PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN

Chia sẻ: Lan Nguyen | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:31

Thêm vào BST

Báo xấu

181
lượt xem 29
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Kỹ thuật chống ngoại nhiễm sản phẩm khuếch đại Nguyên tắc PCR mix có thêm dUTP và men UNG (Uracil DNA glycosidase) Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCR

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN

PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN
NỘI DUNG  Nguyên tắc PCR  Phản ứng PCR  Các loại PCR  Real-time PCR  Ứng dụng của PCR  PCR chẩn đoán tác nhân vi sinh vật
NGUYÊN TẮC CỦA PCR Thử nghiệm nhân bản 4 1 một đoạn DNA trong ống nghiệm dựa vào 2 các chu kỳ nhiệt 3 n 2n
NGUYÊN TẮC CỦA PCR Chu kỳ nhiệt DNA đích 3 giai đoạn : 1 Biến tính (94oC )  Biến tính  Bắt cặp  Kéo dài 2 Bắt cặp (55-65o C) 5’ 3’ 3’ 5’ 3 Kéo dài (72o C)
PHẢN ỨNG PCR PCR mix Mồi Taq polymerase dNTP PCR PCR buffer + MgCl2 MIX DNA đích (Template)
30X-40X 94oC/15s-1min 55-65oC/15s-1min 72oC/30s-3min
PHẢN ỨNG PCR Máy luân nhiệt  Tạo chu kỳ nhiệt  Buồng ủ nhiệt  Nhiệt độ lên xuống chính xác, đồng nhất  Tốc độ tăng giảm nhiệt độ cực nhanh theo chu kỳ
PHẢN ỨNG PCR Men polymerase chịu nhiệt  Tách chiết từ VK Thermus aquaticus (Taq polymerase)  Tái tổ hợp từ VK E. coli / VK không chịu nhiệt
PHẢN ỨNG PCR Kỹ thuật chống ngoại nhiễm sản phẩm khuếch đại Nguyên tắc  PCR mix có thêm dUTP và men UNG (Uracil DNA glycosidase)  Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U  Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCR
CÁC LOẠI PCR Monoplex PCR 940C for 30” PCR 40X 550C for 30” 720C for 01’
CÁC LOẠI PCR Multiplex PCR 940C for 30” PCR 40X 550C for 30” 720C for 01’
CÁC LOẠI PCR Touch down PCR 940C for 30” 05X 650C for 30” 940C for 30” PCR 05X 600C for 30” 940C for 30” 40X 550C for 30” 720C for 01’
CÁC LOẠI PCR Nested PCR 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’ 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’
CÁC LOẠI PCR Nonstop nested PCR 94oC for 30” PCR 10X 65oC for 30” 72oC for 01’ 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’
CÁC LOẠI PCR RT- PCR (one-step) RNA RNA RT RT (reverse (reverse transcription) transcription) PCR PCR
CÁC LOẠI PCR RT- PCR (two-step) RNA RNA RT RT (reverse (reverse transcription transcription ) ) RT with specific RT with random primers primers PCR PCR
Real-time PCR Nguyên tắc
Real-time PCR Biểu đồ khuếch đại
Real-time PCR Biểu đồ chuẩn