Sàng lọc vi khuẩn có tiềm năng sản xuất chất chống oxy hóa

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> SÀNG LỌC VI KHUẨN CÓ TIỀM NĂNG SẢN XUẤT CHẤT CHỐNG OXY<br /> HÓA<br /> Vũ Thanh Thảo*, Vòng Phượng*, Lê Thị Hoàng Anh*, Nguyễn Minh Thái*, Trần Cát Đông*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Sự mất cân bằng động giữa quá trình sản xuất oxy hoạt động và hệ thống đánh bắt gốc tự do tăng<br /> theo lứa tuổi là nguyên nhân dẫn đến nhiều bệnh nguy hiểm, trong đó có bệnh tiểu đường và bệnh Alzheimer. Vì<br /> vậy, cần có những nghiên cứu phát triển và tối ưu hóa hiệu quả các chất chống oxy hóa có nguồn gốc tự nhiên<br /> nhằm bảo vệ cơ thể trước các gốc tự do và làm chậm diễn tiến của các bệnh mạn tính. Nhiều loài thực vật và nấm<br /> bậc cao đã được chứng minh có chứa chất oxy hóa, trong khi đó chưa có nhiều nghiên cứu về vi khuẩn có tiềm<br /> năng sinh chất chống oxy hóa.<br /> Mục tiêu: Sàng lọc tiềm năng sinh chất chống oxy hóa của các vi khuẩn phân lập từ các mẫu đất và nước tại<br /> một số tỉnh thành ở miền Nam Việt Nam .<br /> Phương pháp: Phân lập bằng phương pháp pha loãng và trải đĩa trên môi trường Trypticase Soy Agar.<br /> Định tính hoạt tính chống oxy hóa bằng phương pháp bản mỏng DPPH cải tiến, các thành phần nội bào được<br /> chiết bằng hệ thống bể siêu âm trong dung môi thích hợp.<br /> Kết quả: Từ 204 mẫu ban đầu, sàng lọc được 367 chủng vi khuẩn, trong đó có 40 chủng có hoạt tính chống<br /> oxy hóa. Một số chủng có cả chất chống oxy hóa ở dịch nội bào và dịch ngoại bào. Các chủng vi khuẩn có hoạt tính<br /> chống oxy hóa đều được định danh, trong đó có 17 chủng thuộc 9 loài được xem là an toàn.<br /> Kết luận: Đây là nghiên cứu đầu tiên sử dụng phương pháp bản mỏng DPPH kết hợp với bể tán siêu âm<br /> trong dung môi thích hợp để sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa từ vi khuẩn. Nghiên cứu này chứng tỏ các chủng<br /> vi khuẩn phân lập từ đất và nước có hoạt tính oxy hóa ở dịch nội bào và dịch ngoại bào. Cần có những nghiên cứu<br /> nhằm định lượng và khảo sát đặc tính probiotic của các chủng tiềm năng.<br /> Từ khóa: Chống oxy hóa, vi khuẩn, bản mỏng DPPH, siêu âm, dung môi.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> SCREENING POTENTIAL ANTIOXIDANT PRODUCING BACTERIA<br /> Vu Thanh Thao, Vong Phuong, Le Thi Hoang Anh, Nguyen Minh Thai, Tran Cat Dong<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - Supplement of No 2 - 2014: 277 - 282<br /> Background: The disruption of the delicate balance between generation of reactive oxygen species (ROS) and<br /> antioxidant scavenging systems of increasing age could lead to serious health problems such as diabetes and<br /> Alzheimer’s disease. Thus, it is essential to develop and utilize effective natural antioxidants in order to protect<br /> human body from free radicals and retard the progress of many chronic diseases. A number of plants and<br /> mushrooms are commonly known as source of antioxidants but there are few reports on bacteria.<br /> Objectives: Screening antioxidant producing bacteria isolated from soil and water sample that collected from<br /> different regions in Southern of Vietnam.<br /> Methods: Isolate bacteria using dilution technique, then spread on Trypticase Soy Agar. Screening<br /> antioxidant activity applying modify dot blot DPPH assay method, extract intracellular compoment with<br /> ultrasonic bath and suitable solvent.<br /> ∗<br /> <br /> Khoa Dược, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: ThS. Vũ Thanh Thảo<br /> ĐT: 0985353384<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Email: vuthanhthao@uphcm.edu.vn<br /> <br /> 277<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Results: From initial 204 samples, 367 strains have been isolated in which 40 strains have potential<br /> antioxidant. Some strains have both intracellular and extracellular antioxidant substances. Preliminary<br /> identification of 40 strains have antioxidant activity, obtained 17 strains of 9 species are considered safe for use.<br /> Conclusion: It is the first study that use modified DPPH dot blot method and sonication with organic<br /> solvent for screening antioxidant activity, this study demonstrate that isolated bacteria from soil and water<br /> possess good antioxidant activity from intracellular and extracellular extract. We intend to assay antioxidant<br /> activity and characterize probiotic of the potential strain.<br /> Keywords: antioxidant, bacteria, DPPH dot blot, ultrasonic, solvent.<br /> sẽ làm tiền đề cho những nghiên cứu sâu hơn<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> tiếp theo.<br /> Khi môi trường và điều kiện sống trở nên<br /> ĐỐI TƯỢNG– PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU<br /> khắc nhiệt như hạn hán và bị tác động bởi<br /> chiếu xạ UV mạnh hay tác nhân oxi hoá có thể<br /> Vật liệu<br /> làm tăng việc hình thành ROS (reactive<br /> Môi trường nuôi cấy TSA (Trypticase Soy<br /> oxygen species)-phân tử oxi có hoạt tính cao<br /> Agar), TSB (Trypticase Soy Broth) của Merk. Các<br /> có nguy cơ gây hại cho vi khuẩn. Để ngăn<br /> dung môi hữu cơ n-hexan, cloroform, methanol<br /> chặn sự nguy hại của các tác nhân oxi hoá này,<br /> của Merk. Bộ kit định danh trực khuẩn gram âm<br /> khi hệ thống enzym chống oxi hoá bị hoạt<br /> IDS 14 GNR của công ty Nam Khoa. Thuốc thử<br /> động quá tải, vi khuẩn sẽ sinh ra chất chống<br /> DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) và chất<br /> oxi hoá. Vì vậy, những vùng đất khô cằn, hạn<br /> chuẩn vitamin C của Sigma. Chủng vi khuẩn đối<br /> hán, như cát biển, hay sa mạc thường sẽ có<br /> chứng: Bacillus subtilis 001, Bacillus indicus HU36<br /> nhiều vi khuẩn có hoạt tính chống oxi hoá cao.<br /> do Phòng thí nghiệm Vi sinh Công nghệ Dược,<br /> Đối với con người, gốc tự do là nguyên nhân<br /> Khoa Dược ĐH Y Dược Tp.HCM cung cấp.<br /> gây nhiều bệnh nguy hiểm và thúc đẩy quá<br /> Trong đó, chủng Bacillus 001 đã được Đức và<br /> trình lão hóa, việc sử dụng các dược phẩm có<br /> cộng sự chứng minh rằng không có khả năng<br /> tác dụng chống oxy hóa như là yếu tố bảo vệ<br /> sinh chất chống oxi hoá và được xem như là<br /> cơ thể đang rất được quan tâm. Hiện nay,<br /> chứng âm và chủng HU36 đã được chứng minh<br /> chưa có nhiều báo cáo về chất chống oxi hoá<br /> rằng có khả năng sinh carotenoid và được xem<br /> từ vi khuẩn, mặc dù sản xuất chất chống oxy<br /> như là chứng dương(5).<br /> hóa từ vi sinh vật có nhiều hiệu quả kinh tế<br /> Lấy mẫu và phân lập<br /> như là không tốn diện tích lớn, dễ kiểm soát<br /> Tiến hành lấy mẫu đất, nước, cát, bùn ở<br /> quy trình, sử dụng nguồn nguyên liệu đầu<br /> các<br /> khu vực giàu ánh sáng, nhiệt độ cao thuộc<br /> vào rẻ tiền.<br /> các tỉnh thành phía Nam Việt Nam. Mẫu ban<br /> Các nghiên cứu trước đây đều cho thấy vi<br /> đầu được đựng trong ống falcon cỡ 50 ml, các<br /> khuẩn là nguồn tiềm năng lớn cung cấp và sản<br /> mẫu đất, cát, bùn chiếm khoảng ¼ thể tích<br /> xuất chất chống oxi hoá tự nhiên, đặc biệt là vi<br /> ống, mẫu nước chiếm đến vạch 30-40 ml. Sử<br /> khuẩn thuộc chi Bacillus, tuy nhiên các kết quả<br /> dụng phương pháp pha loãng và trải đĩa để<br /> chỉ tập trung ở một số chủng cụ thể, chưa có<br /> phân lập: Pha loãng mẫu với dung dịch NaCl<br /> nhiều nghiên cứu thực hiện sàng lọc trên quy<br /> 0,85% độ pha loãng từ cấp số 1 đến 5, trải 100<br /> mô lớn(8,9,10). Vì vậy, trong nghiên cứu này<br /> μl mẫu ở 3 độ pha loãng cuối lên môi trường<br /> chúng tôi tiến hành phân lập và sàng lọc các<br /> TSA. Ủ ở 37 oC từ 24 đến 36 giờ. Quan sát sự<br /> chủng vi khuẩn có hoạt tính chống oxy hóa nội<br /> khác biệt về hình dạng, màu sắc của các khuẩn<br /> bào hoặc ngoại bào từ nhiều mẫu đất và nước<br /> khác nhau, kết quả thu được của nghiên cứu này<br /> <br /> 278<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> lạc, tách lấy các khuẩn lạc riêng biệt tiếp tục<br /> làm thuần trên môi trường TSA(4).<br /> <br /> Định tính hoạt tính chống oxi hoá bằng<br /> phương pháp bản mỏng DPPH<br /> Phương pháp bản mỏng DPPH được thực<br /> hiện dựa trên cải tiến phương pháp nhuộm<br /> nhanh vết chấm trên bản silicagel vào dung dịch<br /> DPPH theo như Huang cùng cộng sự đã báo cáo<br /> (2006)(7). Mục đích của phương pháp này là xác<br /> định hoạt tính chống oxi hoá của dịch ngoại bào<br /> và dịch chiết nội bào của vi khuẩn thông qua<br /> việc đánh bắt gốc tự do làm mất màu DPPH tại<br /> vị trí chấm dịch trên bản mỏng silicagel 60 F254<br /> sau một thời gian tác dụng(1). Theo đó, mẫu thử<br /> được chấm lên bản mỏng silicagel 60 F254, để<br /> khô tự nhiên, nhuộm bản mỏng với dung dịch<br /> DPPH 0,8M bằng cách lật ngược bản mỏng và<br /> giữ trong 10 giây, đọc kết quả nhuộm sau 1 phút.<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> vòng/phút, trong 15 phút thu sinh khối, tiến<br /> hành chiết chất chống oxi hoá nội bào. Cắn được<br /> rửa 2 lần với nước để loại bỏ dịch nuôi cấy, sau<br /> đó phân tán cắn với nước, tiến hành tán siêu âm<br /> đầu dò (đối với trực khuẩn thực hiện 3 chu kì<br /> tán, mỗi chu kì kéo dài gồm 30 giây và đối với<br /> cầu khuẩn thực hiện 6 chu kỳ tán). Dịch vi<br /> khuẩn sau khi tán siêu âm sẽ ly tâm 9600<br /> vòng/phút, 15 phút. Đối với phần dịch thu được,<br /> đem xác định chất chống oxi hoá bằng phương<br /> pháp bản mỏng DPPH. Đối với phần cắn, tiến<br /> hành chiết với các dung môi methanol,<br /> chloroform, n-hexan. Hoà cắn với các dung môi,<br /> tiến hành lắc 30 phút. Sau đó, huyền dịch sẽ<br /> được ly tâm loại cắn, thu dịch nổi để xác định<br /> hoạt tính chống oxi hoá bằng phương pháp bản<br /> mỏng DPPH.<br /> <br /> Phương pháp thu nhận chất chống oxi hoá<br /> ngoại bào<br /> Để xác định hoạt tính chống oxi hoá ngoại<br /> bào, nuôi cấy vi khuẩn cần thử nghiệm trong<br /> môi trường TSB, lắc 200 vòng/phút, ở 370C. Sau<br /> 24 giờ nuôi cấy, tiến hành ly tâm 9600<br /> vòng/phút, trong 15 phút, thu dịch nổi. Sau đó<br /> xác định hoạt tính chống oxi hoá ngoại bào bằng<br /> phương pháp bản mỏng DPPH.<br /> <br /> Phương pháp thu nhận chất chống oxi hoá<br /> nội bào<br /> Tùy thuộc vào khả năng hòa tan trong nước<br /> và dung môi hữu cơ, chất chống oxy hóa được<br /> chiết bằng nước hoặc dung môi có độ phân cực<br /> tăng dần với phương pháp 1 (sử dụng đầu dò<br /> tán siêu âm) hoặc phương pháp 2 (sử dụng bể<br /> tán siêu âm), xem hình 1.<br /> Phương pháp 1: Quy trình chiết chất chống<br /> oxi hoá nội bào bằng siêu âm đầu dò. Nuôi cấy<br /> vi khuẩn cần thử nghiệm: B. subtilis 001 (chủng<br /> chứng âm), chủng 18 (chủng phân lập được), B.<br /> indicus HU36 (chủng chứng dương). Nuôi cấy vi<br /> khuẩn với môi trường TSB, lắc 200 vòng/phút ở<br /> 37 0C. Sau 24 giờ nuôi cấy, thực hiện ly tâm 9600<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Hình 1: Sơ đồ quy trình chiết chất oxy hóa nội bào<br /> (phương pháp 1 bên trái, phương pháp 2 bên phải)<br /> Phương pháp 2: Quy trình chiết chất chống<br /> oxi hoá nội bào bằng bể tán siêu âm Tiến hành<br /> nuôi cấy và thu sinh khối các chủng thử nghiệm :<br /> Bacillus subtils 001, chủng 18, Bacillus indicus<br /> HU36 tương tự như phương pháp 1. Phân tán<br /> cắn sinh khối thu được sau ly tâm trong<br /> chloroform tiến hành tán siêu âm bằng bể trong<br /> 30 phút. Mục đích của việc bổ sung chloroform<br /> trong quá trình siêu âm bằng bể là để làm tăng<br /> tính thấm của màng tế bào vi khuẩn. Huyền dịch<br /> vi khuẩn sau khi tán siêu âm sẽ đem ly tâm 9600<br /> vòng/phút, 15 phút, thu cắn. Hoà cắn lần lượt<br /> với nước, methanol, chloroform, n-hexan. Siêu<br /> âm trong bể siêu âm 30 phút. Ly tâm, 9600<br /> vòng/phút, 15 phút, thu dịch nổi từ các ống chứa<br /> dung môi khác nhau, xác định hoạt tính chống<br /> oxi hoá bằng phương pháp bản mỏng DPPH.<br /> <br /> 279<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Sau khi xác định được phương pháp tách<br /> chiết nội bào phù hợp, chúng tôi tiến hành thu<br /> dịch chiết nội bào bao gồm dịch chiết nội bào<br /> bằng nước và dịch chiết nội bào bằng dung môi.<br /> Tiến hành xác định hoạt tính chống oxi hoá bằng<br /> phương pháp bản mỏng DPPH.<br /> <br /> Định danh sơ bộ các chủng có hoạt tính<br /> chống oxi hoá<br /> Đối với cầu khuẩn và trực khuẩn gram<br /> dương chúng tôi tiến hành định danh theo sơ đồ<br /> phân loại của “Bergey’s Manual Of<br /> Determinative Bacteriology Ninth Edition” cho<br /> các nhóm 17 bao gồm các cầu khuẩn Gram<br /> dương, nhóm 18 gồm các trực khuẩn có bào tử,<br /> nhóm 19, 20, 21 gồm các khực khuẩn gram<br /> dương không bào tử(3). Đối với trực khuẩn gram<br /> âm, sử dụng kit IDS14 GNR của công ty Nam<br /> Khoa để định danh.<br /> <br /> phân lập được không nhiều và không đa dạng<br /> như mẫu đất. Trong 367 chủng vi khuẩn phân<br /> lập được, số cầu khuẩn không nhiều (30/367),<br /> trực khuẩn chiếm phần lớn (337/367) bao gồm<br /> trực khuẩn Gram dương (252/367) nhiều hơn so<br /> với Gram âm (85/367). Trong số các trực khuẩn<br /> gram dương có 94 trực khuẩn sinh bào tử và 158<br /> trực khuẩn không sinh bào tử.<br /> <br /> Kết quả sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá từ<br /> dịch chiết ngoại bào<br /> Kết quả sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa<br /> ngoại bào của các chủng vi khuẩn trên bản mỏng<br /> DPPH được trình bày trong Hình 3.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Lấy mẫu và phân lập<br /> Số mẫu thu thập được là 204 mẫu. Mẫu được<br /> lấy đa dạng từ nhiều tỉnh vùng khác nhau ở các<br /> tỉnh phía Nam. Trong đó, mẫu đất, cát chiếm<br /> phần lớn. Sau khi thực hiện phân lập trên môi<br /> trường TSA đã thu được 367 chủng vi khuẩn.<br /> Các chủng vi khuẩn phân lập được có nhiều<br /> màu sắc khác nhau như vàng cam, hồng, trắng<br /> đục, tím…<br /> <br /> Hình 3: Kết quả sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá<br /> ngoại bào của vi khuẩn<br /> VitC (dung dịch vitamin C 0,1%):chứng dương, MT<br /> (môi trường) và nước : chứng âm<br /> Tại vị trí chấm dịch nuôi cấy của các chủng 5,<br /> 28, 154, 163,164,167, 265 làm mất màu DPPH<br /> tương đương mẫu chứng dương. Bằng phương<br /> pháp sàng lọc này, thu được 18 chủng bao gồm:<br /> 5, 28, 69, 85, 111, 112, 154, 163, 167, 265, 277, 287,<br /> 293, 301, 346, 354, 366 có hoạt tính chống oxi hoá<br /> từ dịch chiết ngoại bào.<br /> <br /> Kết quả sàng lọc chủng sinh chất chống oxi<br /> hoá từ dịch chiết nội bào<br /> Kết quả thử nghiệm phương pháp chiết chất<br /> chống oxi hoá nội bào minh họa trong hình 4<br /> Hình 2: Một số chủng vi khuẩn phân lập được<br /> Đa số mẫu đất phân lập được nhiều loại vi<br /> khuẩn khác nhau. Đặc biệt những mẫu như đồi<br /> cát Phan Thiết (PT), hay đất ruộng khô cằn ở<br /> Ngã Ba Giòng-Xuân Thới Thượng-Hóc Môn<br /> (HM), các chủng vi khuẩn phân lập được chủ<br /> yếu có màu. Trong mẫu nước, số chủng vi khuẩn<br /> <br /> 280<br /> <br /> Hình 4: Sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá nội bào với<br /> tán siêu âm bằng đầu dò và tán bằng bể siêu âm<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> hoá(6). Do đó chúng tôi lựa chọn hexan để chiết<br /> chất chống oxi hoá nội bào. So sánh hiệu quả<br /> chiết của hai phương pháp tán siêu âm bằng đầu<br /> dò và bằng bể, sự mất màu DPPH của các dịch<br /> chiết bằng các dung môi là tương đương nhau<br /> do đó hiệu quả chiết và xác định hoạt tính chống<br /> oxi hoá là tương đương nhau. Phương pháp sử<br /> dụng bể siêu âm có ưu điểm có thể thực hiện<br /> cùng lúc nhiều mẫu, vì vậy tính tương đồng của<br /> các mẫu chiết cao, và tiết kiệm thời gian hơn so<br /> với tán bằng đầu dò (1 lần thực hiện 1 mẫu). Do<br /> đó chúng tôi chọn phương pháp tán siêu âm<br /> trong bể và sử dụng dung môi n-hexan để chiết<br /> chất chống oxi hoá nội bào cho 367 chủng phân<br /> lập được. Kết quả xác định hoạt tính chống oxi<br /> hoá nội bào của các chủng được trình bày bên ở<br /> hình 5, hình 6.<br /> <br /> Quan sát bảng mỏng DPPH của hai phương<br /> pháp chiết chất chống oxi hoá nội bào trên, tại vị<br /> trí chấm dịch chiết bằng nước của 3 chủng<br /> không làm mất màu DPPH (so với nước- chứng<br /> âm). Điều này chứng tỏ cả 3 chủng không có<br /> chất chống oxi hoá nội bào tan trong nước. Tại vị<br /> trí chấm dịch chiết bằng dung môi methanol,<br /> chloroform, n-hexan của chủng Bacillus indicus<br /> HU36 làm mất màu DPPH, trong khi đó tại vị trí<br /> chấm dịch của chủng Bacillus subtilis 001 và vị trí<br /> chấm dịch của các dung môi thử nghiệm không<br /> thấy làm mất màu DPPH. So sánh hiệu quả chiết<br /> của các dung môi, nhận thấy tại vị trí của dịch<br /> chiết bằng hexan, sự mất màu của DPPH được<br /> quan sát rõ hơn so với các dung môi khác. Theo<br /> các tài liệu nghiên cứu về dung môi tách chiết<br /> chất chống oxi hoá, thì dung môi hexan được sử<br /> dụng phổ biến để tách chiết các chất chống oxi<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6<br /> <br /> 7<br /> <br /> 8<br /> <br /> 9<br /> <br /> 10<br /> <br /> 11<br /> <br /> 13<br /> <br /> 14<br /> <br /> 15<br /> <br /> 16<br /> <br /> 19<br /> <br /> 20<br /> <br /> 21<br /> <br /> 25<br /> <br /> 26<br /> <br /> Nước<br /> <br /> 001<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> 150<br /> <br /> 151<br /> <br /> 152<br /> <br /> 153<br /> <br /> 154<br /> <br /> 155<br /> 65<br /> <br /> 180<br /> <br /> 181<br /> <br /> 182<br /> <br /> 183<br /> <br /> 185<br /> 65<br /> <br /> 12<br /> <br /> 166<br /> <br /> 157<br /> <br /> 158<br /> <br /> 159<br /> <br /> 160<br /> <br /> 161<br /> <br /> 186<br /> <br /> 187<br /> <br /> 188<br /> <br /> 189<br /> <br /> 17<br /> <br /> 18<br /> <br /> 162<br /> 2<br /> <br /> 163<br /> <br /> 164<br /> <br /> 165<br /> <br /> 166<br /> <br /> 167<br /> <br /> 192<br /> 2<br /> <br /> 193<br /> <br /> 194<br /> <br /> 195<br /> <br /> 196<br /> <br /> 197<br /> <br /> 22<br /> <br /> 23<br /> <br /> 24<br /> <br /> 168<br /> <br /> 169<br /> <br /> 170<br /> <br /> 171<br /> <br /> 172<br /> <br /> 173<br /> <br /> 198<br /> <br /> 199<br /> <br /> 200<br /> <br /> 201<br /> <br /> 202<br /> <br /> 203<br /> <br /> 27<br /> <br /> 28<br /> <br /> 29<br /> <br /> 30<br /> <br /> 174<br /> <br /> 175<br /> <br /> 176<br /> <br /> 177<br /> <br /> 178<br /> <br /> 179<br /> <br /> 204<br /> <br /> 205<br /> <br /> 206<br /> <br /> 207<br /> <br /> 208<br /> <br /> 209<br /> <br /> HU36<br /> <br /> VitC<br /> <br /> Nước<br /> <br /> 001<br /> <br /> HU36<br /> <br /> VitC<br /> <br /> Nước<br /> <br /> 001<br /> <br /> HU36<br /> <br /> 184<br /> <br /> 191<br /> <br /> 190<br /> <br /> VitC<br /> <br /> Hình 5: Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh chất chống oxi hoá nội bào tan trong nước<br /> VitC (dung dịch vitamin C 0,1%):chứng dương, MT (môi trường) và nước : chứng âm<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6<br /> <br /> 180<br /> <br /> 181<br /> <br /> 182<br /> <br /> 183<br /> <br /> 184<br /> <br /> 185<br /> 65<br /> <br /> 240<br /> <br /> 241<br /> <br /> 242<br /> <br /> 243<br /> <br /> 244<br /> <br /> 245<br /> <br /> 7<br /> <br /> 8<br /> <br /> 9<br /> <br /> 10<br /> <br /> 11<br /> <br /> 12<br /> <br /> 186<br /> <br /> 187<br /> <br /> 188<br /> <br /> 189<br /> <br /> 190<br /> <br /> 191<br /> <br /> 246<br /> <br /> 247<br /> <br /> 248<br /> <br /> 249<br /> <br /> 250<br /> <br /> 251<br /> <br /> 13<br /> <br /> 14<br /> <br /> 15<br /> <br /> 16<br /> <br /> 17<br /> <br /> 18<br /> <br /> 192<br /> 2<br /> <br /> 193<br /> <br /> 194<br /> <br /> 195<br /> <br /> 196<br /> <br /> 197<br /> <br /> 252<br /> <br /> 253<br /> <br /> 254<br /> <br /> 255<br /> <br /> 256<br /> <br /> 257<br /> <br /> 19<br /> <br /> 20<br /> <br /> 21<br /> <br /> 22<br /> <br /> 23<br /> <br /> 24<br /> <br /> 198<br /> <br /> 199<br /> <br /> 200<br /> <br /> 201<br /> <br /> 202<br /> <br /> 203<br /> <br /> 258<br /> <br /> 259<br /> <br /> 260<br /> <br /> 261<br /> <br /> 262<br /> <br /> 263<br /> <br /> 25<br /> <br /> 26<br /> <br /> 27<br /> <br /> 28<br /> <br /> 29<br /> <br /> 30<br /> <br /> 204<br /> <br /> 205<br /> <br /> 206<br /> <br /> 207<br /> <br /> 208<br /> <br /> 209<br /> <br /> 264<br /> <br /> 265<br /> <br /> 266<br /> <br /> 267<br /> <br /> 268<br /> <br /> 269<br /> <br /> HU36<br /> <br /> VitC<br /> <br /> Hexan<br /> <br /> 001<br /> <br /> HU36<br /> <br /> VitC<br /> <br /> HU36<br /> <br /> VitC<br /> <br /> Hexan 001<br /> <br /> Hexan 001<br /> <br /> Hình 6: Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh chất chống oxi hoá nội bào tan n-hexan<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> 281<br /> <br />