Nghiên cứu sự biểu hiện CD64 trên quần thể neutrophil của nhóm người bình thường và nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> NGHIÊN CỨU SỰ BIỂU HIỆN CD64 TRÊN QUẦN THỂ NEUTROPHIL<br /> CỦA NHÓM NGƯỜI BÌNH THƯỜNG VÀ NHÓM BỆNH NHÂN<br /> CÓ BỆNH CẢNH NHIỄM TRÙNG<br /> Hà Thị Thu*, Trần Thị Mỹ Hạnh**, Nguyễn Văn Lộc**, Nguyễn Phương Liên***<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu ngiên cứu: Phân tích sự biểu hiện của CD64 trên quần thể neutrophil của nhóm người bình<br /> thường và nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng để đánh giá ý nghĩa của dấu ấn này trong việc chẩn đoán<br /> nhiễm trùng và nhiễm trùng huyết.<br /> Phương pháp nghiên cứu: Mô tả hàng loạt ca. Sử dụng panel CD14 – FITC, CD64 – PE và CD45 –<br /> PerCP và quy trình ly giải – không rửa để nhuộm và xử lý 123 mẫu máu toàn phần của 2 nhóm đối tượng<br /> nghiên cứu: nhóm người bình thường và nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng, được chỉ định cấy máu.<br /> Sau đó thực hiện phân tích mẫu trên hệ thống máy Flow Cytometry – BD FACSCanto II để thu nhận giá trị<br /> CD64 – MFI.<br /> Kết quả nghiên cứu: Trong cả 2 nhóm đối tượng nghiên cứu thì chỉ số CD64 – MFI trên neutrophil luôn<br /> cao hơn so với lympho và thấp hơn so với trên mono. CD64 – MFI trên neutrophil của nhóm 73 bệnh nhân có<br /> bệnh cảnh nhiễm trùng (Median: 1012; IQR: 651 – 1543) cao hơn một cách có ý nghĩa thống kê (P < 0,001) so với<br /> nhóm 50 người bình thường (Median: 385; IQR: 329 – 452). Mặt khác, giá trị MFI – CD64 trên neutrophil của<br /> nhóm cấy máu dương (Median: 892; IQR = 703 – 1269) và cấy máu âm (Median: 1118; IQR: 635 – 1642) không<br /> có sự khác biệt ý nghĩa. Với giá trị ngưỡng cut-off là bách phân vị thứ 90 của CD64 – MFI trên neutrophil của<br /> nhóm người bình thường là 482, 90,9% mẫu trong nhóm cấy máu dương và 92,2% mẫu trong nhóm cấy máu<br /> âm có giá trị cao hơn ngưỡng cut-off.<br /> Kết luận: Trong panel phân tích thì quần thể mono được xem là nội chứng dương còn lympho là nội chứng<br /> âm. CD64 trên neutrophil của nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng đã tăng đáng kể so với nhóm bình<br /> thường. Điều này chứng tỏ CD64 trên neutrophil là một dấu ấn tiềm năng để chẩn đoán nhiễm trùng hay nhiễm<br /> trùng huyết. Tuy nhiên, cần thực hiện các nghiên cứu tiếp theo để đánh giá đồng thời giá trị CD64 trên<br /> neutrophil và các xét nghiệm khác như tổng bạch cầu, CRP, procalcitonin cũng như các dấu hiệu lâm sàng để xác<br /> định được ngưỡng cut-off tối ưu của CD64 trên neutrophil và đánh giá việc sử dụng dấu ấn này để chẩn đoán<br /> sớm nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết.<br /> Từ khóa: nhiễm trùng, nhiễm trùng huyết, CD64, MFI, neutrophil, flow cytometry<br /> <br /> ABSTRACT<br /> CD64 EXPRESSION ON NEUTROPHILS OF NORMAL HEALTHY<br /> AND SUSPECTED INFECTION SUBJECTS<br /> Ha Thi Thu, Tran Thi My Hanh, Nguyen Van Loc, Nguyen Phuong Lien<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - No 2 - 2014: 63 - 70<br /> Objective: Study the expression of surface marker CD64 on neutrophil in healthy and infection or sepsis<br /> suspected subjects and determine the utility of neutrophil CD64 as a diagnostic marker for sepsis or infection.<br /> Materials and methods: Case series. Whole blood of 123 subjects in 2 study groups, healthy and infection<br /> * Trường ĐH Quốc Tế - ĐH Quốc Gia Tp.HCM, ** BV Nhân Dân 115, *** BV. Truyền Máu - Huyết Học<br /> Tác giả liên lạc: Hà Thị Thu<br /> ĐT: 0985 339 661<br /> Email: hathu.546@gmail.com<br /> <br /> 63<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> suspected group were stained with 3-color reagent panel: CD14 – FITC, CD64 – PE and CD45 – PerCP and<br /> processed by Lyse – No Wash procedure. Prepared samples were then analyzed on Flow Cytometer system – BD<br /> FACSCanto II to get results of CD64 – MFI.<br /> Results: In both 2 study groups, CD64 – MFI on neutrophils was always higher than on lymphocytes but<br /> lower than on monocytes. The CD64 expression on neutrophil between 50 subjects of no - infection and 73<br /> subjects of suspected - infection groups was proven to have a statistically significant change with the interquatile<br /> range of 329 – 452 (median 385) and 651 – 1543 (mean 1012) accordingly (P < 0.001). On the other hand, there<br /> is no significant difference between MFI – CD64 on neutrophil of positive blood culture patient group (Median:<br /> 892; IQR = 703 – 1269) and negative blood culture patient group (Median: 1118; IQR: 635 – 1642). As compared<br /> to cut off value, 482, determined from 90th percentile of MFI – CD64 on neutrophil of healthy group, 90.9% of<br /> samples in positive blood culture group and 92.2 of samples in negative blood culture group presented MFI –<br /> CD64 higher than cut-off value.<br /> Conclusion: In panel analyzed, monocyte population is considered as positive internal control whereas<br /> lymphocyte works as negative internal control. For CD64 expression on neutrophil, infection group presented<br /> statically significant increase in comparison to healthy group. This result might prove that neutrophil CD64 will<br /> be a very promising infection biomarker. However, validation in large studies to define strict cut-off value and to<br /> see the correlation between CD64 assay and other infection tests is required before neutrophil CD64 can be<br /> recommended as an infection biomarker for routine use for infection or sepsis diagnosis.<br /> Keywords: infection, sepsis, CD64, flow cytometry, neutrophil<br /> nhưng nhiều tác giả trên thế giới vẫn còn tranh<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> cãi về giá trị của trị số này(15,16). Vì vậy, việc tìm<br /> Cho đến nay, kết quả của các nhà điều tra<br /> kiếm các dấu ấn khác có độ nhạy, độ đặc hiệu<br /> dịch tễ học cho thấy nhiễm trùng hoặc nhiễm<br /> cao để chẩn đoán sớm nhiễm trùng là rất cần<br /> khuẩn huyết, sốc nhiễm khuẩn vẫn là những<br /> thiết và quan trọng để bảo đảm hiệu quả cho<br /> nguyên nhân chính gây tử vong tại các khoa<br /> việc điều trị.<br /> điều trị tích cực (11,15,11). Phương pháp nuôi cấy<br /> vi sinh vẫn được coi là “tiêu chuẩn vàng”<br /> trong chuẩn đoán nhiễm trùng nhưng xét<br /> nghiệm này thường có kết quả âm tính giả khi<br /> bệnh nhân đã được sử dụng kháng sinh từ<br /> trước(6,9,11,16). Mặt khác, thời gian có kết quả vi<br /> sinh thường khá dài, trung bình 48 – 72<br /> giờ(1,1,17). Những xét nghiệm khác như tổng số<br /> bạch cầu và định lượng CRP (C – reactive<br /> protein) thường được sử dụng trong chẩn<br /> đoán nhiễm trùng cũng có độ đặc hiệu không<br /> cao(1,15,1). Ngoài ra, CRP còn được xem như là<br /> một dấu ấn “muộn” vì chỉ số này thường tăng<br /> chậm và đạt giá trị cao nhất ở khoảng thời<br /> điểm 36 giờ sau khi tiếp xúc với nội độc tố(17).<br /> Mặc dù, trong những năm gần đây,<br /> Procalcitonin (PCT), được đánh giá cao trong<br /> chẩn đoán phân biệt các trường hợp viêm<br /> nhiễm do vi khuẩn hay do các tác nhân khác<br /> <br /> 64<br /> <br /> Trong những năm gần đây đã có nhiều công<br /> trình nghiên cứu trên thế giới tập trung vào việc<br /> đánh giá việc sử dụng kháng nguyên CD64 trên<br /> bề mặt tế bào neutrophil để chẩn đoán nhiễm<br /> trùng và nhiễm trùng huyết. Riêng tại Việt Nam<br /> thì theo chúng tôi được biết chưa có công trình<br /> nghiên cứu nào liên quan đến giá trị của dấu ấn<br /> này trong mối tương quan với bệnh nhiễm trùng<br /> hoặc nhiễm trùng huyết được công bố. Do vậy,<br /> chúng tôi thực hiện đề tài này để khảo sát sự<br /> biểu hiện của CD64 trên quần thể tế bào<br /> neutrophil của nhóm người bình thường và<br /> nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng<br /> nhằm đánh giá ý nghĩa của chỉ số này trong việc<br /> chẩn đoán nhiễm trùng và nhiễm trùng huyết.<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> Mục tiêu chuyên biệt<br /> - Xác định giá trị CD64 – MFI trên các quần thể<br /> Lympho, mono để đánh giá vai trò của 2 quần thể<br /> này trong panel nghiên cứu và phân tích.<br /> - Xác định giá trị CD64 – MFI trên neutrophil<br /> của nhóm người bình thường. Qua đó, xác định<br /> được giá trị ngưỡng cut-off của chỉ số này.<br /> - So sánh sự biểu hiện của CD64 trên<br /> neutrophil trong nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh<br /> nhiễm trùng với nhóm người bình thường.<br /> - Đánh giá mối tương quan của chỉ số CD64<br /> trên neutrophil với việc chẩn đoán nhiễm trùng<br /> hoặc nhiễm trùng huyết dựa trên giá trị cut-off<br /> đã xác định.<br /> <br /> ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> Đối tượng nghiên cứu<br /> Gồm 2 nhóm<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> - Nhóm 01: người bình thường, không có<br /> bệnh cảnh nhiễm trùng.<br /> - Nhóm 02: bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm<br /> trùng như sốt và/ hoặc có ổ nhiễm trùng, được<br /> chỉ định cấy máu và được theo dõi điều trị tại<br /> BV 115.<br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> Thiết kế nghiên cứu<br /> Mô tả hàng loạt ca.<br /> Phương pháp tiến hành:<br /> <br /> Lấy máu<br /> Mẫu máu toàn phần sử dụng cho nghiên<br /> cứu đánh giá CD64 được lấy cùng thời điểm lấy<br /> máu làm xét nghiệm cấy máu và được lưu trữ<br /> trong ống có chứa chất chống đông EDTA.<br /> Cấy máu<br /> Mẫu máu được cấy trên hệ thống BD Bactec<br /> 9120 (Becton and Dickinson Company, USA).<br /> <br /> Hình 1: Khoanh vùng phân tích các quần thể tế bào bạch cầu. a) Đồ thị FSC – SSC: loại bỏ nhiễu và quần thể tế<br /> bào eosinophil tự phát quang. b) Đồ thị SSC – CD14 FITC: khoanh vùng quẩn thể mono, dương tính với CD14<br /> FITC. c) Đồ thị SSC – CD45 PerCP sau khi đã loại bỏ quần thể mono: khoanh vùng quần thể neutrophil (SSC<br /> cao và CD45 dương) và quần thể lympho (SSC thấp và CD45 dương tính mạnh). d) Đồ thị SSC – CD64 PE: sự<br /> biểu hiện của CD64 trên cả 3 quần thể mono, neutrophil và lympho và giá trị MFI trên kênh màu PE tương ứng.<br /> Xử lý mẫu phân tích trên hệ thống máy Flow<br /> + Mẫu người bình thường hoặc bệnh nhân: ủ<br /> Cytometry<br /> 50 µl mẫu máu người bình thường hoặc bệnh<br /> <br /> 65<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> nhân được chống đông bằng EDTA với 10 µl<br /> mỗi loại thuốc thử có bản chất là các kháng thể<br /> đơn dòng có đánh dấu huỳnh quang gồm CD14<br /> – FITC, CD64 – PE và CD45 – PerCP (Becton<br /> Dickinson Immunocytometry Systems) trong<br /> điều kiện tránh ánh sáng ở nhiệt độ phòng trong<br /> vòng 15 phút. Sau thời gian 15 phút ủ mẫu với<br /> thuốc thử, thực hiện ly giải hồng cầu với 450 µl<br /> dung dịch BD FACSLysing 1X (Becton<br /> Dickinson Immunocytometry Systems) trong 15<br /> phút ở điều kiện nhiệt độ phòng và tránh ánh<br /> sáng. Sau đó thực hiện chạy mẫu trên hệ thống<br /> máy Flow Cytometry.<br /> + Mẫu chứng âm để xác định tín hiệu nền<br /> của kênh PE khi không nhuộm với CD64 – PE:<br /> chuẩn bị tương tự như quy trình trên nhưng chỉ<br /> sử dụng 2 thuốc nhuộm CD14 – FITC và CD45 –<br /> PerCP để ủ mẫu.<br /> <br /> Thu thập và phân tích mẫu trên hệ thống<br /> Flow Cytometry<br /> Thu thập và phân tích trên phần mềm<br /> FACSDiva 6.0 của hệ thống máy Flow<br /> Cytometry BD FACSCanto II 06 màu (Becton<br /> and Dickinson Company, USA) tại phòng Dấu<br /> Ấn Miễn Dịch của BV Truyền Máu Huyết Học<br /> TP.HCM. Quần thể tế bào Mono được xác định<br /> dựa trên kết quả dương tính với CD14 – FITC<br /> trên đồ thị CD14 – FITC và SSC (tín hiệu tán xạ<br /> bên tương ứng độ phức tạp của tế bào). Sau đó,<br /> khoanh vùng 02 quần thể Neutrophil và<br /> Lympho dựa trên đồ thị CD45 – PerCP và SSC.<br /> Cuối cùng, vẽ đồ thị SSC và CD64 – PE và thể<br /> hiện cả 03 quần thể Mono, Lympho và<br /> Neutrophil trên đồ thị và trên bảng dữ liệu<br /> thống kê tương ứng để xác định giá trị MFI của<br /> từng quần thể tế bào trên kênh màu PE.<br /> Phương pháp thống kê<br /> Thực hiện phân tích dữ liệu trên phần mềm<br /> SPSS 16.0. Tất cả các dữ liệu được thể hiện dưới<br /> dạng giá trị trung vị và khoảng tứ phân vị (IQR).<br /> Sự khác biệt giữa các giá trị trung bình giữa các<br /> nhóm và với ống chứng âm (không nhuộm<br /> <br /> 66<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> CD64 – PE) được đánh giá thông qua phép kiểm<br /> định thống kê Student và χ2 với giá trị P < 0,05.<br /> Định nghĩa biến số<br /> - MFI (median Fluorescence intensity): giá trị<br /> trung vị của cường độ huỳnh quang. Giá trị MFI<br /> càng lớn khi tín hiệu huỳnh quang trên kênh<br /> màu huỳnh quang đó càng lớn và ngược lại.<br /> - IQR (interquartile range): khoảng tứ phân<br /> vị từ tứ phân vị thứ 1 đến tứ phân vị thứ 3<br /> (khoảng cách từ bách phân vị thứ 25 đến bách<br /> phân vị thứ 75).<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu<br /> Bảng 1: Đặc điểm chung về tuổi và giới tính của<br /> quần thể nghiên cứu<br /> Nhóm bình thường<br /> N<br /> <br /> 50<br /> <br /> Nhóm bệnh cảnh<br /> nhiễm trùng<br /> 73<br /> <br /> Tỉ số Nam/Nữ<br /> Tuổi trung bình<br /> <br /> 1:1,17<br /> 41 ± 26<br /> <br /> 1,08:1<br /> 46 ± 34<br /> <br /> - Tổng số lượng mẫu trong nghiên cứu thực<br /> hiện: 123 mẫu, trong đó:<br /> + Nhóm người bình thường: 50 mẫu.<br /> + Nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm<br /> trùng 73 mẫu được chỉ định cấy máu, gồm:<br /> Nhóm cấy máu dương tính: 22/73 mẫu.<br /> Nhóm cấy máu âm tính: 51/73 mẫu.<br /> - Tỉ số nam/nữ ở cả 2 nhóm tương đương<br /> nhau và không có sự khác biệt mang ý nghĩa<br /> thống kê (~1:1).<br /> - Đối tượng nghiên cứu là người trưởng<br /> thành có độ tuổi trong khoảng 15 – 84 tuổi, với<br /> độ tuổi trung bình là 41 ± 26 tuổi (nhóm 01) và 46<br /> ± 34 tuổi (nhóm 02). Độ tuổi khảo sát trên 2<br /> nhóm quần thể nghiên cứu không có sự khác<br /> biệt mang ý nghĩa thống kê.<br /> Kết quả giá trị MFI nền trên kênh huỳnh<br /> quang PE của các ống chứng âm<br /> Bảng 2: Giá trị MFI kênh PE trên 20 ống chứng âm<br /> (không nhuộm hóa chất CD64 – PE)<br /> Quần thể<br /> Mono<br /> <br /> MFI – Trung vị<br /> 182<br /> <br /> IQR<br /> 162 – 203<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> Neutro<br /> Lympho<br /> <br /> 168<br /> 141<br /> <br /> 151 – 179<br /> 117 – 165<br /> <br /> Giá trị MFI của kênh màu huỳnh quang PE<br /> trên cả 3 quần thể Mono, Neutrophil và Lympho<br /> trong 20 ống chứng âm (mẫu chỉ nhuộm với<br /> CD45 – PerCP và CD14 – FITC, không nhuộm<br /> với CD64 – PE) không có sự khác biệt mang ý<br /> nghĩa thống kê ( P > 0,05).<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> So sánh MFI của CD64 – PE trên neutrophil<br /> giữa nhóm cấy máu dương và nhóm cấy máu<br /> âm so với giá trị ngưỡng cut-off<br /> <br /> bình thường<br /> <br /> Ở cả 2 phân nhóm của nhóm bệnh nhân có<br /> bệnh cảnh nhiễm trùng là nhóm cấy máu dương<br /> và nhóm cấy máu âm thì giá trị CD64 – MFI trên<br /> neutrophil đều cao hơn rõ rệt so với giá trị này<br /> của nhóm người khỏe mạnh. Tuy nhiên, giữa 2<br /> phân nhóm thì không thấy sự khác biệt ý nghĩa<br /> (P = 0,082).<br /> <br /> Bảng 3: Giá trị CD64 – MFI trên Lympho,<br /> Neutrophil và Mono nhóm bình thường (n =50)<br /> <br /> Bảng 5: Kết quả MFI CD64 – PE trên neutrophil<br /> giữa 2 nhóm cấy máu dương và âm<br /> <br /> Kết quả MFI của CD64-PE trên nhóm người<br /> <br /> CD64<br /> Mono_CD64<br /> Neutro_CD64<br /> <br /> MFI – trung vị<br /> 2218<br /> 385<br /> <br /> IQR<br /> 1968 - 2626<br /> 329 - 452<br /> <br /> Lympho_CD64<br /> <br /> 198<br /> <br /> 168 - 215<br /> <br /> Giá trị CD64 – MFI trên mono luôn đạt giá trị<br /> cao nhất, tiếp đến là neutrophil và cuối cùng,<br /> CD64 – MFI trên lympho là thấp nhất.<br /> Giá trị cut-off của CD64 trên neutrophil<br /> trong phạm vi đề tài được xác định dựa trên giá<br /> trị bách phân vị thứ 90 của CD64 – MFI trên<br /> neutrophil của nhóm người bình thường và<br /> bằng 482.<br /> Kết quả MFI của CD64-PE trên nhóm bệnh<br /> nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng<br /> Bảng 4: Giá trị MFI của CD64 - PE trên Lympho,<br /> Neutrophil và Mono nhóm bệnh (n=73).<br /> CD64<br /> <br /> MFI - Trung vị<br /> <br /> Mono_CD64<br /> Neutro_CD64<br /> Lympho_CD64<br /> <br /> 4094<br /> 1012<br /> 233<br /> <br /> IQR<br /> <br /> P (so sánh<br /> nhóm 01)<br /> 2988 – 6473<br /> 0,018<br /> 651 – 1543<br /> < 0,001<br /> 200 – 263<br /> 0,082<br /> <br /> - Tương tự nhóm người bình thường, nhóm<br /> bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng cũng có<br /> kết quả CD64 – MFI trên mono đạt giá trị cao<br /> nhất, tiếp đến là neutrophil và cuối cùng trên<br /> lympho thì chỉ số này có giá trị thấp nhất.<br /> - Giá trị MFI của CD64 trên lympho không<br /> có sự khác biệt ý nghĩa trong cả 2 nhóm (P ><br /> 0,05) nhưng đối với quần thể mono và<br /> neutrophil thì chỉ số CD64 – MFI của nhóm bệnh<br /> cao hơn nhóm bình thường (P < 0,05).<br /> <br /> Nhóm cấy máu dương<br /> Nhóm cấy máu âm<br /> <br /> MFI trung vị<br /> 892<br /> 1118<br /> <br /> IQR<br /> 703 – 1269<br /> 635 – 1642<br /> <br /> Bảng 6: kết quả CD64 – MFI trên neutrophil so với<br /> giá trị ngưỡng<br /> Nhóm cấy máu dương<br /> (n = 22)<br /> Nhóm cấy máu âm<br /> (n = 51)<br /> <br /> ≥ Cut - off<br /> 20/22 (90,9%)<br /> <br /> < cut-off<br /> 02/22 (9,1%)<br /> <br /> 47/51 (92,2%)<br /> <br /> 04/51 (7,8%)<br /> <br /> BÀN LUẬN<br /> Theo một số báo cáo trên thế giới, sự biểu<br /> hiện của CD64 trên neutrophil của trẻ em và trẻ<br /> sơ sinh khỏe mạnh cũng như trẻ bị nhiễm trùng<br /> thường cao hơn so với nhóm người trưởng<br /> thành(8,18). Mặt khác, Hoffman và cộng sự cũng<br /> đã nhận định chỉ số CD64 nên được khảo sát<br /> riêng biệt giữa nhóm đối tượng trưởng thành và<br /> trẻ em để tránh sự dao động nhiều trong kết quả<br /> phân tích(8). Do vậy, trong nghiên cứu này,<br /> chúng tôi chỉ tập trung khảo sát đối tượng người<br /> trưởng thành, trong đó bao gồm 50 người bình<br /> thường và 73 người có bệnh cảnh nhiễm trùng<br /> được chỉ định cấy máu. Độ tuổi trung bình của<br /> nhóm khảo sát là 44 tuổi, dao động trong<br /> khoảng 15 – 84 tuổi với tỉ lệ nam và nữ tương<br /> đương nhau. Ngoài ra, trong nhóm 73 bệnh<br /> nhân nghi ngờ có bệnh cảnh nhiễm trùng thì có<br /> 22 người có kết quả cấy máu dương tính và 51<br /> người có kết quả cấy máu âm tính.<br /> <br /> 67<br /> <br />