òu theo vÞ trÝ g©y bÖnh. I. §Æt vÊn ®Ò NhiÒu ph−¬ng ph¸p chÈn ®o¸n E. coli g©y Tiªu ch¶y lµ mét bÖnh kh¸ phæ biÕn ë c¸c tiªu ch¶y ®· ®−îc ¸p dông. Ngay tõ nh÷ng n¨m n−íc trªn thÕ giíi, ®Æc biÖt t¹i c¸c n−íc ®ang 40, ng−êi ta ®· sö dông ph−¬ng ph¸p ®Þnh type ph¸t triÓn. Tû lÖ m¾c vµ tö vong do tiªu ch¶y huyÕt thanh. Sau nµy c¸c ph−¬ng ph¸p chÈn rÊt cao ë trÎ em. Theo −íc tÝnh cña Tæ chøc Y ®o¸n kh¸c nh− ELISA, thö ®éc tÝnh trªn nu«i tÕ thÕ giíi (WHO), hµng n¨m cã trªn 1 tû l−ît cÊy tÕ bµo, c¸c tÝnh chÊt sinh ho¸, sù ly gi¶i bëi trÎ em d−íi 5 tuæi bÞ tiªu ch¶y víi gÇn 5 triÖu phage ®· ®−îc ¸p dông. Song, chóng còng ®Òu lµ c¸c ph−¬ng ph¸p gi¸n tiÕp vµ ®ßi hái c¸c kü trÎ tö vong [5]. ë n−íc ta, tiªu ch¶y lµ nguyªn thuËt phøc t¹p, nªn Ýt ®−îc øng dông trong nh©n quan träng g©y suy dinh d−ìng, lµ nguyªn ph©n lo¹i c¸c E. coli g©y tiªu ch¶y. nh©n g©y tö vong ®øng hµng thø 2 ë trÎ em (chØ xÕp sau nhiÔm khuÈn ®−êng h« hÊp). Ngµy nay, víi sù ph¸t triÓn m¹nh mÏ cña sinh häc ph©n tö, nhiÒu ph−¬ng ph¸p chÈn ®o¸n NhiÒu t¸c nh©n vi sinh vËt kh¸c nhau cã thÓ míi ®· ra ®êi cho phÐp ph¸t hiÖn ®−îc c¸c gien g©y ra tiªu ch¶y, trong ®ã Escherichia coli ®Æc hiÖu, quyÕt ®Þnh kh¶ n¨ng g©y bÖnh cña E. th−êng chiÕm tû lÖ cao. Theo nghiªn cøu cña coli, trong ®ã 2 ph−¬ng ph¸p, PCR vµ lai ADN, c¸c t¸c gi¶ trªn thÕ giíi tû lÖ E. coli g©y tiªu ®−îc ¸p dông phæ biÕn nhÊt. ch¶y ë trÎ em tõ 21-60%, cßn ë ViÖt Nam tû lÖ nµy lµ 23,4 - 44,8% [1, 2, 3, 7, 9, 10]. 5
TCNCYH 22 (2) - 2003 ë ViÖt Nam, viÖc chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu - Chñng E. coli tõ bÖnh phÈm: ph©n (150), ch¶y, chØ sö dông ph−¬ng ph¸p quai ruét vµ n−íc tiÓu (40), m¸u (30), mËt (40), mñ (40) ®· ®Þnh type huyÕt thanh vµ còng chØ dõng l¹i ë ®−îc x¸c ®Þnh b»ng c¸c ph−¬ng ph¸p th«ng ETEC (Enterotoxingenic E. coli) vµ EPEC th−êng. (Enteropathogenic E. coli), EIEC 2. VËt liÖu (Enteroinvasive E. coli), EHEC - M«i tr−êng nu«i cÊy vi khuÈn: Sorbitol (Enterohaemorrhagic E. coli). PCR chÈn ®o¸n Mac Conkey, DCA. E. coli trªn thÕ giíi ®· ®−îc dïng phæ biÕn - M«i tr−êng dïng trong chÈn ®o¸n gåm: nh−ng c¸c t¸c gi¶ ®Òu chØ dïng ®¬n thuÇn mét KIA, ure-indol, mannitol - di ®éng, Citrat cÆp måi cho mét ph¶n øng, do vËy tèn kÐm vËt Simmons. liÖu vµ thêi gian. Bëi vËy, viÖc nghiªn cøu ¸p - M«i tr−êng cÊy vi khuÈn chuÈn bÞ cho t¸ch dông mét kü thuËt phï hîp víi nhiÒu cÆp måi, chiÕt ADN: th¹ch th−êng ®Üa. nh»m ph¸t hiÖn nhiÒu lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y - Sinh phÈm, m¸y mãc dïng trong PCR: trong mét ph¶n øng lµ hÕt søc cÇn thiÕt vµ cã ý + 8 cÆp måi ®Æc hiÖu ®Ó ph¸t hiÖn 5 lo¹i nghÜa thiÕt thùc. Tr−íc t×nh h×nh ®ã chóng t«i E.coli g©y tiªu ch¶y: LT l-LT r, STI2 l-STI2 r, tiÕn hµnh nghiªn cøu ®Ò tµi nh»m môc tiªu: VT1 l-VT1 r, VT2 l-VT2 r, eae u-eae l, SHIG 1. T×m hiÓu ®é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu cña 1-SHIG 2, bfp2 u-bfP2 l, EA L-EA U. ph¶n øng PCR ®a måi trong x¸c ®Þnh E. coli + M¸y ly t©m l¹nh (Beckman Avanti TM g©y tiªu ch¶y. 30), m¸y ®iÒu nhiÖt tù ®éng Thermal Cycler 2. T×nh h×nh ph©n bè c¸c chñng E. coli cã (Eppendorf §øc), bé ®iÖn di ngang (Advance kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y ph©n lËp tõ ph©n, m¸u, Co.LTD, NhËt B¶n), m¸y chôp ¶nh gel vµ phim n−íc tiÓu, mñ vµ mËt. ¶nh Kodak cì 667. II. §èi t−îng, vËt liÖu vµ ph−¬ng 3. Ph−¬ng ph¸p ph¸p nghiªn cøu - Tõ c¸c chñng E.coli mÉu, c¸c chñng thuéc 1. §èi t−îng hä vi khuÈn ®−êng ruét ®· kÓ ë trªn vµ c¸c - Chñng E. coli mÉu gåm: ETEC ATCC chñng vi khuÈn, bÖnh phÈm ®−îc t¸ch chiÕt 35401, EHEC ATCC 43890, EHEC ATCC ADN b»ng nhiÖt theo quy tr×nh cña ViÖn 43889, EPEC ATCC 43887, EIEC ATCC Krolinska Thôy §iÓn. 43893, EAEC ATCC 130C2 do ViÖn - Sau ®ã tiÕn hµnh ch¹y ph¶n øng PCR ®a Karolinska Thôy §iÓn cung cÊp. måi (8 cÆp måi) víi chu kú nh− sau: 1 chu kú - Chñng chuÈn cña hä vi khuÈn ®−êng ruét: 96oC/4"; 30 chu kú: 94oC/20", 50oC/20", - Chñng Shigella flexneri, Shigella boydii, 72oC/10"; 1 chu kú: 72oC/7" gi÷ ë 4oC. Shigella dysenteriae, Citrobacter freundii, - S¶n phÈm cña ph¶n øng PCR ®a måi ®−îc Salmonella typhi, Proteus vulgaris, Klebsiella tiÕn hµnh ®iÖn di trªn th¹ch agarose 1,5%. Tõ pneumoniae, Enterobacter aerogenes, c¸c chñng E.coli mÉu ®Ó x¸c ®Þnh ®é nh¹y, c¸c Edwardsiella tarda, Escherichia coli ATCC chñng vi khuÈn thuéc hä vi khuÈn ®−êng ruét 25922 do Trung t©m l−u tr÷ nguån gene vi sinh ®Ó x¸c ®Þnh ®é ®Æc hiÖu cßn c¸c chñng tõ bÖnh vËt g©y bÖnh, bé m«n Vi sinh vËt tr−êng §¹i phÈm ®Ó x¸c ®Þnh t×nh h×nh ph©n bè c¸c chñng häc Y Hµ Néi cung cÊp. E. coli g©y tiªu ch¶y. 6
TCNCYH 22 (2) - 2003 III. KÕt qu¶ 1. §é nh¹y cña ph¶n øng PCR ®a måi 1 2 3 4 5 6 7 2036 (bp) 1636 1018 506, 517 396 344 298 220 201 154 H×nh 1: H×nh ¶nh ®iÖn di s¶n phÈm PCR tõ 5 chñng E.coli mÉu 1. Chøng ©m 2. EIEC (320 bp) 3. EHEC (130, 298, 376 bp) 4. ETEC (147, 322 bp) 5. EAEC (630 bp) 6. EPEC (367, 376 bp) 7. Thang ADN chuÈn 2. §é ®Æc hiÖu cña PCR ®a måi 89 10 2030 (bp) 1636 1018 506,517 396 344 298 220 201 154 134 H×nh 2: H×nh ¶nh ®iÖn di s¶n phÈm PCR ®a måi víi c¸c vi khuÈn cã quan hÖ di truyÒn gÇn gòi víi E. coli 1. Chøng ©m 2. Edwardsiella tarda 3. K. pneumoniae 4. P. vulgaris 7
TCNCYH 22 (2) - 2003 5. C. Freundii 6. S. typhi trong c¸c chñng E. coli mÉu lµ 100% (trõ 7. E. coli ATCC 25922 EIEC). Nh− vËy ®é tin cËy cña kÕt qu¶ nµy rÊt 8. Chøng d−¬ng ETEC (147, 322 bp) cao. 9. . Chøng d−¬ng EAEC (630 bp) PCR ®a måi còng ®−îc dïng ®Ó x¸c ®Þnh 10. Thang ADN chuÈn c¸c chñng E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y tõ 3. E. coli g©y bÖnh ë ®−êng tiªu ho¸ c¸c bÖnh phÈm l©m sµng. C¸c chñng nµy ®· B¶ng 1: KÕt qu¶ ph¸t hiÖn c¸c chñng E. ®−îc x¸c ®Þnh b»ng ph−¬ng ph¸p PCR ®¬n måi coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y ph©n lËp tõ lµ ch¾c ch¾n cã gien g©y bÖnh, chóng ®−îc coi ph©n trÎ em < 5 tuæi (n = 150) nh− nh÷ng chñng chuÈn. KÕt qu¶ cña chóng t«i Tªn chñng PCR (+) % cho thÊy b»ng ph−¬ng ph¸p PCR ®a måi cã kh¶ n¨ng ph¸t hiÖn tÊt c¶ c¸c chñng nµy. Víi kÕt EAEC 10 6,7 qu¶ nµy, chóng ta cã thÓ ¸p dông kü thuËt trªn EHEC 1 0,66 ®Ó chÈn ®o¸n nhanh, chÝnh x¸c c¸c chñng E. EIEC 2 1,33 coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y. EPEC 0 0 VÒ ®é ®Æc hiÖu cña PCR ®a måi: PCR ®a ETEC 2 1,33 måi còng ®−îc dïng ®Ó tiÕn hµnh thö nghiÖm ®é ®Æc hiÖu víi 7 chñng vi khuÈn thuéc hä vi Tæng céng 15 10 khuÈn ®−êng ruét, chóng cã mèi quan hÖ chÆt 4. E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y cã mÆt chÏ víi E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y vÒ ë ngoµi ®−êng tiªu ho¸ nhiÒu mÆt. XÐt vÒ mÆt di truyÒn häc, chÊt liÖu B¶ng 2: KÕt qu¶ ph©n lo¹i c¸c chñng E. coli di truyÒn cña chóng t−¬ng ®èi gièng víi E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y ph©n lËp tõ c¸c bÖnh g©y tiªu ch¶y. ThËm chÝ chñng thö nghiÖm lµ phÈm ngoµi ®−êng tiªu ho¸ (n = 150) E. coli ATCC 25922 gièng hÖt E. coli g©y tiªu Tªn chñng PCR (+) % ch¶y vÒ h×nh th¸i, tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc, kh¸ng nguyªn vµ tÝnh chÊt di truyÒn kh«ng EAEC 2 1,3 mÊy kh¸c biÖt, vËy mµ, ®é ®Æc hiÖu cña ph¶n EHEC 0 0 øng PCR ®a måi vÉn lµ 100%. TiÕn hµnh thö EIEC 0 0 nghiÖm lÆp l¹i, ®é ®Æc hiÖu cho kÕt qu¶ 100%. EPEC 0 0 Nh− vËy víi ®é ®Æc hiÖu cao, PCR ®a måi lµ ph−¬ng ph¸p chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y ETEC 0 0 ®¸ng tin cËy, rÊt h÷u Ých khi ®−a vµo ¸p dông Tæng céng 2 1,3 thùc tÕ chÈn ®o¸n. IV. Bµn luËn TiÕn hµnh x¸c ®Þnh ®é ®Æc hiÖu cña ph¶n VÒ ®é nh¹y cña ph¶n øng PCR ®a måi: kÕt øng PCR víi c¸c chñng Shigella th× thÊy r»ng qu¶ ®é nh¹y cña ph¶n øng PCR ®a måi cña c¸c kh«ng thÓ ph©n biÖt ®−îc c¸c chñng Shigella chñng E. coli mÉu lµ 100%. MÆc dï sö dông víi E. coli b»ng PCR víi c¸c cÆp måi ®· thiÕt nhiÒu cÆp måi h¬n song chóng t«i thÊy r»ng kÕ cho EIEC. KÕt qu¶ nµy phï hîp víi nghiªn kh«ng cã hiÖn t−îng øc chÕ lÉn nhau gi÷a c¸c cøu cña c¸c t¸c gi¶ trªn thÕ giíi v× Shigella vµ cÆp måi trªn. KÕt qu¶ cña chóng t«i phï hîp EIEC rÊt gièng nhau vÒ mÆt di truyÒn häc. §Ó víi kÕt qu¶ nghiªn cøu cña c¸c t¸c gi¶ tr−íc ph©n biÖt chóng cÇn ph¶i thiÕt kÕ mét sè cÆp nh− Katsuaki Hoshino Or Jan Olsvik, Akioabe, måi ®Æc hiÖu h¬n. Sandrinsa Tacyphipps mÆc dï chóng t«i sö E. coli g©y bÖnh ë ®−êng tiªu ho¸: KÕt qu¶ dông nhiÒu cÆp måi h¬n. Chóng t«i còng tiÕn nghiªn cøu cña chóng t«i thÊy r»ng tû lÖ E. coli hµnh thö nghiÖm ®é lÆp l¹i (100 lÇn) víi c¸c cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y ë ®−êng tiªu ho¸ lµ chñng E. coli mÉu. KÕt qu¶ ®é lÆp l¹i cña PCR 10%. KÕt qu¶ nµy t−¬ng ®−¬ng víi nghiªn cøu 8
TCNCYH 22 (2) - 2003 cña c¸c t¸c gi¶ kh¸c thuéc c¸c n−íc l©n cËn r»ng c¸c chñng E. coli ngoµi kh¶ n¨ng g©y tiªu nh− Lµo 11%, ©n §é 9%, T©y Th¸i Lan 7%, ch¶y cßn cã kh¶ n¨ng g©y bÖnh ë nh÷ng n¬i n«ng th«n Israel 11% [4, 6, 8, 10] tuy h¬i cao kh¸c. Tû lÖ E. coli g©y tiªu ch¶y g©y bÖnh ë h¬n so víi kÕt qu¶ nghiªn cøu cña mét sè t¸c ngoµi ®−êng tiªu hãa thÊp h¬n E. coli g©y bÖnh gi¶ trong n−íc nghiªn cøu tr−íc ®©y nh−: ë ®−êng tiªu hãa víi mét tû lÖ cã ý nghÜa thèng Hoµng TiÕn Mü 1,6%; NguyÔn Ph−¬ng Lan kª (p < 0,05). 3,5%; Hoµng Thu Thuû 5% [1, 2, 3]. Trong V. KÕt luËn nghiªn cøu cña chóng t«i tû lÖ nhiÔm EAEC lµ Qua nghiªn cøu chóng t«i cã mét sè kÕt cao nhÊt 6,7%, ®©y lµ mét t¸c nh©n g©y bÖnh luËn sau: míi ®−îc quan t©m gÇn ®©y. Tuy nhiªn theo 1. §é nh¹y cña ph¶n øng PCR ®a måi (8 cÆp) víi kÕt qu¶ nghiªn cøu cña c¸c t¸c gi¶ trong n−íc c¸c chñng chuÈn lµ 100%. vµ c¸c n−íc l©n cËn nh− Lµo, Th¸i Lan [8, 10] th× ch−a ph¸t hiÖn ®−îc c¸c tr−êng hîp nhiÔm 2. §é ®Æc hiÖu cña ph¶n øng PCR 8 cÆp måi ®· chän EAEC nµo. Tr¸i l¹i tû lÖ nµy ®Æc biÖt cao ë c¸c víi c¸c vi khuÈn Citrobacter freundii, Salmonella n−íc Ch©u Mü 15-31% [7, 9]. typhi, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Chóng t«i kh«ng ph¸t hiÖn ®−îc 1 tr−êng Enterobacter aerogenes, Edwardsiella tarda, hîp nhiÔm EPEC nµo, ®iÒu nµy kh«ng cã nghÜa Escherichia coli ATCC 25922 lµ 100%. lµ chñng vi khuÈn nµy kh«ng g©y bÖnh ë ViÖt 3. Kh«ng ph©n biÖt ®−îc EIEC víi Shigella b»ng Nam mµ cã thÓ do cì mÉu cña chóng t«i cßn ph¶n øng PCR víi cÆp måi (®· thiÕt kÕ cho nhá nªn ch−a ph¶n ¸nh t×nh h×nh g©y bÖnh cña EIEC) ial. vi khuÈn nµy. Chóng t«i còng ph¸t hiÖn ®−îc tû 4. Tû lÖ E. coli g©y tiªu ch¶y ph©n lËp ë trÎ lÖ nhiÔm EHEC lµ 0,66%, ®©y lµ chñng vi khoÎ m¹nh lµ 10% trong ®ã EAEC 6,7%; khuÈn Ýt gÆp ë Ch©u ©u, B¾c Mü th× ngµy nay EHEC 0,66%; EIEC 1,33%; EPEC 0%; ETEC ®· xuÊt hiÖn ë trÎ khoÎ m¹nh ë ViÖt Nam. 1,33%. Cã sù ph©n bè kh«ng ®ång ®Òu gi÷a 3 Chóng t«i còng tiÕn hµnh nghiªn cøu tû lÖ ®Þa ph−¬ng ®ã lµ: Sa Pa 20%, Thanh Tr× 6%, E. coli g©y tiªu ch¶y ë 3 céng ®ång d©n c− C¸t Bµ 4%. kh¸c nhau nh− Sa Pa (Lµo Cai), Thanh Tr× (Hµ 5. Tû lÖ E. coli g©y tiªu ch¶y ph©n lËp tõ mñ, Néi), C¸t Bµ (H¶i Phßng) víi 50 mÉu. KÕt qu¶ mËt, n−íc tiÓu vµ m¸u lµ 1,33% vµ cã sù ph©n cho thÊy: tû lÖ E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu bè kh«ng ®ång ®Òu gi÷a c¸c vÞ trÝ g©y bÖnh: ch¶y ë 3 céng ®ång d©n c− lµ kh¸c nhau. T¹i Sa mñ 2,5%, mËt 2,5%, m¸u 0%, n−íc tiÓu 0%. Pa tû lÖ E. coli cã kh¶ n¨ng g©y tiªu ch¶y lµ C¶m ¬n: C«ng tr×nh nµy ®−îc thùc hiÖn 20%, cao h¬n h¼n Thanh Tr× 6% vµ C¸t Bµ 4%. t¹i Labo trung t©m Y sinh häc vµ Bé m«n Vi Sù kh¸c nhau nµy cã ý nghÜa thèng kª sinh Y häc tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi. (p
TCNCYH 22 (2) - 2003 cÊp ë trÎ em t¹i Hµ Néi. LuËn ¸n Phã tiÕn sü y enterotoxigenic Escherichia coli in a häc, ViÖn VÖ sinh dÞch tÔ. prospective cohort study of infant diarrhea in 4. Bhan MK, Raj P, Levine MM (1989), Nicarago. J. Clin. Microbiol, 35 (6): 1404 - Enteroaggregative Escherichia coli associated 1410. with persistent diarrhea in a cohort of rural 8. Peter Echeverria, Charles W.Hoge (1994), children in India. J. Infect Dis, 159(6): 1061- 4. Etiology of diarrhea in a rural community in 5. Jan Holmgren and Ann- Mari Svennerholm Western Thailand: Importance of enteric vruses (1992), Bacterial enteric infection and vaccine and enterovirulent Escherichia coli". J. development. Gastroenterology Clinics of north infect. Dis, 169: 916-9. America, 21(2): 283-302. 9. Quiroga M, Oviedo P (2000), Asymptomatic 6. Lerman Y., Slepon R., Cohen D (1994), infections by diarrheagenic Escherichia coli in Epidemiology of acute diarrhea disease in children from Misiones, Argentina, During the children in a high standard of living rural first twenty months of their lives. Rev. Isnt. settlement in Israel. J. Pediatrics infect. Dis, Med. Trop. Saopaulo, 42 (1): 9-15. 13(2): 116-22. 10. Yamashiro T, Nakasone N, Higa N (1998), Etiological study of diarrheal patients in 7. Paniagua M., Espinoza ., Ringman M Vientiane, Lao People’s Democratic Republic. (1997), Analysis of incidence of infection with J. Clin. Microbiol, 36(8): 2195-9. Summary study on multiplex PCR in diagnosis of diarrhea-causing E. coli The study used 300 E. coli strains isolated from specimens: stool (150), urine (40), blood (30), billiary fluid (40), pus (40) to find sensitivity and specificity of multiplex PCR in diagnosis of E. coli strains causing diarrhea and distribution of E. coli which have ability causing diarrhea in these specimens. DNA was extracted from E. coli control strains, reference strains belong to Enterobacteiaceaer and E. coli strains from Karolinska Institute (Sweden) and then carrying out multiplex (8 primer pairs) PCR reaction. The results were showed as following: 1. Sensitivity of multiplex PCR (8 pairs) with standard strains was 100%. 2. Specificity of the PCR with the bacteria such as: Citrobacter freundii, Salmonella typhi, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter, Edwasdsiella tarda, Escherchia coli ATCC 25922 was 100%. 3. Unable to differentiate EIEC with Shigella by PCR reaction with the primer-pairs designed for EIEC jal. 4. Percentage of E. coli strains causing diarrhea isolated from healthy children was 10% (EAEC 6,7%; EHEC 0,66%; EIEC 1,33%; EPEC 0%; ETEC 1,33%). Having unbalance distribution among 3 studied areas: Sapa 20%, Thanh Tri 6%, Cat Ba 4%. 5. Percentage of E. coli strains causing diarrhea isolated from pus, billiary fluid, blood, urine was 1,33%. 10

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

LV.26: Bộ 320 Luận Văn Thạc Sĩ Y Học

320 tài liệu

1236 lượt tải

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.