Khảo sát sự tạo carotenoid theo thời gian ở pha sinh dưỡng của một số chủng bacillus

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> KHẢO SÁT SỰ TẠO CAROTENOID THEO THỜI GIAN<br /> Ở PHA SINH DƯỠNG CỦA MỘT SỐ CHỦNG BACILLUS<br /> Vũ Thanh Thảo*, Trần Hữu Tâm**, Trần Thành Đạo*, Trần Cát Đông*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Carotenoid là chất chống oxi hóa tự nhiên, phổ biến trong các sinh vật quang tự dưỡng. Trong<br /> những sinh vật không có khả năng quang hợp, các loài Bacillus có khả năng sinh sắc tố được xem là nguồn<br /> carotenoid mới.<br /> Mục tiêu: Khảo sát sự tương quan giữa đường cong sinh trưởng và hàm lượng carotenoid của 6 chủng<br /> Bacillus, từ đó xác định thời điểm sinh carotenoid cao nhất đối với các chủng Bacillus ở dạng tế bào sinh dưỡng.<br /> Phương pháp: Sáu chủng Bacillus sinh carotenoid gồm B. marisflavi (DD1.1), B. vietnamensis (HC28), B.<br /> infantis (AT14), B. licheniformis (AT22), B. indicus (HU36) và B. firmus (CG17.0) được khảo sát đường cong<br /> sinh trưởng và hàm lượng carotenoid theo thời gian trên Tryptic Soy Broth (TSB). Tiến hành phân tích hàm<br /> lượng và loại carotenoid bằng HPLC.<br /> Kết quả: Carotenoid của các chủng Bacillus được sản xuất từ pha lũy thừa và đạt cực đại ở pha ổn định.<br /> Khoảng thời gian sinh carotenoid tối ưu của các chủng như sau:16-18 h, 24-26 h, 22-24 h, 24-26 h, 44-46 h và<br /> 28-30 h tương ứng với các chủng B. marisflavi, B. vietnamensis, B. infantis, B. licheniformis, B. indicus và B.<br /> firmus.<br /> Kết luận: Tất cả các chủng Bacillus đều phát triển chậm với thời gian thế hệ dài (trên 0,8 giờ). Hàm lượng<br /> carotenoid cao nhất có thể thu nhận cùng sinh khối vào pha ổn định của quá trình sinh trưởng.<br /> Từ khóa: Bacillus; carotenoid; đường cong sinh trưởng; thực phẩm chức năng, môi trường thay thế<br /> <br /> ABSTRACT<br /> LEVELS OF CAROTENOIDS PRODUCED DURING VEGETATIVE PHASE<br /> OF CAROTENOGENIC BACILLUS SPECIES<br /> Vu Thanh Thao, Tran Huu Tam, Tran Thanh Dao, Tran Cat Dong<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 211 - 217<br /> Background: Carotenoids are well known as natural antioxidants. They occur universally in photosynthetic<br /> organisms. Among non-photosynthetic organisms, Bacillus species have recently been identified as a new source<br /> of carotenoid.<br /> Objectives: Identify the relationship between growth curves and carotenoid contents of six selected strains<br /> and determine culture duration for highest carotenoid contents tend to produce probiotic. And the appropriate<br /> time to acquire carotenoids for vegetative cells of Bacillus strains was examined in order to provide additional<br /> data for achieving simple and cost-effective carotenoid production.<br /> Methods: Six strains of carotenogenic Bacillus species consisting of B. marisflavi (DD1.1), B. vietnamensis<br /> (HC28), B. infantis (AT14), B. licheniformis (AT22), B. indicus (HU36) and B. firmus (CG17.0) were grown in<br /> tryptic soy broth to investigate growth curves and carotenoid content by time. During vegetative growth samples<br /> were taken every six hour for carotenoid analysis by HPLC.<br /> <br /> *Khoa Dược, Đại học Y Dược TP.HCM<br /> Tác giả liên lạc: PGS. TS Trần Cát Đông<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> **Trung tâm Kiểm chuẩn xét nghiệm TP.HCM<br /> ĐT: 08. 38295641 – 127<br /> Email: trancdong@gmail.com<br /> <br /> 211<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Results: The result showed that carotenoid levels were detected at midle of the exponential growth phase and<br /> reach maximal levels at stationary phase which correspond to approximate 16-18 h, 24-26 h, 22-24 h, 24-26 h,<br /> 44-46 h and 28-30 h for strains of B. marisflavi, B. vietnamensis, B. infantis, B. licheniformis, B. indicus and B.<br /> firmus, respectively.<br /> Conclutions: All strains growth rate are slow with long generation time (more than 0.8 h). Maximal<br /> biomass and carotenoids content can be harvested at the same period in the stationary phase.<br /> Keywords: Bacillus; carotenoid; growth curves.<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Carotenoid có cấu tạo phân tử là các đơn vị<br /> isoprenoid liên kết tạo nên một dây C40<br /> polyisoprenoid với một loạt các nối đôi liên hợp<br /> nằm ở vùng trung tâm của phân tử. Chúng có<br /> nguồn gốc từ isopentenyl pyrophosphate được<br /> tổng hợp bởi thực vật và một số vi sinh vật như<br /> vi khuẩn, tảo và vi nấm(13). Carotenoid là nhóm<br /> sắc tố được phổ biến rộng rãi trong tự nhiên với<br /> một số màu sắc như vàng, cam, đỏ và tím. Bên<br /> cạnh đó, với hoạt tính chuyển hóa tiền chất của<br /> một số vitamin và hormon, carotenoid đóng một<br /> vài trò quan trọng về sinh học và sinh lý học<br /> trong đời sống sinh vật, chẳng hạn như khả<br /> năng đánh bắt ánh sáng trong quang hợp, bảo<br /> vệ tế bào chống lại các tác nhân gây quang hóa<br /> bằng cách dập tắt oxy đơn bội cũng như các gốc<br /> tự do có hại tạo ra khi tế bào bị chiếu sáng(4). Các<br /> nghiên cứu cho thấy rằng sự hiện diện của<br /> carotenoid trong chế độ ăn hàng ngày sẽ ngăn<br /> chặn nhiều bệnh tạo bởi các gốc tự do như xơ<br /> cứng động mạch, đục thủy tinh thể, thoái hóa<br /> điểm vàng, bệnh đa sơ cứng và quan trọng nhất<br /> là ung thư(7).<br /> Trong những năm gần đây, những loài<br /> Bacillus sinh sắc tố đã được các nhà khoa học<br /> quan tâm và nghiên cứu như Bacillus marisflavi<br /> và Bacillus aquimaris sinh sắc tố vàng được<br /> phân lập từ biển thủy triều Hoàng Hải ở Hàn<br /> Quốc(15), Bacillus megaterium sinh sắc tố đỏ,<br /> Bacillus firmus tạo màu hồng đến hồng đậm,<br /> Bacillus vietnamensis sinh sắc tố được phân lập<br /> tại ao tôm ở Việt Nam, và Bacillus indicus với<br /> sắc tố đa dạng vàng-cam, Bacillus cibi, Bacillus<br /> vedderi, Bacillus clarkii(8). Bên cạnh đó, nhiều<br /> bằng chứng cho thấy có sự liên quan mật thiết<br /> giữa những chủng sinh sắc tố và khả năng tạo<br /> <br /> 212<br /> <br /> carotenoid. Carotenoid tập trung chủ yếu ở<br /> màng tế bào và đóng một vai trò quan trọng<br /> trong đời sống của vi khuẩn. Chúng có tác<br /> dụng ổn định màng lipid và làm giảm tính<br /> lỏng của màng để tế bào vững chắc, nhờ đó<br /> bảo vệ tế bào vi khuẩn khỏi sự phá hủy của<br /> ánh sáng và các biến đổi nhiệt độ. Vì vậy, các<br /> sắc tố này rất cần thiết cho các chủng Bacillus<br /> sống trong môi trường khắc nghiệt(4,5).<br /> Việc sản xuất carotenoid ở vi khuẩn phụ<br /> thuộc nhiều yếu tố khác nhau. Để tăng hiệu quả<br /> tổng hợp carotenoid, có thể tối ưu hóa các thành<br /> phần của môi trường lên men như: nguồn<br /> carbon, nguồn nitrogen, bổ sung các hợp chất<br /> hóa học, ion kim loại, muối hoặc các điều kiện<br /> lên men (ánh sáng, nhiệt độ, pH) và thời gian<br /> thu nhận carotenoid tối ưu(4). Trong nghiên cứu<br /> này, chúng tôi khảo sát thời điểm thích hợp để<br /> thu nhận carotenoid đối với tế bào sinh dưỡng<br /> của các chủng Bacillus nhằm nâng cao hiệu quả<br /> sản xuất carotenoid.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> Vật liệu<br /> Chủng vi khuẩn: 6 chủng vi khuẩn được sử<br /> dụng trong nghiên cứu này bao gồm: DD1.1<br /> (B. marisflavi), HC28 (B. vietnamensis), AT14 (B.<br /> infantis), AT22 (B. licheniformis), HU36 (B.<br /> indicus) và CG17.0 (B. firmus). Những chủng<br /> này có khả năng tạo sắc tố và được phân lập từ<br /> môi trường biển và ao tôm ở Việt Nam bởi<br /> Phòng thí nghiệm Vi Sinh Công Nghệ Dược,<br /> ĐH Y Dược TP.HCM.<br /> Hóa chất: TSB (Tryptic Soy Broth), TSA<br /> (Tryptic Soy Agar), methanol, chloroform,<br /> acetonitril: của Merck, Đức.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> Carotenoid chuẩn (astaxanthin, lutein,<br /> zeaxanthin, canthaxanthin, và β-caroten): của<br /> Sigma.<br /> <br /> Phương pháp<br /> Xây dựng đường cong tăng trưởng và xác định<br /> hàm lượng carotenoid<br /> Hoạt hóa các chủng vi khuẩn 37oC qua<br /> đêm trên TSB. Cấy 1% (v/v) chủng vào 100 ml<br /> TSB vào các erlen 250 ml, điều chỉnh pH và<br /> nuôi ở nhiệt độ thích hợp cho từng chủng.<br /> Xây dựng đường cong tăng trưởng (tiến hành<br /> trên 1 erlen): mỗi giờ lấy mẫu 1 lần, đo OD,<br /> ghi nhận sự phát triển của vi khuẩn, đồng<br /> thời xác định mật độ tế bào vi khuẩn bằng<br /> cách đếm sống. Hàm lượng carotenoid: cứ 6<br /> giờ lấy 2 erlen đem ly tâm, đông khô và tiến<br /> hành chiết carotenoid, chạy HPLC để xác<br /> định hàm lượng carotenoid. Sau khi đã xác<br /> định được khoảng thời gian sinh carotenoid<br /> tối ưu, tiến hành lập lại thí nghiệm với<br /> khoảng thời gian lấy mẫu xác định hàm<br /> lượng carotenoid là 2 giờ để xác định chính<br /> xác thời gian thu carotenoid tối ưu. Tiến hành<br /> đo OD và xác định mật độ tế bào và xác định<br /> hàm lượng carotenoid cho đến khi giá trị OD<br /> đo được giảm (mật độ tế bào trong dịch nuôi<br /> cấy giảm).<br /> Xác định thời gian thế hệ<br /> Phương trình tuyến tính (y = a + kx) được<br /> tính từ phần tuyến tính trên đường cong tăng<br /> trưởng của vi sinh vật sẽ giúp xác định tốc độ<br /> phát triển (k) của vi sinh vật trên giờ. Trong đó,<br /> y là giá trị log10 của số khuẩn lạc trên một ml<br /> (CFU/ml), x là thời gian nuôi cấy tính theo giờ.<br /> Hệ số góc k của phương trình tuyến tính là tốc<br /> độ phát triển của vi sinh vật (log10/ giờ). Thời<br /> gian thế hệ G (giờ) của vi sinh vật được tính theo<br /> phương trình G = lg2/k(6).<br /> Phương pháp chiết carotenoid<br /> Sinh khối Bacillus sau khi đông khô nghiền<br /> mịn, cân chính xác 100 mg cho vào 3 ml dung<br /> môi methanol:chloroform (1:2). Tán siêu âm<br /> trong 20 phút để phá vỡ tế bào, ủ trong đá 10<br /> phút. Thêm đồng lượng nước, vortex mạnh. Ly<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> tâm 10000 g trong 10 phút. Sau khi chiết, hỗn<br /> dịch sẽ chia thành 2 lớp nhưng chỉ có lớp dịch<br /> chiết ở dưới có màu sẽ được chọn để tiến hành<br /> phân tích bằng HPLC. Lớp trên được chiết lại<br /> với chloroform (đến khi cắn không còn màu).<br /> Làm khô dịch chiết đến cắn và bảo quản ở -20oC<br /> đến khi phân tích HPLC(5,8).<br /> <br /> Phân tích carotenoid bằng HPLC<br /> Carotenoid được phân tích bằng HPLC với<br /> hệ thống Knauer (Đức). Dịch chiết carotenoid từ<br /> vi khuẩn lọc qua màng lọc Teflon 0,45 μl. Tiến<br /> hành sắc ký trên cột pha đảo Eurospher RP 18<br /> (5μm, 150x 4,6 mm), thể tích bơm mẫu 20 μl.<br /> Dung môi pha động là acetonitrile:methanol<br /> (70:30), tốc độ dòng 1 ml/ phút. Bước sóng phát<br /> hiện ở 450 nm (bước sóng dùng để phát hiện<br /> carotenoid). Loại carotenoid được xác định<br /> thông qua thời gian lưu khi so sánh với các<br /> carotenoid chuẩn. Xây dựng đường chuẩn của<br /> canthaxanthin để xác định hàm lượng<br /> carotenoid.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Đường cong tăng trưởng<br /> Tốc độ phát triển và thời gian thế hệ của các<br /> chủng vi khuẩn được mô tả như Bảng 1. Hệ số<br /> tương quan của các phương trình tuyến tính cao<br /> (R2) chứng tỏ mô hình tuyến tính sử dụng thích<br /> hợp để đánh giá sự phát triển của các chủng<br /> Bacillus(12).<br /> Bảng 1. Thời gian thế hệ và các đặc tính phát triển<br /> của 6 chủng<br /> Chủng Tốc độ phát Thời gian thế<br /> -1<br /> hệ (h)<br /> triển (log10h )<br /> DD1.1<br /> 0,329<br /> 0,914<br /> AT14<br /> 0,346<br /> 0,870<br /> HU36<br /> 0,245<br /> 1,232<br /> AT22<br /> 0,291<br /> 1,033<br /> CG17.0<br /> 0,264<br /> 1,140<br /> HC28<br /> 0,251<br /> 1,199<br /> 0,023<br /> 13,088<br /> <br /> R2<br /> 0,968<br /> 0,956<br /> 0,982<br /> 0,981<br /> 0,964<br /> 0,969<br /> 0,979<br /> <br /> Pha ổn<br /> định* (h)<br /> 13-48<br /> 13-34<br /> 16-52<br /> 10-44<br /> 10-30<br /> 08-22<br /> 30-45<br /> <br /> * Thời gian từ T0<br /> <br /> Trong số những chủng này, AT14 và<br /> DD1.1 có tốc độ phát triển nhanh hơn những<br /> chủng khác, 0,346 và 0,329 h-1, chỉ sau 2 giờ<br /> <br /> 213<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> nuôi cấy đã đạt pha lũy thừa. Ngược lại, HU36<br /> có tốc độ phát triển chậm (0,245 h-1) và thời<br /> gian thế hệ dài hơn những chủng khác (1,23 h);<br /> thêm vào đó, HU36 phải sau 7 h nhân giống<br /> mới đạt pha lũy thừa. Chủng HC28 có hai pha<br /> lũy thừa, pha lũy thừa đầu từ 2 đến 10 h, và<br /> pha lũy thừa thứ hai kéo dài từ 22 đến 30 h,<br /> nhưng pha lũy thừa 2 có tốc độ phát triển thấp<br /> (0,023 h-1) khi so với pha lũy thừa 1 (0,251 h-1).<br /> Kết quả còn cho thấy các chủng Bacillus này<br /> đều có pha ổn định dài từ 20 đến 36 h; ví dụ<br /> như pha ổn định của Bacillus firmus là 20 h, từ<br /> 10 đến 30 h; của AT22 là 34 h, từ 10 đến 44 h;<br /> và của AT14 là 36 h, từ 16 đến 52 h. Sau đó sự<br /> phát triển của vi khuẩn bắt đầu giảm, do sự<br /> cạn kiệt của thành phần môi trường.<br /> <br /> Độ hấp thu (mAU)<br /> <br /> phút. Tất cả các carotenoid đều có đỉnh trong dải<br /> phổ UV với độ hấp thu cực đại (λmax) tại 478<br /> nm, 445 nm, 452 nm, 470 nm, và 450 nm<br /> <br /> Độ hấp thu (mAU)<br /> <br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 10<br /> <br /> 20<br /> <br /> 30<br /> <br /> Phổ hấp thu của sáu loại dịch chiết sắc tố của<br /> vi khuẩn đều có đỉnh trong vùng bước sóng từ<br /> 400 to 600 nm, dãy phổ hấp thu của carotenoid.<br /> Bên cạnh đó, kết quả khảo sát khả năng chống<br /> oxi hóa của 6 loại dịch chiết đều cho thấy khả<br /> năng dập tắt gốc tự do cao từ 85 – 90 % (không<br /> trình bày dữ liệu). Vì vậy 6 chủng vi khuẩn này<br /> đều có khả năng sinh carotenoid.<br /> <br /> 3.9<br /> <br /> 20<br /> <br /> 5.1<br /> <br /> 8.1<br /> <br /> 10<br /> 5<br /> <br /> a<br /> <br /> 0<br /> 100<br /> <br /> 5<br /> <br /> 100<br /> <br /> 40<br /> <br /> 5<br /> <br /> 4<br /> <br /> 3<br /> <br /> 200<br /> <br /> 1. astaxanthin; 2. lutein; 3. zeaxanthin; 4. canthaxanthin;<br /> 5. β-carotene<br /> <br /> 10.1<br /> <br /> 10<br /> <br /> 2<br /> <br /> Hình 1. Thời gian lưu của carotenoid chuẩn<br /> <br /> Sắc ký đồ của các carotenoid chuẩn như<br /> trong Hình 1. Thời gian lưu của astaxanthin,<br /> lutein, zeaxanthin, canthaxanthin và β-carotene<br /> là 3,9 phút, 6,6 phút, 7,5 phút, 10,1 phút, và 32<br /> 20<br /> <br /> 1<br /> <br /> Thời gian (phút)<br /> <br /> Hàm lượng carotenoid<br /> <br /> 40<br /> <br /> 400<br /> <br /> e<br /> <br /> 0<br /> 40<br /> <br /> 5.1<br /> <br /> 75<br /> <br /> 3.9<br /> <br /> 20<br /> <br /> 50<br /> <br /> 7.5<br /> b<br /> <br /> f<br /> <br /> 0<br /> <br /> 0<br /> 100<br /> <br /> 3.0<br /> <br /> 10<br /> <br /> 25<br /> <br /> 0<br /> <br /> 5.1<br /> <br /> 10<br /> <br /> 20<br /> <br /> 30<br /> <br /> 40<br /> <br /> 8<br /> <br /> 75<br /> 9.9<br /> <br /> 8.1<br /> <br /> 50<br /> <br /> 4<br /> <br /> 25<br /> <br /> 2<br /> <br /> c<br /> <br /> 0<br /> <br /> g<br /> <br /> 0<br /> <br /> 200<br /> <br /> 0<br /> <br /> 8.1<br /> <br /> 150<br /> <br /> 10<br /> <br /> 20<br /> <br /> 30<br /> <br /> 40<br /> <br /> Time (min)<br /> <br /> 100<br /> <br /> 3.9<br /> <br /> 50<br /> <br /> d<br /> <br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 10<br /> <br /> 20<br /> <br /> 30<br /> <br /> 40<br /> <br /> Time (min)<br /> <br /> Hình 2. Sắc ký đồ HPLC của dịch chiết carotenoid từ các chủng Bacillus ở 450nm<br /> a: DD1.1; b: HU36; c: HC28; d: AT14; e: CG17.0, f: AT22; g: chủng không sinh carotenoid B. subtilis PY79.<br /> <br /> Chủng B. subtilis PY79 không sinh sắc tố<br /> được sử dụng làm đối chứng trong thí nghiệm.<br /> Sắc ký đồ carotenoid của 6 chủng Bacillus so<br /> sánh với chủng đối chứng PY79 như trong<br /> Hình 2. Sắc ký đồ của các chủng nghiên cứu có<br /> <br /> 214<br /> <br /> đỉnh hấp thu ở 450 nm, vùng hấp thu của<br /> carotenoid, trong khi sắc ký đồ carotenoid của<br /> chủng Bacillus subtilis PY79 cho thấy không có<br /> sự hiện diện của carotenoid. Kết quả HPLC<br /> còn cho thấy tất cả các dịch chiết sắc tố đều<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Dịch chiết của AT14 có các đỉnh chính ở thời<br /> gian lưu là 8,1 phút, và một đỉnh phụ với thời<br /> gian lưu là 3,9 phút là astaxanthin (Hình 2(d)).<br /> Trong khi, CG17.0 và AT22 có đỉnh chính là<br /> astaxanthin với thời gian lưu là 3,9 phút (Hình<br /> 2(e), 2(f)). Bên cạnh đó, 2 chủng này còn có<br /> carotenoid khác với thời gian lưu là 8,1 và 3,0<br /> phút, điều này có thể do sự khác biệt về màu sắc<br /> của các chủng này.<br /> <br /> thuộc nhóm xanthophyl thời gian lưu từ 3,9<br /> phút đến 10 phút.<br /> Hình 2 (a) thể hiện dữ liệu của DD1.1 với 2<br /> loại carotenoid, tương ứng với 2 thời gian lưu là<br /> 5,1 và 10,1 phút. Carotenoid với thời gian lưu<br /> 10,1 phút được xác định là canthaxanthin khi so<br /> với chất chuẩn. HU36 và HC28 có đỉnh chính<br /> với thời gian lưu là 5,1 phút, và HU36 còn có<br /> một đỉnh phụ ở 7,5 phút, trong khi HC28 có 2<br /> đỉnh khác ở 8,1 và 9,9 phút (Hình 2(b), 2(c)).<br /> DD1.1<br /> 10,0<br /> <br /> 800<br /> <br /> 9,0<br /> 150<br /> 8,5<br /> 100<br /> 8,0<br /> 50<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> 9,5<br /> <br /> 200<br /> <br /> 7,5<br /> 7,0<br /> <br /> 0<br /> 12<br /> <br /> 18<br /> <br /> 24<br /> <br /> 30<br /> <br /> 36<br /> <br /> 42<br /> <br /> 48<br /> <br /> 9,5<br /> <br /> 600<br /> 9,0<br /> <br /> 500<br /> 400<br /> <br /> 8,5<br /> <br /> 300<br /> <br /> 8,0<br /> <br /> 200<br /> 7,5<br /> <br /> 100<br /> 0<br /> <br /> 7,0<br /> 0<br /> <br /> 54<br /> <br /> 6<br /> <br /> 12<br /> <br /> 18<br /> <br /> HU36<br /> <br /> 9,0<br /> <br /> 200<br /> 8,5<br /> 150<br /> 8,0<br /> <br /> 100<br /> <br /> 7,5<br /> <br /> 50<br /> 0<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> Carotenoid (ug/g SKK)<br /> DW)<br /> <br /> 9,5<br /> <br /> 250<br /> <br /> 18<br /> <br /> 24<br /> <br /> 30<br /> <br /> 36<br /> <br /> 42<br /> <br /> 48<br /> <br /> 54<br /> <br /> RT 3.9<br /> Cells<br /> Tế bào<br /> <br /> 200<br /> <br /> 9,0<br /> <br /> 150<br /> <br /> 8,5<br /> <br /> 100<br /> <br /> 8,0<br /> <br /> 50<br /> <br /> 7,5<br /> 7,0<br /> 0<br /> <br /> 60<br /> <br /> 6<br /> <br /> 12<br /> <br /> 18<br /> <br /> 9,0<br /> <br /> 300<br /> <br /> 8,5<br /> <br /> 200<br /> <br /> 8,0<br /> <br /> 100<br /> <br /> 7,5<br /> <br /> 7,5<br /> 7,0<br /> 24<br /> <br /> 30<br /> <br /> 36<br /> <br /> (h) (h)<br /> ThờiTime<br /> gian<br /> <br /> 42<br /> <br /> 48<br /> <br /> 54<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> SKK)<br /> Carotenoid (ug/g<br /> DW)<br /> <br /> 400<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> Carotenoid (ug/gSKK)<br /> DW)<br /> <br /> 9,5<br /> <br /> 8,0<br /> <br /> 0<br /> <br /> RT 8.1<br /> <br /> 500<br /> <br /> 8,5<br /> <br /> 100<br /> <br /> RT 9.8<br /> <br /> 9,5<br /> <br /> 300<br /> 200<br /> <br /> RT 5.1<br /> TC<br /> <br /> 600<br /> <br /> 9,0<br /> <br /> 18<br /> <br /> 36<br /> <br /> 10,0<br /> <br /> 400<br /> <br /> 12<br /> <br /> 30<br /> <br /> HC28<br /> RT 3.9<br /> Cells<br /> Tế<br /> bào<br /> <br /> 500<br /> <br /> 6<br /> <br /> 24<br /> <br /> Time (h)<br /> Thời<br /> gian (h)<br /> <br /> 600<br /> <br /> 0<br /> <br /> 10,0<br /> 9,5<br /> <br /> AT22<br /> 700<br /> <br /> 42<br /> <br /> 250<br /> <br /> (h)(h)<br /> ThờiTime<br /> gian<br /> <br /> RT 3.0<br /> TC<br /> <br /> 36<br /> <br /> 0<br /> <br /> 7,0<br /> 12<br /> <br /> RT 8.1<br /> TC<br /> <br /> 300<br /> <br /> 10,0<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> Carotenoid (ug/g SKK)<br /> DW)<br /> <br /> RT 7.5<br /> Cells<br /> Tế bào<br /> <br /> 300<br /> <br /> 6<br /> <br /> 30<br /> <br /> CG17.0<br /> <br /> RT 5.1<br /> TC<br /> <br /> 0<br /> <br /> 24<br /> <br /> Time gian<br /> (h)<br /> Thời<br /> (h)<br /> <br /> ThờiTime<br /> gian<br /> (h)(h)<br /> <br /> 350<br /> <br /> 10,0<br /> <br /> 700<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> 6<br /> <br /> RT 8.1<br /> Cells<br /> Tế<br /> bào<br /> <br /> 10,0<br /> <br /> Cells<br /> Tế<br /> bào<br /> <br /> 0<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> 0<br /> <br /> RT 3.9<br /> TC<br /> <br /> Log 10 (CFU/ml)<br /> <br /> RT 10.1<br /> Cells<br /> Tế bào<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> SKK)<br /> Carotenoid (ug/g DW)<br /> <br /> 250<br /> <br /> Carotenoid(μg/g<br /> Carotenoid (ug/gSKK)<br /> DW)<br /> <br /> AT14<br /> <br /> RT 5.1<br /> TC<br /> <br /> 7,0<br /> 0<br /> <br /> 6<br /> <br /> 12<br /> <br /> 18<br /> <br /> 24<br /> <br /> 30<br /> <br /> 36<br /> <br /> 42<br /> <br /> 48<br /> <br /> 54<br /> <br /> Timegian<br /> (h) (h)<br /> Thời<br /> <br /> Hình 3. Lượng carotenoid tạo ra theo thời gian RT: Thời gian lưu, TC: Tổng carotenoid<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> 215<br /> <br />