Kiểm nghiệm lương thực - thực phẩm - Chuyên đề: Tiêu chuẩn hiện hành trong kiểm nghiệm coliform và E.coli

Chia sẻ: Ngô Thị Thảo Ngân | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:58

Thêm vào BST

Báo xấu

136
lượt xem 19
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tài liệu "Kiểm nghiệm lương thực - thực phẩm - Chuyên đề: Tiêu chuẩn hiện hành trong kiểm nghiệm coliform và E.coli" sau đây có nội dung trình bày tổng quan về coliforms và E.coli, các phương pháp định tính, định lượng, các tiêu chuẩn hiện hành. Mời bạn đọc tham khảo.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Kiểm nghiệm lương thực - thực phẩm - Chuyên đề: Tiêu chuẩn hiện hành trong kiểm nghiệm coliform và E.coli

CHUYÊN ĐỀ
I. Tổng quan về coliforms và E.coli 1. Coliforms 2. E.coli II. Các phương pháp định tính, định lượng 1. Định tính 2. Định lượng a. Phương pháp MPN b. Phương pháp đếm khuẩn lạc c. Phân tích nhanh III. Các tiêu chuẩn hiện hành 1. Đối với nước 2. Đối với thực phẩm 3. Một số tiêu chuẩn quốc tế
I. TỔNG QUAN 1. Coliforms Thuộc họ Enterobacteriaceae Vi khuẩn hình que Gram âm Không sinh bào tử Hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ nghi Sinh acid, sinh hơi do lên men lactose ở 370C trong vòng 24 giờ Không sinh bào tử Chứa βgalactosidase
1. Coliform Các giống có nguồn gốc từ phân (như Escherichia) : + Phát triển nhanh, khoảng 16 giờ, trong 8 môi trường dinh dưỡng ở 440C + Không mọc ở 40C. + Là loại vi khuẩn ưa nhiệt, nhiệt độ thích hợp nhất là 410C. Các giống không có nguồn gốc từ phân (như Citrobacter, Klebsiella, Enterobacte ): + Chúng có nguồn gốc thuỷ sinh hay từ đất, + Mọc nhanh ở 4oC trong 3 – 4 ngày và 10oC trong 1 ngày. + Không mọc ở 41oC, + Ở 44oC ức chế hoàn toàn sự phát triển của tất cả các Coliform không có nguồn gốc từ phân.
Shigella Vi khuẩn đường ruột Yersinia Salmonella Coliforms tổng số Coliform s chịu nhiệt Coliforms phân E.coli Vị trí của coliform trong họ Enterobacteriaceae (Vi khuẩn đường ruột)
Coliforms chịu nhiệt: Là những coliforms có khả năng lên men lactose sinh hơi trong khoảng 24h khi được ủ ở 44oC trong môi trường EC. Coliforms phân (E.coli giả định): Là coliforms chịu nhiệt có khả năng sinh indole khi được ủ khoảng 24h ở 44.5oC trong môi trường Trypton. Fecal Coliform
2. E.coli Vi khuẩn Escherichia coli (E. coli) thuộc:  Lớp: Schgzomycetes  Bộ: Eubacteriales  Họ: Enterobacteriaceae  Giống: Escherichia  Loài: Escherichia coli Là một phân nhóm của nhóm coliforms phân Hình. Vi Khuẩn Cho kết quả thử nghiệm IMViC là ++ E.coli
Các dòng E.coli có khả năng gây bệnh: EAEC (Enteroaggregative E. coli), E. coli kết tập ở ruột. EHEC (Enterohemorrhagic E. coli), E. coli gây xuất huyết ở ruột. EPEC (Enteropathogenic E. coli), E. coli gây bệnh đường ruột. ETEC (Enterotoxigenic E. coli), E. coli sinh độc tố ruột. EIEC (Enteroinvasive E. coli), E. coli xâm lấn niêm mạc ruột.
II. CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG 1. Định tính Nguyên tắc: E. coli lên men sinh hơi đường glucose, manitol, lactose, galactose nhưng không sinh hơi đường maltose, arabinose. E. coli không lên men dextrin, glycogen, inositol, salisin, ít khi lên men inulin, pectin. Trong môi trường BGBL, khuẩn lạc dẹt, có ánh kim E. coli không sinh H2S, không tan chảy gellatin, không phân hủy đạm, hoàn nguyên Nitrate thành Nitrite.
Qui trình định tính E.coli
Qui trình định tính E.coli
2.1. 2.1. PHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP PHÁP MNP MNP a/ Định lượng Coliforms: Cấy 1ml dich đã pha loãng 101 vào 3 ống nghiệm giống nhau, mỗi ống chứa 10ml canh LSB. Thực hiện tương tự với mẫu pha loãng 102 và 103. Ủ các ống nghiệm ở 37oC trong 48h. Ghi nhận ống có sinh hơi (+). Cấy dịch mẫu từ các ống LSB dương tính (+) sang các ống chứa canh BGBL. Ủ 37oC ± 1oC trong 48h.
Quy trình định lượng Coliforms, Coliforms chịu nhiệt, Coliforms phân Và E.coli bằng pp MPN
Ghi nhận số ống (+) có sinh hơi với mỗi độ pha loãng.
b/ Định lượng Coliforms chịu nhiệt: • Dùng que cấy vòng, chuyển một vòng dịch từ ống LSB (+) sang môi trường EC. • Ủ trong 44.5 ± 0,2oC trong 24h.  Đếm các ống có sinh hơi (+), ở mỗi độ pha loãng.
c/ Định lượng Coliforms phân: • Cấy ria dịch dịch mẫu từ ống (+) trên môi trường EC sang môi trường EMB ủ 37oC trong 24h.  khuẩn lạc tròn, dẹt hình đĩa và có ánh kim tím là khuẩn lạc của Colifoms phân (E. coli giả định).
c/ Định lượng Coliforms phân: Chọn khuẩn lạc đường kính lớn hơn 1ml cấy vào canh Tryptone, ủ ở 44,5 ± 0,2oC, trong 24h.Nhỏ thuốc thử Kovac’s vào các ống nghiệm: ống có xuất hiện màu đỏ trong môi trường trong vài phút là ống (+). Thực hiện cho tất cả các ống (+) trên môi trường EC. Ghi nhận các ống (+) trên môi trường tryptone tương ứng với mỗi độ pha loãng.
d/ Định lượng E. coli • Thực hiện tương tự như trường hợp coliforms phân để tìm các khuẩn lạc E. coli giả định. • Chọn các khuẩn lạc có đường kính lớn hơn 1mm và cấy vào môi trường MRVP, Simmon Citrate Agar để thực thử nghiệm IMViC.