Nuôi giữ chủng angiostrongylus cantonensis trong phòng thí nghiệm

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> NUÔI GIỮ CHỦNG ANGIOSTRONGYLUS CANTONENSIS<br /> TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM<br /> Lê Thị Xuân*, Trần Thị Huệ Vân*, Phạm Thị Lệ Hoa**,<br /> Lê Kim Ngọc Giao***, Trần Quang Bính****, Nguyễn Trần Chính**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục đích: Xây dựng qui trình nuôi giữ chủng Angiostrongylus cantonensis trong phòng thí nghiệm.<br /> Phương pháp: Chuột Wistar được gây nhiễm qua miệng với ấu trùng giai đoạn 3 (AT-3) bắt được từ<br /> ốc sống trong môi trường. Sáu tuần sau nhiễm, ấu trùng giai đoạn 1(AT-1) trong phân chuột được thu hồi<br /> bằng kỹ thuật Baermann để gây nhiễm cho ốc Biomphalaria glabrata nuôi trong phòng thí nghiệm với các<br /> liều 50 AT/ốc, 100AT/ốc và 200 AT/ốc. Khảo sát tìm ấu trùng và quan sát sự phát triển ấu trùng trên 50<br /> ốc theo thời gian (ngày 3, 5, 7, 9, 11, 15, 20, 24, 28 và 30). AT-3 thu được từ ốc được gây nhiễm cho 20<br /> chuột thế hệ hai. 2/20 chuột lần lượt được khảo sát mỗi tuần để tìm giun ở não, tim và phổi từ tuần thứ 1<br /> đến tuần thứ 10. Phân chuột được gây nhiễm thế hệ 2 được khảo sát tìm AT-1 mỗi tuần từ tuần thứ 3 đến<br /> thứ 6.<br /> Kết quả: Giun non được phát hiện ở tim và phổi vào tuần thứ 4. AT-1 xuất hiện trong phân chuột gây<br /> nhiễm thế hệ hai vào tuần thứ 6. Sự phát triển và hình thái của ấu trùng trên ốc nhiễm giun nuôi trong<br /> phòng thí nghiệm theo thời gian tương tự như mô tả trong tự nhiên.<br /> Kết luận: Có thể nuôi giữ chủng Angiostrongylus cantonensis trong phòng thí nghiệm. Sự thành<br /> công trong việc nuôi giữ chủng Angiostrongylus cantonensis trong phòng thí nghiệm tạo một nguồn mẫu<br /> vật dồi dào và ổn định cho các nghiên cứu về Angiostrongylus cantonensis trong tương lai.<br /> Từ khoá: Wistar, Biomphalaria glabrata, Angiostrongylus cantonensis<br /> <br /> ABSTRACT<br /> CULTIVATION OF ANGIOSTRONGYLUS CANTONENSIS IN THE LABORATORY CONDITION<br /> Le Thi Xuan, Tran Thi Hue Van , Pham Thi Le Hoa, Le Kim Ngoc Giao, Tran Quang Binh,<br /> Nguyen Tran Chinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 – 2011: 47 - 54<br /> Objective: To establish the procedure of cultivation Angiostrongylus cantonensis in the laboratory<br /> condition.<br /> Methods: Wistar rats were orally infected by the third-stage larvae of A. cantonensis collected from<br /> snails at their natural environment. Six weeks after infection, the first-stage larvae isolated from fresh feces<br /> of these infected rats using Baermann funnel had been infected to Biomphalaria glabrata snails at the dose of<br /> 50 larvae/snail, 100 larvae/snail and 200 larvae/snail. The third-staged larvae from these snails were<br /> identified, counted and were infected to 6 groups of 20 rats at 6 different doses. The parasites from feces of<br /> the rats were counted weekly until 6 weeks after infection. The brain, heart and lungs of these infected rats<br /> were dissected weekly to observe the worms until 10 weeks after infection.<br /> *<br /> <br /> Bộ môn Ký sinh trùng, khoa Y, Đại học Y Dược Tp. Hồ Chí Minh<br /> Bộ môn Nhiễm, khoa Y, Đại học Y Dược Tp. Hồ Chí Minh<br /> ***<br /> Bộ môn Vi sinh, khoa Y, Đại học Y Dược Tp. Hồ Chí Minh<br /> ****<br /> Khoa Bệnh Nhiệt Đới, Bệnh viện Chợ Rẫy<br /> Địa chỉ liên hệ: PGS.TS Lê Thị Xuân<br /> ĐT:<br /> **<br /> <br /> Chuyên Đề Khoa học Cơ bản<br /> <br /> Email:<br /> <br /> 47<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Results: The adult worm were found in heart and lungs of the infected rats at 5 weeks and the firststage larvae were detected in feces at 6 weeks. The identity of larvae on snails in the laboratory culture<br /> during time of observation was similar to the larvae in the natural life cycle.<br /> Conclusion: The successful establishment of life cycle of Angiostrongylus cantonensis in laboratory<br /> conditions provide a tool for further study.<br /> Key words: Wistar, Biomphalaria glabrata, Angiostrongylus cantonensis.<br /> nghiệm nhằm phục vụ cho giảng dạy và<br /> MỞ ĐẦU<br /> nghiên cứu.<br /> Angiostrongylus cantonensis (A. cantonensis)<br /> MỤC TIÊU<br /> loại giun gây bệnh trên chuột truyền sang<br /> - Xác định liều ký sinh trùng gây nhiễm<br /> người do ăn uống qua trung gian ốc nhiễm<br /> tối<br /> ưu<br /> cho chuột và cho ốc<br /> bệnh hay nước chứa ấu trùng. Trên người<br /> giun hay gây bệnh lý viêm màng não tăng<br /> bạch cầu toan tính. Bệnh lý này đang là chủ<br /> đề được quan tâm nhiều ở nhiều nước ở vùng<br /> nhiệt đới và cận nhiệt đới.<br /> Trên thế giới, bệnh do A. cantonensis lưu<br /> hành ở một số đảo khu vực Thái Bình Dương,<br /> vùng biển Caribê, Đông Á, Đông Nam Á. Tại<br /> Đông Nam Á, bệnh thường được báo cáo ở<br /> Nhật Bản, Đài Loan và Thái Lan (Wang và cs.<br /> 2008) (16). Ở Việt Nam, đã có một số báo cáo<br /> về bệnh viêm màng não-não do A.<br /> cantonensis ở cả hai miền Bắc và Nam (8,9,10,11).<br /> Trong chu trình phát triển, A. cantonensis<br /> sống trên hai loại ký chủ là chuột (ký chủ<br /> vĩnh viễn chứa giun ở giai đoạn trưởng<br /> thành) và ốc (ký chủ trung gian chứa ấu trùng<br /> giai đoạn 3). Nhiều lĩnh vực liên quan đến đặc<br /> tính sinh học, hình thể, quan hệ ký chủ-ký<br /> sinh trùng A. cantonensis đã được nghiên cứu<br /> nhưng thường gặp trở ngại chính khi tiến<br /> hành các nghiên cứu này là phải tìm nguồn ký<br /> sinh trùng trong môi trường tự nhiên, vì vậy<br /> thường vất vả, tốn kém, không chủ động<br /> được thời gian.<br /> Việc chủ động có được nguồn ký sinh<br /> trùng đủ dùng và ổn định là khâu quan trọng<br /> góp phần vào thành công của nghiên cứu.<br /> Mục tiêu của nghiên cứu này là xây dựng quy<br /> trình và xác định hiệu quả của việc nuôi giữ<br /> chủng giun A. cantonensis trong phòng thí<br /> <br /> 48<br /> <br /> - Mô tả sự phát triển của giun trong chuột<br /> theo thời gian. Xác định tỷ lệ thu hồi giun sau<br /> gây nhiễm và thời gian tối ưu để thu hồi giun<br /> trên chuột.<br /> - Mô tả sự phát triển của giun trong ốc<br /> theo thời gian.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> Vật liệu<br /> Chuột Wistar 6-8 tuần tuổi làm ký chủ<br /> vĩnh viễn để quan sát phát triển giun sau gây<br /> nhiễm. Ốc Biomphalaria glabrata nuôi trong<br /> phòng thí nghiệm, làm ký chủ trung gian để<br /> quan sát kết quả gây nhiễm trên ốc; Dung<br /> dịch làm tiêu mô HCl-pepsin 1%. Những<br /> chuột bị nhiễm bất kỳ một loại ký sinh trùng<br /> đường ruột đều bị loại ra.<br /> <br /> Kỹ thuật<br /> Gây nhiễm AT-3 cho chuột bằng ống<br /> thông dạ dày qua đường miệng. Thu hồi ấu<br /> trùng trong ốc và phân chuột bằng kỹ thuật<br /> Baermann. Xác định giống loài và phân loại<br /> giai đoạn trưởng thành của giun trưởng thành<br /> hay ấu trùng của A. cantonensis dựa vào các<br /> đặc điểm hình thái học kinh điển.<br /> <br /> Để khảo sát sự phát triển của giun trong<br /> chuột; xác định tỷ lệ thu hồi giun và thời<br /> gian tối ưu để thu hồi giun trên chuột<br /> Xác định liều AT-3 gây nhiễm cho chuột: 30<br /> chuột Wistar nặng từ 180 -220g/con được chia<br /> thành 6 nhóm (mỗi nhóm 5 chuột), 1 nhóm<br /> <br /> Chuyên Đề Khoa học Cơ bản – Y tế Công cộng<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> chứng và 5 nhóm được gây nhiễm với ấu<br /> trùng giai đoạn 3 (AT-3) với liều 50AT-3,<br /> 100AT-3, 200AT-3, 400AT-3 và 800AT-3. Sau<br /> khi gây nhiễm, chuột được theo dõi và ghi<br /> nhận: số lượng chuột sống trong vòng 2<br /> tháng. Phân tích kết quả thu được để xác định<br /> liều gây nhiễm cho các thí nghiệm cho các<br /> mục tiêu còn lại.<br /> Khảo sát sự phát triển của giun trong chuột,<br /> xác định tỷ lệ và thời gian tối ưu để thu hồi giun<br /> trên chuột: 30 chuột được gây nhiễm với liều<br /> được xác định ở giai đoạn trên. Tìm ấu trùng<br /> giai đoạn 1 (AT-1) trong phân chuột định kỳ 1<br /> lần/ tuần trong 12 tuần. Quan sát tìm giun<br /> trong mô não, tim và phồi chuột mỗi tuần từ<br /> tuần thứ 3 đến tuần 12 sau nhiễm.<br /> <br /> Để xác định liều gây nhiễm thực nghiệm cho<br /> ốc, xác định tỷ lệ thu hồi giun và thời gian<br /> tối ưu để thu hồi giun trên ốc.<br /> Xác định liều AT3 gây nhiễm cho ốc: gây<br /> nhiễm cho 120 ốc Biomphalaria glabrata,<br /> đường kính 1 -1,5 cm, chia thành 6 nhóm (20<br /> ốc mỗi nhóm), 1 nhóm làm chứng và 5 nhóm<br /> được gây nhiễm với các liều 50AT-3, 100AT-3,<br /> 200AT-3, 400AT-3, 800AT-3. Theo dõi ốc trong<br /> 4 tuần và ghi nhận số ốc sống đến cuối kỳ<br /> thực nghiệm. Xác định liều gây nhiễm an toàn<br /> cho ốc (ốc nhiễm bệnh vẫn sống và<br /> phát triển).<br /> Khảo sát sự phát triển của giun trong ốc: gây<br /> nhiễm cho 50 ốc với liều được chọn. Theo dõi<br /> sự phát triển về hình thái học của ấu trùng<br /> trong ốc vào các thời điểm ngày thứ 3, 7, 11,<br /> 16, 20, 24 và 30 sau nhiễm. Định danh và giai<br /> đoạn phát triển của AT dựa vào phân loại<br /> theo Hara và Kojima năm 1990 và của Bộ môn<br /> giun sán, Khoa Y học Nhiệt Đới, ĐH Mahidol,<br /> Thái Lan.<br /> Hara và Kojima năm 1990:<br /> AT-1 giai đoạn đầu: di động nhanh, ruột<br /> chưa nở rộng; AT-1 giai đoạn giữa : di động<br /> chậm, ruột nở rộng, kích thước gia tăng nhẹ;<br /> AT-1 giai đoạn cuối: kích thước gia tăng, hình<br /> chữ C, khối lượng thực phẩm tăng.<br /> <br /> Chuyên Đề Khoa học Cơ bản<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> AT-2: ấu trùng nằm trong lớp vỏ của lần<br /> lột xác đầu.<br /> AT-3: ấu trùng nằm trong 2 lớp vỏ của lần<br /> lột xác đầu và thứ hai, phần miệng có 2 thể<br /> hình que bằng chitin.<br /> Phân loại theo tiêu chuẩn của Bộ môn giun<br /> sán, Khoa Y học Nhiệt Đới, ĐH Mahidol,<br /> Thái Lan:<br /> Ấu trùng giai đoạn 1: kích thước từ 0,260,3 x 0,014-0,017mm, đuôi nhọn.<br /> Ấu trùng giai đoạn 3: kích thước từ 0,460,52 x 0,029-0,036 mm, miệng có 2 cấu trúc<br /> hình que bằng chitin. Thực quản hình ụ<br /> phình. Đuôi nhọn.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Kết quả gây nhiễm chuột.<br /> Liều AT-3 gây nhiễm cho chuột.<br /> Số lượng chuột còn sống sau nhiễm được<br /> trình bày trong bảng 1<br /> Bảng 1. Tỷ lệ chuột sống sau 3 tháng (n=30):<br /> Liều gây<br /> nhiễm<br /> 0<br /> <br /> Số chuột sống (%)<br /> <br /> 1<br /> <br /> 50<br /> <br /> 5/5 (100)<br /> <br /> 2<br /> <br /> 100<br /> <br /> 3/5 (60)<br /> <br /> 3<br /> <br /> 200<br /> <br /> 2/5 (40)<br /> <br /> 4<br /> <br /> 400<br /> <br /> 0/5 (0)<br /> <br /> 5<br /> <br /> 800<br /> <br /> 0/5 (0)<br /> <br /> Nhóm chuột<br /> Chứng<br /> <br /> 5/5 (100)<br /> <br /> Với liều 800 AT-3, tất cả chuột đều chết<br /> trong tuần đầu sau nhiễm. Với liều 400<br /> AT/chuột, chuột chết dần từ tuần thứ 2 đến<br /> tuần thứ 4 sau nhiễm. Liều 50 AT3/chuột gây<br /> nhiễm cho chuột cho thấy cả 5 chuột đều sống<br /> đến cuối đợt thí nghiệm (3 tháng). Chúng tôi<br /> chọn liều 50AT3 cho những lần gây nhiễm<br /> chuột về sau.<br /> <br /> Khảo sát sự phát triển của giun trong chuột<br /> (n=30)<br /> Sau khi gây nhiễm với liều 50AT-3/chuột<br /> cho 30 chuột, kết quả tìm ấu trùng giai đoạn 1<br /> trong phân chuột và giun trưởng thành ở tim<br /> <br /> 49<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> và phổi chuột theo thời gian thể hiện trong<br /> bảng 2.<br /> Bảng 2: Thời điểm xuất hiện của AT-1 trong phân<br /> chuột và giun trong tim và phổi chuột.<br /> Thời điểm sau<br /> nhiễm (tuần)<br /> <br /> 1 -3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> 7<br /> 8<br /> 9<br /> 10<br /> 11<br /> 12<br /> <br /> AT1/phân<br /> <br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> có<br /> có<br /> có<br /> có<br /> có<br /> có<br /> có<br /> <br /> Số lượng giun trưởng<br /> thành ở tim và phổi /1<br /> chuột<br /> Tổng số Giun Giun cái<br /> đực<br /> 0<br /> 11<br /> 24<br /> 10<br /> 14<br /> 37<br /> 17<br /> 20<br /> 42<br /> 19<br /> 23<br /> 44<br /> 19<br /> 25<br /> 44<br /> 22<br /> 22<br /> 46<br /> 20<br /> 26<br /> 48<br /> 21<br /> 27<br /> 41<br /> 20<br /> 21<br /> <br /> Theo bảng có thể nhận thấy giun có thể<br /> phát hiện được ở tim, phổi sớm nhất từ tuần<br /> thứ 4 sau nhiễm. Thời điểm AT-1 xuất hiện<br /> trong phân muộn hơn trong phổi và tim, sớm<br /> nhất vào tuần thứ 6. Số lượng giun thu hồi ở<br /> tim và phổi chuột sau nhiễm 4 và 5 tuần còn<br /> thấp, sau đó tăng lên và ổn định cho đến cuối<br /> đợt quan sát. Số lượng giun cái nhiều hơn<br /> giun đực.<br /> <br /> Kết quả gây nhiễm cho Ốc<br /> Liều AT-3 gây nhiễm cho ốc:<br /> Kết quả gây nhiễm cho 6 nhóm ốc được<br /> trình bày theo bảng 3.<br /> Bảng 3: Kết quả gây nhiễm cho ốc (n=120)<br /> Nhóm ốc<br /> <br /> Liều gây nhiễm<br /> <br /> Số ốc sống (%)<br /> <br /> Chứng<br /> <br /> 0<br /> <br /> 20/20 (100)<br /> <br /> 1<br /> <br /> 50<br /> <br /> 20/20 (100)<br /> <br /> 2<br /> <br /> 100<br /> <br /> 20/20 (100)<br /> <br /> 3<br /> <br /> 200<br /> <br /> 18/20 (90)<br /> <br /> 4<br /> <br /> 400<br /> <br /> 11/20 (55)<br /> <br /> 5<br /> <br /> 800<br /> <br /> 4/20 (20)<br /> <br /> Khảo sát sự phát triển của giun trong ốc.<br /> Theo dõi sự phát triển của ấu trùng trong<br /> ốc, chúng tôi nhận thấy :<br /> - Ngày 3: AT-1 có ruột như 1 ống hẹp,<br /> chưa nở rộng.<br /> - Ngày 5: AT-1 có kích thước lớn hơn,<br /> hình chữ C, ruột đã nở rộng.<br /> - Ngày 7: AT-2 nằm trong lớp vỏ của lần<br /> lột xác đầu.<br /> - Ngày 11: AT-3 nằm trong 1 lớp vỏ, ở<br /> đầu trước có 2 thể hình que bằng chitin.<br /> - Ngày 16: AT có 1 vỏ, AT không có vỏ, cả<br /> hai đều 2 thể hình que ở đầu<br /> - Ngày 20 : AT không vỏ có 2 thể hình que<br /> bằng chitin ở đầu<br /> - Từ ngày 24 – 30 : AT không vỏ có 2 thể<br /> hình que bằng chitin ở đầu, thực quản hình ụ<br /> phình và hậu môn thấy rõ.<br /> Như vậy, trong thí nghiệm này, chúng tôi<br /> thấy ấu trùng lột xác lần đầu vào ngày thứ 7<br /> nhưng số lượng ấu trùng có 1 vỏ ít so với với<br /> ấu trùng không có vỏ. Ấu trùng lột xác lần 2<br /> vào ngày thứ 11 có 1 vỏ và có 2 thể hình que<br /> ở đầu. Ngày thứ 16, AT có 1 vỏ và AT không<br /> vỏ đều có 2 thể hình que ở đầu.<br /> Từ ngày 20 đến 30, đa số AT không vỏ với<br /> 2 thể hình que ở đầu, thực quản hình ụ phình<br /> và hậu môn thấy rõ. Trong quá trình theo dõi,<br /> chúng tôi không phát hiện được AT có 2 vỏ.<br /> <br /> BÀN LUẬN<br /> Về kết quả gây nhiễm Chuột<br /> <br /> Liều gây nhiễm 800AT-3 gây 16/20 ốc chết<br /> ngay trong vòng 3 ngày đầu sau nhiễm.<br /> Nhóm ốc được gây nhiễm với liều 400AT-3,<br /> có 11/20 ốc chết rải rác trong 2 tuần. Nhóm<br /> gây nhiễm với liều 200AT-3 có 2/20 ốc chết<br /> <br /> 50<br /> <br /> vào tuần thứ 3. Với kết quả trên đây chúng tôi<br /> chọn liều gây nhiễm 200AT-3/ốc cho những<br /> lần thí nghiệm sau.<br /> <br /> Trên thế giới, để gây nhiễm A. cantonensis<br /> trong phòng thí nghiệm người ta thường<br /> dùng chuột Wistar và chuột Sprague Dawley.<br /> Trọng lượng của chuột từ 160 g đến 300 g (20).<br /> Trong thí nghiệm của chúng tôi dùng chuột<br /> Wistar, trọng lượng của chuột khi gây nhiễm<br /> khoảng 200 gram.<br /> <br /> Chuyên Đề Khoa học Cơ bản – Y tế Công cộng<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> Về liều gây nhiễm cho chuột<br /> Liều gây nhiễm cho chuột trên thế giới<br /> thay đổi tùy tác giả, thông thường từ 15- 150<br /> AT-3/chuột. Bhopale và cs (1985) ghi nhận gây<br /> nhiễm với liều cao (10.000 AT/chuột), chuột<br /> chết trong vòng 6 ngày và với liều 100<br /> AT/chuột thì không có chuột nào chết cho đến<br /> ngày thứ 415 sau nhiễm (2). Theo Kanbara và<br /> cs (1988) có thể gây nhiễm cho chuột Wistar<br /> 120-150g với liều 150 AT-3 (7). Trong thí<br /> nghiệm của Kamiya và cs cho thấy khi gây<br /> nhiễm chuột với liều 100 AT thì số giun thu<br /> được cao nhất (6). Thí nghiệm của chúng tôi<br /> cho thấy liều 50AT-3/chuột là phù hợp vì gây<br /> nhiễm và thu hồi được giun nhưng không làm<br /> chết chuột. Kết quả của chúng tôi phù hợp với<br /> nhận xét của Yong và Dobson năm 1982 (18).<br /> Về thời điểm AT, giun xuất hiện ở não, tim<br /> và phổi<br /> Theo y văn, AT-3 sẽ lên não sau khi vào ký<br /> chủ và sẽ ở đấy cho đến 3 tuần sau và lột xác<br /> 2 lần. Sau đó, giun non sẽ theo máu trở về<br /> phổi và ký sinh trong động mạch phổi. Chúng<br /> tôi ghi nhận AT có mặt ở não một tuần sau<br /> nhiễm, đến tuần thứ 5 vẫn còn AT ở não.<br /> Khảo sát giun ở tim và phổi, chúng tôi<br /> nhận thấy giun xuất hiện từ tuần thứ 4 sau<br /> nhiễm, lúc đó giun còn non, giun trưởng<br /> thành dần sau một vài tuần.<br /> Xét nghiệm phân hàng tuần sau nhiễm,<br /> chúng tôi phát hiện được AT-1 vào tuần thứ 6<br /> sau nhiễm.<br /> Theo quan sát của Bhopale, AT bắt đầu<br /> xuất hiện ở não từ ngày 5, kéo dài đến ngày<br /> thứ 21 sau nhiễm. Từ ngày 21, số lượng AT ở<br /> não giảm xuống và có một số ít giun đã trở về<br /> tim phổi. Ngày 30, AT ở não ít đi và bắt đầu<br /> xuất hiện ở tim, phổi. Kết quả của chúng tôi<br /> cũng phù hợp với tác giả Bhopale và cs (1985)<br /> (2). Yoshimura và cs (1976) gây nhiễm cho<br /> chuột với liều từ 65-106 AT, đã thấy được AT<br /> ở não từ tuần thứ 3 và có giun ở tim phổi và<br /> từ tuần thứ 4 sau nhiễm và từ tuần thứ 5 trở<br /> đi thì chỉ còn thấy giun ở tim phổi. Từ ngày<br /> <br /> Chuyên Đề Khoa học Cơ bản<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> 30 đến ngày 41, AT hiện diện ở tim và phổi,<br /> số giun ở phổi nhiều hơn ở tim. AT-1 xuất<br /> hiện trong phân chuột vào từ tuần thứ 6 sau<br /> nhiễm (20). Kết quả của nghiên cứu này cũng<br /> rất phù hợp với quan sát của Yoshimura như<br /> trên.<br /> <br /> Tỷ lê giun thu hồi trên chuột<br /> Trong nghiên cứu này, tỷ lệ giun thu hồi<br /> được ở tuần đầu khi giun xuất hiện ở tim phổi<br /> là 48%, tỷ lệ này tăng lên vào những tuần sau,<br /> tỷ lệ cao nhất là 96%. Trong thí nghiệm của<br /> Bhopale và cs (1985): Số lượng AT thu được ở<br /> não tối đa vào ngày thứ 5 (35 ± 0,54) với liều<br /> nhiễm 100AT/chuột) và duy trì ở mức cao từ<br /> ngày tứ 7 đến ngày 21 rồi sau đó giảm dần.<br /> Theo Bhopale, với liều 100 AT/chuột cho số<br /> lượng giun thu hồi được cao nhất (47%) vào<br /> ngày thứ 21 và sau đó giảm nhiều. Tác giả<br /> giải thích tỷ lệ thu hồi giun thấp là do không<br /> phải tất cả AT từ não đều có thể tìm được<br /> đường về tim phổi và hệ miễn dịch của chuột<br /> có thể điều chỉnh số lượng AT được đưa vào<br /> cơ thể chuột. Liều cao quá sẽ hoạt hóa hệ<br /> miễn dịch của chuột để loại bỏ số AT thừa. Tỷ<br /> lệ thu hồi giun của chúng tôi cao có thể do<br /> chúng tôi chọn liều nhiễm thấp (50AT/chuột)<br /> nên phù hợp với sức chịu đựng của chuột (2) .<br /> Tỷ lệ giun đực/cái thu hồi được trong tim và<br /> phổi chuột<br /> Quan sát tỷ lệ giun cái và đực trong phân<br /> chuột như bảng 2 cho thấy giun cái thường<br /> chiếm nhiều hơn giun đực trên một chuột. Kết<br /> quả này cũng đã được ghi nhận bởi các tác giả<br /> Yoshimura (1979), Yong và Dobson (1982) và<br /> Pipitgool (1997) (19, 17, 12) .<br /> <br /> Về kết quả gây nhiễm Ốc<br /> Các loại ốc là ký chủ trung gian có vai trò<br /> đặc biệt quan trọng trong sự lây truyền A.<br /> cantonensis trong môi trường là Achatina<br /> fulica Pomacea canaliculata và Pila spp. A.<br /> fulica được xem là có vai trò quan trọng làm<br /> lan tràn giun này khắp thế giới (3, 15, 16, 14). Trong<br /> phòng thí nghiệm, ốc thường được dùng làm<br /> vật chủ trung gian của A. cantonensis là<br /> <br /> 51<br /> <br />