Luận văn : SỬ DỤNG KỸ THUẬT DAS-ELISA VÀ RT-PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM VÕNG TRÊN CÂY ĐU ĐỦ (Papaya ringspot virus) TẠI HAI TỈNH ĐỒNG NAI VÀ ĐỒNG THÁP part 8

Chia sẻ: Asdfadf Adgsg | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:10

Thêm vào BST

Báo xấu

122
lượt xem 12
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Để kiểm chứng lại độ tin cậy của thí nghiệm Nested-PCR trên hai cặp mồi 1 và P7-M30, chúng tôi tiến hành thí nghiệm Nested-PCR một lần nữa trên hai cặp mồi P7- M30 và P14-M31 (trình bày ở phần Vật liệu và phƣơng pháp). Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi P14-M31 trên khuôn mẫu là sản phẩm cDNA thu đƣợc từ phản ứng sao chép ngƣợc RNA tổng số từ kit ly trích (với quy trình và hóa chất PCR đƣợc giữ nguyên nhƣ chuẩn ban đầu)....

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Luận văn : SỬ DỤNG KỸ THUẬT DAS-ELISA VÀ RT-PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM VÕNG TRÊN CÂY ĐU ĐỦ (Papaya ringspot virus) TẠI HAI TỈNH ĐỒNG NAI VÀ ĐỒNG THÁP part 8

59 TÀI LIỆU TIẾNG NƢỚC NGOÀI 14. Denis Persley, 2004. Papaya ringspot virus. Plant pathology. 15. Duke, J.A. 1978. The quest for tolerant germplasm. p. 1-61. In: ASA Special Symposium 32, Crop tolerance to suboptimal land conditions. Am. Soc. Agron. Madison, WI. 16. Mark A. Ross, 2002. PRSV in papaya. Plant pathology. 17. Duke, J.A. 1984b. Borderline herbs. CRC Press. Boca Raton, FL. 18. Jonh R. Crowther, 2001.Methods in Molecular BiologyTM.Volume 149- The ELISA guidebook. The International Atomic Energy Agency, Vienna, Austria. 420 pages. 19. McPherson M.J. and Møller S.G., 2000. PCR. BIOS. 276 pages. 20. Newton C.R. and Graham A., 1997. PCR. Second edition. ZENECA Pharmaceuticals, Mereside, Alderlay Park, Macclesfield, Cheshire SK10 4TG, UK. βIOS Scientific Publisher. p 1 – 45. 21. Sambrook and Russell. Molecular Cloning- A laboratory manual. Volume 2 and 3. Third edition. CSHL Press. p 7.1 – 7.88; 11.37 – 12.120. 22. Marion F. Bateson, Rosemarie E. Lines, Peter Revill, Worawan Chaleeprom, Cuong V. Ha, Adrian J. Gibbs và James L. Dale, 2002. On the evolution and molecular epidemiology of the potyvirus Papaya ringspot virus. Journal of General Virology. http://www.google.com/mhtml\On%20the%20evolution%20and%20molecular... 23. Marc Fuchs, Stephen Ferreira, Dennis Gonsavel. Management of virus deseases by classical and engineered protection. Molecular plant pathology On- Line http://www.bspp.org.uk/mppol/1997 24. Carol Gonsalves, David R. Lee, Dennis Gonsalves, 1998. Transgenic Virus- Resistant Papaya: The Hawaiian „Rainbow‟ was Rapidly Adopted by Farmer and is of Major Importance in Hawaii Today. APSnet Feature. http://www.google.com/mhtmt\APSnet%20Feature%20Transgenic%20Virus- Resistant%20Papaya.mht
60 25. Dennis Gonsavel, Steve Ferreira, Richard Manshardt, Maureen Fitch, Jerry Slightom, 1998. Transgenic Virus Resistant Papaya: New hope for controlling Papaya ringspot virus. Plant Health Process. http://www.google.com/mhtml\Transgenic%20Virus%20Resistant%20papaya.mht 26. DAS ELISA test system for papaya Ringspot Virus. Agdia. http://www.google.com/mhtml\Agdia%20DAS%20ELISA%20for%20Papaya%20 Ringspot%20Virus.mht 27. Swain, S. and Powell, D.A. 2001. Papaya Ringspot Virus Resistant Papaya. Technical report. http://www.plant.uoguelph.ca/safefood/gmo/papayarep.htm 28. Technology Papaya ringspot virus. Semillas del caribe. http://www.google.com/mhtml\Semillas%20del%20caribe%20%20Technonología. mht
61 PHỤ LỤC Phụ lục 1 Vƣờn canh tác đu đủ ở tỉnh Đồng Nai Phụ lục 2 Vƣờn canh tác đu đủ ở tỉnh Đồng Tháp
62 Phụ lục 3 Bộ kit ly trích AurumTM Total RNA Mini Kit Phụ lục 4 Hình chụp kết quả thí nghiệm với kit PLANTEST® ELISA
63 Phụ lục 5: BẢNG GHI CHÖ MẪU SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM ELISA Tỉnh Đồng Tháp Tỉnh Đồng Nai Địa Huyện Định Huyện Cao Lãnh Huyện Tân Phú bàn Quán ĐQ MH BT TP Tuổi 6 -8 6 -8 6 -8 6 -8 4 -5 4 -5 6 -8 >12 6 -8 9-11 >12 >12 (*) Đp Đp Đp Đp Đp Giống Db Ml Db Db Ml Db Db STT 1 2 3 5 1 2 3 1 2 1 2 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 (+++) (+++) (+++) (+) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (-) (-) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 (+) (+) (+) (-) (-) (+) (+) (-) (-) (-) (++) (+) 3 3 3 3 3 4 3 3 3 3 4 4 3 (+) (+++) (+++) (+) (+) (+) (-) (-) (+) (-) (-) (+) 4 4 4 4 4 6 4 4 4 4 5 5 4 (+) (+) (+++) (+++) (+++) (+) (+) (-) (+) (-) (+) (-) 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 6 6 5 (+++) (+) (+++) (+) (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (-) 6 6 6 6 6 8 6 6 6 6 7 7 6 (+++) (+) (++) (+) (+) (+) (+) (-) (-) (-) (-) (-) 7 7 7 7 7 9 7 7 7 7 8 8 7 (+) (+++) (-) (+) (+++) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (-) 8 8 8 8 8 10 8 8 8 8 9 9 8 (+) (+++) (+++) (+++) (+) (+) (+) (-) (+) (+) (-) (-) 9 9 9 9 9 11 9 9 9 10 10 9 (+) (++) (+++) (-) (-) (++) (+) (+) (-) (+) (-) 10 10 10 10 10 12 10 10 10 11 10 (+) (+++) (+++) (+++) (-) (+) (+) (-) (-) (+) 11 11 11 11 12 (+) 11 (+) (+) (+) (-) 12 13 12 (-) (-) 13 14 13 (-) (-) 14 15 14 (-) (++) 15 16 15 (-) (-) 17 17 16 (-) (+) 18 17 (++) 19 18 (+++) 20 19 (-) 20 Σ 10 10 11 10 10 10 11 8 11 16 19 9 (-)/ 3(-) / 38(+) 7(-) / 24(+) 10(-) / 9(+) 31(-) / 13(+) (+)
64 MH: Xã Mỹ Hiệp BT: Xã Bình Thạnh ĐQ: Huyện Định Quán (mẫu lấy thuộc xã Phú Tân) TP: Huyện Tân Phú (mẫu lấy thuộc hai xã Phú An và Phú Lộc) Db: Giống Da bông Ml: Giống Mã Lai Đp: Giống địa phƣơng (*): Đơn vị tính là tháng Phụ lục 6: MẪU ĐIỀU TRA Mã số ......................................................................................................................... Nơi lấy mẫu ................................................................................................................ Chủ hộ ........................................................................................................................ Giống cây.................................................................................................................... Tuổi cây ...................................................................................................................... Tình trạng vƣờn .......................................................................................................... Cách trồng................................................................................................................... Phƣơng pháp trồng .................................................................................................... Diện tích vƣờn, năng suất ........................................................................................... Độ thuần của vƣờn...................................................................................................... Có vector truyền bệnh hay không? ............................................................................. Mùa vụ ........................................................................................................................ Bệnh có thƣờng xảy ra không? ................................................................................... Triệu chứng................................................................................................................. ....................................................................................................................................
65 Phụ lục 7: BẢNG PHÂN PHỐI MẪU VÀ KẾT QUẢ THU ĐƢỢC TRÊN MỖI DĨA ELISA Đối tƣợng: Mẫu ly trích từ lá đu đủ Thời gian thực hiện: 25-5-2005 Các bƣớc thực hiện: Bƣớc 1: Coating antibodies Bƣớc 2: Coating sample Bƣớc 3: Coating enzyme Bƣớc 4: Substrate Thể tích phân phối: Coating antibody solution: 100 μl/giếng Mẫu ly trích và mẫu đối chứng: 100 μl/giếng Enzyme conjugate solution: 100 μl/giếng PNP substrate (S): 100 μl/giếng BF: Lysis buffer PC: Positive control NC: Negative control DĨA 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 BT S BF B 1.6 1.5 1.3 1.4 2.10 3.8 2.2 2.1 2.3 (+++) (+++) (+) (+) (+++) (+) (-) (+) (+) ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 BT S BF C 1.6 1.5 1.3 1.4 2.10 3.8 2.2 2.1 2.3 (+++) (+++) (+) (+) (+++) (+) (-) (+) (+) ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S PC D 1.7 1.10 1.9 2.5 2.6 3.3 2.9 2.5 2.10 (+) (+) (+) (+++) (+) (-) (+) (-) (-) ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S PC E 1.7 1.10 1.9 2.5 2.6 3.3 2.9 2.5 2.10 (+) (+) (+) (+++) (+) (-) (+) (-) (-) ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 BT BT S NC F 1.2 1.1 1.8 2.4 3.11 3.1 2.7 2.7 2.11 (+) (+++) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) ĐQ ĐQ ĐQ MH1 MH1 MH1 MH1 BT BT S NC G 1.2 1.1 1.8 2.4 3.11 3.1 2.7 2.7 2.11 (+) (+++) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) H
66 DĨA 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A TP TP TP TP TP TP TP TP TP S BF B 2.2 2.10 2.3 2.18 2.8 2.4 3.1 2.5 3.10 (-) (+) (-) (++) (+) (-) ( -) (+) (-) TP TP TP TP TP TP TP TP TP S BF C 2.2 2.10 2.3 2.18 2.8 2.4 3.1 2.5 3.10 (-) (+) (-) (++) (+) (-) ( -) (+) (-) TP TP TP TP TP TP TP TP TP S PC D 2.20 2.13 2.12 2.16 2.17 2.6 2.14 3.5 3.6 (-) (-) (-) (-) (+) (-) ( -) (-) (-) TP TP TP TP TP TP TP TP TP S PC E 2.20 2.13 2.12 2.16 2.17 2.6 2.14 3.5 3.6 (-) (-) (-) (-) (+) (-) ( -) (-) (-) TP TP TP TP TP TP TP TP TP S NC F 2.19 2.15 2.7 2.9 2.11 3.2 2.1 3.4 3.9 (+++) (++) (-) (-) (+) (+) ( -) (+) (-) TP TP TP TP TP TP TP TP TP S NC G 2.19 2.15 2.7 2.9 2.11 3.2 2.1 3.4 3.9 (+++) (++) (-) (-) (+) (+) ( -) (+) (-) H DĨA 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S BF B 5.1 5.6 5.4 5.10 3.3 3.4 3.8 2.8 2.3 (+) (+) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S BF C 5.1 5.6 5.4 5.10 3.3 3.4 3.8 2.8 2.3 (+) (+) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S PC D 5.7 5.2 5.5 3.11 3.1 3.6 3.9 2.9 2.1 (+) (-) (+) (+) (+++) (++) (+++) (++) (++) MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S PC E 5.7 5.2 5.5 3.11 3.1 3.6 3.9 2.9 2.1 (+) (-) (+) (+) (+++) (++) (+++) (++) (++) MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S NC F 5.3 5.8 5.9 3.5 3.2 3.7 3.10 2.2 2.7 (+) (+++) (-) (+++) (+) (+) (+++) (+) (+++) MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 MH1 S NC G 5.3 5.8 5.9 3.5 3.2 3.7 3.10 2.2 2.7 (+) (+++) (-) (+++) (+) (+) (+++) (+) (+++) H
67 DĨA 4 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A ĐQ ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP S BF B 1.1 1.6 1.5 2.4 1.10 1.2 1.6 1.5 1.15 (-) (-) (+) (+) (-) (-) (-) (-) (-) ĐQ ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP S BF C 1.1 1.6 1.5 2.4 1.10 1.2 1.6 1.5 1.15 (-) (-) (+) (+) (-) (-) (-) (-) (-) ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP TP S PC D 1.3 1.2 1.8 1.12 1.11 3.7 1.7 1.14 1.8 (-) (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (+) ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP TP S PC E 1.3 1.2 1.8 1.12 1.11 3.7 1.7 1.14 1.8 (-) (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (+) ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP TP S NC F 1.7 1.4 2.8 1.3 1.13 3.8 1.9 1.4 1.17 (+) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (+) ĐQ ĐQ ĐQ TP TP TP TP TP TP S NC G 1.7 1.4 2.8 1.3 1.13 3.8 1.9 1.4 1.17 (+) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (+) H DĨA 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A BT BT BT BT BT BT BT BT BT S BF B 1.1 1.4 1.7 1.9 2.2 2.4 2.9 3.2 3.9 (+) (+++) (+++) (-) (+) (+) (+) (+) (+) BT BT BT BT BT BT BT BT BT S BF C 1.1 1.4 1.7 1.9 2.2 2.4 2.9 3.2 3.9 (+) (+++) (+++) (-) (+) (+) (+) (+) (+) BT BT BT BT BT BT BT BT BT S PC D 1.2 1.5 1.10 2.11 2.12 2.7 2.10 3.10 3.4 (-) (-) (-) (++) (+) (-) (+) (+) (+) BT BT BT BT BT BT BT BT BT S PC E 1.2 1.5 1.10 2.11 2.12 2.7 2.10 3.10 3.4 (-) (-) (-) (++) (+) (-) (+) (+) (+) BT BT BT BT BT BT BT BT BT S NC F 1.3 1.6 1.8 2.1 2.6 2.8 3.5 3.7 3.6 (+) (+) (+) (-) (+) (+) (-) (+) (-) BT BT BT BT BT BT BT BT BT S NC G 1.3 1.6 1.8 2.1 2.6 2.8 3.5 3.7 3.6 (+) (+) (+) (-) (+) (+) (-) (+) (-) H
68 Phụ lục 8 Kết quả đọc trình từ của mồi P14 trên mẫu Mỹ Hiệp