Hoạt tính kháng khuẩn và kháng ung thư vú MCF 7 của một số cao trích và hợp chất cô lập được từ các cây thuộc chi hedyotis

TẠP CHÍ ĐẠI HỌC SÀI GÒN, tháng 10, 2009<br /> <br /> <br /> <br /> HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG UNG THƯ VÚ MCF-7<br /> CỦA MỘT SỐ CAO TRÍCH VÀ HỢP CHẤT CÔ LẬP ĐƯỢC<br /> TỪ CÁC CÂY THUỘC CHI HEDYOTIS<br /> <br /> PHẠM NGUYỄN KIM TUYẾN (*)<br /> NGUYỄN KIM PHI PHỤNG (**)<br /> PHẠM ĐÌNH HÙNG (***)<br /> <br /> <br /> TÓM TẮT<br /> <br /> Kết quả thử nghiệm tính kháng khuẩn cho thấy cao etanol của H. nigricans có hoạt tính trên ba<br /> chủng B. subtilis, E. coli và S. typhi. Kết quả thử nghiệm độc tính Brine Shrimp và khả năng gây<br /> độc tế bào trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 cho kết quả khá tương đồng, ngoại trừ arbutin<br /> (LC50=20 g/ml) và rutin (LC50=50 g/ml) có độc tính Brine Shrimp mạnh nhưng không độc đối<br /> với dòng tế bào ung thư vú MCF-7 (I%= 1,33 đối với arbutin và I%= 3,53 đối với rutin). Hai<br /> hợp chất 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) và -amyrin (I%= 98,23) cho hoạt tính<br /> mạnh nhất trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7. Các nghiên cứu về hoạt tính của chi Hedyotis<br /> vẫn đang được tiếp tục.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> <br /> The ethanol extract of H. nigricans exhibited strong antibaterial activity on Bacillus subtilis,<br /> Escherichia coli and Salmonela typhi. Arbutin and rutin exhibited strong Brine shrimp toxicity<br /> (LC50 20 g/ml and 50 g/ml, respectively) but showed mild inhibition on breast cancer cell<br /> MCF-7 (1.33 and 3.53% inhibition, respectively). The remaining extracts and compounds<br /> showed the correlation on Brine Shrimp toxicity and cytotoxicity against breast cancer cell MCF-<br /> 7. Two compounds, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanone and -amyrin (92.60 and 98.23 %<br /> inhibition, respectively) showed the strongest cytotoxicity against breast cancer cell MCF-7. The<br /> further researche sare underinvestigated.<br /> <br /> 1. TỔNG QUAN<br /> <br /> Ở Việt Nam cũng như các quốc gia khác trong khu vực Đông Nam Á, các cây thuốc thuộc chi<br /> Hedyotis, họ Cà phê Rubiaceae như H. corymbosa, H. diffusa v.v. đã được sử dụng rộng rãi trong<br /> y học cổ truyền để chữa trị các vết rắn cắn, viêm nhiễm vết thương và đặc biệt là bệnh ung thư [4-<br /> 6] Các nghiên cứu khoa học cho thấy, trong các cây thuốc này thường có chứa các hợp chất là<br /> acid ursolic và acid oleanolic và hai hợp chất này được chứng minh là có hoạt tính kháng các<br /> <br /> <br /> <br /> TS, (**)Th.S, Khoa Khoa học Môi trường, Trường Đại học Sài Gòn<br /> (*)<br /> <br /> ***) TS, Khoa Hóa, Trường Đại học Khoa học tự nhiên TP. HCM<br /> (<br /> dòng tế bào ung thư như: tế bào ung thư phổi A549, tế bào ung thư buồng trứng SK-OV-3, tế bào<br /> ung thư da SK-MEL-2, tế bào ung thư não XF498, tế bào ung dạ dày SNU-1, tế bào ung thư bạch<br /> cầu L1210 [3-5]. Do đặc điểm Hóa Thực vật, các loài cùng chi có thể chứa các hợp chất giống<br /> nhau hoặc có đặc điểm về dược tính tương tự nhau, nên việc nghiên cứu thành phần hóa học và<br /> dược tính c a các cây thuốc m i thuộc chi Hedyotis là hết sức cần thiết. Chính v các l do trên,<br /> ch ng tôi đã tiến hành kh o sát thành phần hóa học c a ba loài thuộc chi Hedyotis là H.<br /> auricularia, H. biflora và H. nigricans. Kết qu kh o sát cho thấy các loài Hedyotis này có chứa<br /> các hợp chất steroid, acid triterpenoid, flavonoid, antraquinon và glycosid, trong đó c ba loài<br /> Hedyotis kh o sát đều có chứa acid ursolic và acid oleanolic v i hàm lượng khá cao (0,07 – 0,14<br /> % so v i bột cây khô) [9-12]. Sau đó, các cao trích và các hợp chất cô lập đã được thử nghiệm<br /> hoạt tính kháng sốt rét, kháng khuẩn, độc tính Brine Shrimp và kh năng gây độc trên dòng tế bào<br /> ung thư v MCF-7 nhằm góp phần phát hiện hoạt tính sinh học c a các cây thuốc m i thuộc chi<br /> Hedyotis.<br /> <br /> 2. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> <br /> Các cao trích và các hợp chất tinh khiết được tiến hành thử nghiệm các hoạt tính sinh học như:<br /> kháng kí sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum, kháng khuẩn trên bốn ch ng Escherichia coli<br /> (Gram âm), Salmonela typhi (Gram âm), Staphylococus (Gram dương) và Bacillus subtilis (Gram<br /> dương), độc tính Brine shrimp và kh năng gây độc tế bào trên dòng tế bào ung thư v MCF-7.<br /> Cấu tr c hóa học các hợp chất thử nghiệm hoạt tính sinh học được tr nh bày trong h nh 1.<br /> <br /> 29<br /> 30 30 28<br /> OH<br /> 29 30 22<br /> 29 21 20 26<br /> 29 20 19 20 24<br /> 19 19 25<br /> 4' 6' 23<br /> 19 20<br /> 12 5' O<br /> HO O<br /> 27<br /> 12 18 12 18 18<br /> 2' 18 11<br /> HO<br /> 13 15<br /> 13 13 25 26 3' 6<br /> COOH COOH<br /> 1 5<br /> 25 26 25 26 1'<br /> 9 9 9 OHH 2<br /> 3<br /> 4<br /> 3 5<br /> 6<br /> 3 3 3<br /> OH O<br /> HO HO HO<br /> 23 24 (11) 23 24 (12) 23 24 (13) (14) Glc (15)<br /> <br /> OH<br /> OH<br /> H<br /> HO O<br /> 3'<br /> 2'<br /> O OH H O<br /> 1'<br /> 4'<br /> 2'<br /> 3'<br /> 4' O HO O1 3' 6'<br /> 5'<br /> HO O<br /> 1'<br /> O 8<br /> 2' 4' 8<br /> 9 2<br /> 7<br /> 8<br /> 12<br /> 9<br /> 13<br /> 1<br /> 2 8<br /> 9 2<br /> 6'<br /> 5'<br /> OH O 7<br /> 6<br /> 9<br /> 10<br /> 2<br /> 3 8<br /> O<br /> 1'<br /> 6'<br /> 5' 7<br /> 6<br /> 5<br /> 10 3<br /> 7 1"' 2 4<br /> 6 11 14 3 10 H C O O<br /> 5 4 7 9<br /> <br /> HO3<br /> 5 10 4 6 3 1'<br /> 2'<br /> 3' 6 10 3<br /> 5 4<br /> HO OH O<br /> 5 4 OH S<br /> OH HO 1"<br /> 6'<br /> 5'<br /> 4'<br /> O OH O HO OH OMe OH O<br /> OH H (20) (21)<br /> (16) (17) (18) (19)<br /> <br /> OC4H9<br /> MeO OMe MeO 3'<br /> OMe 3'<br /> OH 3' 3'<br /> OC4H9<br /> 3' 2' 2' 2' 4'<br /> 2' 4'<br /> MeO<br /> 4'<br /> HO<br /> 4'<br /> HO 2' 4'<br /> O2<br /> 1'<br /> MeO O<br /> 1'<br /> 6'<br /> 5'<br /> 8<br /> O<br /> 1'<br /> 6'<br /> 5'<br /> O2<br /> 1'<br /> 6'<br /> 5'<br /> 8 6'<br /> 5'<br /> HO O2<br /> 1'<br /> 6'<br /> 5'<br /> 8 9 2 8 9 8<br /> 9 2 7 7 9 7 7 9<br /> 7 10<br /> 10 6 10 3 6 10 3 6 3 6 10 3<br /> 6 3 5 4 5 4 5 4 5 4<br /> 5 4<br /> OMe OMe<br /> OH O OH S OH O OH O OH S<br /> (22) (23) (24) (25)<br /> (26)<br /> <br /> Hình 1: Cấu tr c hóa học các hợp chất được thử nghiệm hoạt tính sinh học<br /> <br /> Kết qu thử nghiệm hoạt tính kháng sốt rét trên cao etanol thô ban đầu c a hai loài Hedyotis cho<br /> thấy, ở nồng độ 100 mg/ml, cao etanol H. auricularia và H. nigricans đều không có hoạt tính<br /> kháng k sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum. Chính v thế, cao etanol thô còn lại c a H.<br /> biflora không được nhận thử tiếp. Như vậy, các cao etanol thô ban đầu c a ba cây Hedyotis kh o<br /> sát đều không có kh năng gây chết k sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum, điều này cũng<br /> phù hợp v chưa có tài liệu nào nói đến hoạt tính kháng sốt rét c a các cây thuộc chi Hedyotis.<br /> <br /> Kết qu thử nghiệm tính kháng khuẩn trên bốn ch ng E. coli, S. typhi, S. aureus và B. subtilis c a<br /> cao etanol thô ban đầu c a ba loài Hedyotis được tr nh bày trong b ng 1. Các mẫu được thử ở<br /> nồng độ 100 mg/ml. Các cao etanol thô cho thấy có hoạt tính kháng khuẩn v i các mức độ mạnh,<br /> yếu khác nhau. Cao etanol thô ban đầu c a H. auricularia có hoạt tính tốt v i các ch ng S.<br /> aureus và E. coli. Cao etanol c a H. nigricans có hoạt tính tốt v i các ch ng B. subtilis, E. coli và<br /> S. typhi.<br /> <br /> Bảng 1: Kết qu thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn c a cao etanol c a ba cây Hedyotis kh o sát<br /> (tính bằng bán kính vòng vô khuẩn kể từ đĩa giấy, mm).<br /> <br /> 2. Staphylococus 3. Bacillus 4. Escherichia 5. Salmonela<br /> 1. Cao alcol c a cây aureus subtilis coli typhi<br /> <br /> 6. H. auricularia 7. 3 8. 1 9. 2 10. -<br /> <br /> 11. H. biflora 12. - 13. - 14. 1 15. 1<br /> <br /> 16. H. nigricans 17. - 18. 3 19. 2 20. 3<br /> <br /> <br /> Ghi chú: (-): không thấy rõ tính kháng khuẩn<br /> <br /> Kết qu thử nghiệm độc tính Brine shrimp c a các cao trích và một số hợp chất được trình bày<br /> trong b ng 2. Kết qu được tính bằng liều LC50 (g/ml) là nồng độ hoạt chất (g/ml) gây chết<br /> 50% số ấu thể Artemia salina thử nghiệm. Các nghiên cứu khoa học cho thấy khi mẫu thử cho độc<br /> tính Brine shrimp thì sẽ có hoạt tính kháng ung thư. Một số cao chiết cho độc tính Brine<br /> shrimp mạnh như cao etanol và cao cloroform c a loài H. auricularia; cao etanol, cao<br /> cloroform, cao etyl acetat và nhất là cao metanol c a loài H. nigricans. Một số hợp chất cho độc<br /> tính Brine shrimp mạnh như h ợ p c h ấ t arbutin, -amyrin, 1,4-dihydroxy-9,10-antraquinon, 5-<br /> hydroxyflavon, 5,7,4'-trihydroxyisoflavon, rutin, 5,7-dihydroxyflavon, 5-hydroxythioflavon,<br /> 5,7-dihydroxyflavon, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon, 5,7,4'-trihydroxyflavanon, acid<br /> oleanolic và nhất là acid ursolic.<br /> <br /> Kết qu thử nghiệm kh năng gây độc tế bào trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 c a các cao<br /> trích và một số hợp chất được trình bày trong b ng 2. Kết qu được tính bằng giá trị I%, biểu thị<br /> kh năng kháng phân bào c a chất thử. Giá trị I% càng l n, chất thử có hoạt tính càng mạnh. Một<br /> số cao chiết có hoạt tính tốt như cao etanol thô ban đầu, cao cloroform c a H. auricularia và nhất<br /> là cao metanol c a H. nigricans. Trong số các hợp chất thử nghiệm, hai hợp chất 4'-butyloxy-<br /> 5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) và nhất là -amyrin (I%= 98,23) cho hoạt tính mạnh nhất, hai<br /> hợp chất 5,7,4'-trihydroxyflavanon và 5,7,4'-trihydroxyisoflavon cho hoạt tính khá trên dòng tế bào<br /> ung thư vú MCF-7.<br /> <br /> Thử nghiệm độc tính Brine shrimp và kh năng gây độc tế bào trên dòng tế bào ung thư vú<br /> MCF-7 cho kết qu khá tương đồng, ngoại trừ hợp chất arbutin (LC50=20 g/ml) và rutin<br /> (LC50=50 g/ml) có độc tính Brine shrimp mạnh nhưng không độc đối v i dòng tế bào ung thư<br /> vú MCF-7 (I%= 1,33 đối v i arbutin và I%= 3,53 đối v i rutin).<br /> <br /> So sánh hoạt tính kháng ung thư trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 c a một số hợp chất<br /> thioflavon và flavon tương ứng cho thấy trong số các hợp chất thử nghiệm, hai cặp hợp chất 5-<br /> hydroxythioflavon (I%= 21,83) và 5-hydroxyflavon (I%= 20,39); 3,7,2',4'- tetrametoxy-5-<br /> hydroxythioflavon (I%= 9,89) và 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxyflavon (I%= 9,59) cho hoạt<br /> tính gần như tương tự nhau, trong khi đó hợp chất 4'-butyloxy-5,7- dihydroxythioflavon (I%=<br /> 28,04) cho hoạt tính yếu hơn nhiều so v i 4'-butyloxy-5,7- dihydroxyflavanon (I%=92,60).<br /> <br /> Bảng 2: Kết qu thử nghiệm độc tính Brine shrimp và kh năng gây độc tế bào trên dòng tế bào<br /> ung thư vú MCF-7 c a các cao trích và hợp chất tinh khiết.<br /> <br /> 27. Gây độc<br /> 24. Độc tính tế bào<br /> 25. Brine 28. ung thư<br /> 22. Loại cao chiết<br /> 21. N0 shrimp vú<br /> 23. hoặc hợp chất tinh khiết<br /> 26. LC50 29. MCF-7<br /> (g/ml) (I%)<br /> <br /> 30. 1 31. Gossypol (Mẫu chứng dương) 32. 10 33. 97,10<br /> 34. 2 35. Cao etanol thô ban đầu H. auricularia 36. 100 37. 40,86<br /> 38. 3 39. Cao cloroform H. auricularia 40. 100 41. 47,97<br /> 42. 4 43. Cao etanol thô ban đầu H. biflora 44. 1000 45. - 4,78<br /> 46. 5 47. Cao metanol H. biflora 48. 500 49. 9,63<br /> 50. 6 51. Cao etanol thô ban đầu H. nigricans 52. 100 53. 24,27<br /> 54. 7 55. Cao eter dầu hỏa H. nigricans 56. 500 57. 1,25<br /> 58. 8 59. Cao cloroform H. nigricans 60. 100 61. 31,07<br /> 62. 9 63. Cao etyl acetat H. nigricans 64. 100 65. 13,54<br /> 66. 10 67. Cao metanol H. nigricans 68. 10 69. 65,13<br /> 70. 11 71. Acid ursolic 72. 0,1 73. 64,59<br /> 74. 12 75. Acid oleanolic 76. 10 77. 19,16<br /> 78. 13 79. -Amyrin 80. 10 81. 98,23<br /> 82. 14 83. Arbutin 84. 20 85. 1,33<br /> <br /> 86. 15 87. -Sitosterol 3--O-D-glucopyranosid 88. 500 89. - 3,34<br /> <br /> 90. 16 91. 1,4-Dihydroxy-9,10-antraquinon 92. 100 93. 23,63<br /> (Quinizanin)<br /> 94. 17 95. 5,7-Dihydroxyflavon (Chrysin) 96. 100 97. 19,69<br /> 98. 18 99. 3,5,7,3',4'-Pentametoxyflavon 3-rutinosid 100. 50 101. 3,53<br /> (Rutin)<br /> 102. 19 103. 5,7,4’-Trihydroxyisoflavon (Biochanin A) 104. 20 105. 73,37<br /> <br /> 106. 20 107. 5-Hydroxyflavon (Primuletin) 108. 100 109. 20,39<br /> <br /> 110. 21 111. 5-Hydroxythioflavon 112. 100 113. 21,83<br /> <br /> 114. 22 115. 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxyflavon 116. 500 117. 9,59<br /> <br /> 118. 23 119. 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxythioflavon 120. 500 121. 9,89<br /> <br /> 122. 24 123. 5,7,4'-Trihydroxyflavanon (Naringenin) 124. 50 125. 71,92<br /> <br /> 126. 25 127. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon 128. 50 129. 92,60<br /> <br /> 130. 26 131. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon 132. 100 133. 28,04<br /> <br /> Riêng đối v i hợp chất 5,7,4'-trihydroxyflavanon (I%=71,92) sau khi được t h ự c h i ệ n p h n<br /> ứ n g alkyl hóa thành 4’-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) cho hoạt tính mạnh hơn<br /> thấy rõ.<br /> <br /> Dựa trên kết qu nghiên cứu c a Trần Thành Đạo [1], các thioflavon có hoạt tính kháng<br /> khuẩn mạnh hơn và có kh năng ức chế sự tạo ra NO trên tế bào vi thần kinh đệm BV-2 từ<br /> bằng so v i các flavon tương ứng. Tuy nhiên, v i hoạt tính kháng dòng tế bào ung thư vú<br /> MCF-7, các hợp chất thioflavon thử nghiệm cho hoạt tính bằng hoặc yếu hơn so v i hợp chất<br /> flavon tương ứng.<br /> <br /> Nghiên cứu về cây thuốc là một trong những nội dung nghiên cứu đang được quan tâm nhằm đóng<br /> góp các cây thuốc giá trị vào nguồn dược liệu c a Việt Nam. Những kết qu thử nghiệm hoạt tính<br /> trên là tiền đề quan trọng cho những nghiên cứu lâm sàng trong quá tr nh t m kiếm các th o dược<br /> m i.<br /> <br /> 3. THỰC NGHIỆM<br /> <br /> 1.1. Các cao trích và các hợp chất tinh khiết thử nghiệm hoạt tính sinh học thu được từ việc<br /> kh o sát thành phần hóa học c a ba loài cây thuộc chi Hedyotis là H. auricularia (L.) Lam., H.<br /> biflora (L.) Lam. và H. nigricans (L.) Lam ) [9-12]. Các hợp chất thioflavon được điều chế từ<br /> ph n ứng giữa các flavon tương ứng và tác chất Lawesson trong điều kiện chiếu xạ vi sóng<br /> không dung môi [13].<br /> <br /> 1.2. Thử tính kháng kí sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum: gửi mẫu thử tại Phòng thí<br /> nghiệm Sinh học kí sinh trùng và Sinh hóa trị liệu, Viện B o tàng thực vật Quốc gia, Cộng hòa<br /> Pháp, do Tiến sĩ Tôn Thất Quang thực hiện.<br /> <br /> 1.3. Thử tính kháng khuẩn: gửi mẫu thử tại Phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học phân tử,<br /> Khoa Sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, TP. HCM.<br /> <br /> 1.4. Thử độc tính Brine shrimp: mẫu thử được thực hiện tại phòng thí nghiệm Hóa Hữu cơ,<br /> Khoa Hóa, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, TP. HCM.<br /> Một mẫu được xem là không độc nếu liều LC50> 1000 g/ml. Một mẫu được xem là có<br /> nhiều hứa hẹn có hoạt tính nếu liều LC50< 200 g/ml.<br /> <br /> 1.5. Thử kh năng gây độc tế bào trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7: gửi mẫu thử tại phòng<br /> thí nghiệm Công nghệ sinh học phân tử, Khoa Sinh, trường ĐH KHTN. Thử nghiệm được<br /> tiến hành bằng phương pháp MTT trên tế bào ung thư vú MCF-7.<br /> <br /> Phương pháp MTT: là phương pháp so màu nhạy có tính định lượng, dùng để xác định sự<br /> sống, tăng sinh và hoạt động c a tế bào. Phương pháp này dựa trên kh năng c a những enzym<br /> dehydrogenase trong các tế bào sống sẽ chuyển hợp chất màu vàng, tan được trong nư c là<br /> bromur 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium thành s n phẩm formazan màu xanh<br /> đen, không tan trong nư c. Số lượng formazan tạo thành sẽ ph n ánh trực tiếp số lượng tế bào<br /> không phân chia nhưng vẫn sống. Đo OD ở các giếng thử nghiệm sau 72 giờ. Các giá trị thu<br /> được được lặp lại ở các lần thí nghiệm là giá trị I%, biểu thị kh năng kháng phân bào c a hợp<br /> chất, đơn vị là %. AVE là giá trị trung b nh c a I% c a các lần lặp lại. STD là giá trị độ lệch<br /> chuẩn giữa các lần lặp lại. I% được tính theo công thức sau :<br /> <br />  C T <br /> I% =   x 100 %<br />  C <br /> <br /> I%: kh năng kháng phân bào c a hợp chất (%)<br /> C : giá trị OD c a lô đối chứng<br /> T : giá trị OD c a<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> <br /> 1. Tran Thanh Dao (2005), T. N. Tuyen, H. Park, Synthesis and iNOS inhibitory activities of<br /> thioflavones, Arch. Pharm. Res., 28, 652-656.<br /> 2. Phan Đức Bình (2000), Tạp chí Thuốc và Sức khỏe, 125, tr. 31.<br /> 3. Ho T-I., Chen G-P., Lin Y-C., Lin Y-M., Chen F-C. (1986), An anthraquinone from Hedyotis<br /> diffusa, Phytochemistry, 25, pp. 1988-1989.<br /> 4. Hong X.X., Min W., Boon N.L. (1996), Screening of traditional medicines for their<br /> inhibitory activity against HIV-1 protease, Phytother. Res, 10, pp. 207 - 210.<br /> 5. Kim Sung Hoon, Ahn Byung-Zun, Ryu Shiyong (1998), Antitumour effects of ursolic<br /> acid isolated from Oldenlandia diffusa, Phytother. Res, 12, pp. 553-556.<br /> 6. Phạm Hoàng Hộ (2006), Cây có vị thuốc ở Việt Nam, NXB Trẻ, tr. 512-515.<br /> 7. Montagnac A., Provost J. T., Litaudon M., Pais M. (1997), Antimitotic and cytotoxic<br /> constituents, Myodocarpus gracilis, Planta. Med., 63, pp. 365-366.<br /> 8. Đỗ Tất Lợi (1986), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa Học Kỹ Thuật, Hà<br /> Nội, tr. 264 -268.<br /> 9. Phạm Nguyễn Kim Tuyến, Nguyễn Kim Phi Phụng, Phạm Đ nh Hùng (2005), Khảo sát thành<br /> phần hóa học của cây Hoa Kim Cương Hedyotis nigricans, họ Cà Phê (Rubiaceae), Tạp chí<br /> Hóa học Việt Nam, 43(6), 778-782.<br /> 10. Phạm Nguyễn Kim Tuyến, Nguyễn Kim Phi Phụng, Phạm Đ nh Hùng (2007), Khảo sát thành<br /> phần hóa học của cây An Điền Tai Hedyotis auricularia, họ Cà Phê (Rubiaceae), Tạp chí Hóa<br /> học Việt Nam, 45(2), 233-236,.<br /> 11. Phạm Nguyễn Kim Tuyến, Nguyễn Kim Phi Phụng, Phạm Đ nh Hùng, Poul Erik Hansen<br /> (2007), Khảo sát thành phần hóa học của cây An Điền hai hoa Hedyotis biflora, họ Cà phê<br /> (Rubiaceae), Tuyển Tập Các Công Trình Hội nghị Khoa Học và Công nghệ Hóa học Hữu cơ<br /> toàn quốc lần thứ 4, 252-255.<br /> 12. Phạm Nguyễn Kim Tuyến, Nguyễn Kim Phi Phụng, Phạm Đình Hùng (2008), Cô lập một<br /> vài flavon và antraquinon từ cây Hedyotis auricularia, họ Cà phê (Rubiaceae), Tạp chí Khoa<br /> học và Công nghệ, 46, 237-243.<br /> 13. Pham Nguyen Kim Tuyen, Nguyen Kim Phi Phung, Fadhil S. Kamounah, Wei Zhang<br /> and Poul Erik Hansen, NMR of a series of novel hydroxyflavothiones, Magn. Reson Chem,<br /> Published online in Wiley Interscience, July 2009.<br />