Sự sai khác về trình tự nucleotide trong gen Cystatin ở một số dòng lạc có nguồn gốc từ mô sẹo của giống lạc L18

Phạm Tuấn Oanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 85(09)/1: 133 - 141<br /> <br /> SỰ SAI KHÁC VỀ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE TRONG GEN CYSTATIN Ở MỘT<br /> SỐ DÕNG LẠC CÓ NGUỒN GỐC TỪ MÔ SẸO CỦA GIỐNG LẠC L18<br /> Phạm Tuấn Oanh1, Vũ Thị Thu Thuỷ1,<br /> Nguyễn Thị Tâm1, Chu Hoàng Mậu2*<br /> 1<br /> <br /> Trường ĐH Sư phạm - ĐH Thái Nguyên, 2Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Phytocystatin (PhyCYSs) là chất ức chế cysteine proteinase ở thực vật. Gần đây, các nghiên cứu<br /> đã chỉ ra rằng phytocystatin có liên quan đến khả năng chống chịu của thực vật dƣới tác động bất<br /> lợi của các nhân tố môi trƣờng. Trong nghiên cứu này, chúng tôi giới thiệu kết quả khuếch đại,<br /> tách dòng và xác định trình tự của gen cystatin đƣợc tách từ lá non của hai dòng lạc RM46 và R44<br /> có nguồn gốc từ mô sẹo chịu mất nƣớc của giống lạc L18 (Arachis hypogaea L.). Gen cystatin của<br /> dòng RM46 (có nguồn gốc từ mô sẹo chịu ảnh hƣởng của chiếu xạ kết hợp xử lý mất nƣớc) và<br /> dòng R44 (có nguồn gốc từ mô sẹo chịu mất nƣớc) đều có 461 nucleotide, chứa 2 exon và 1 intron.<br /> Vùng mã hóa của gen cystatin gồm 279 nucleotide, mã hóa chuỗi polypeptide dài 98 amino acid.<br /> Có 11 vị trí nucleotide sai khác trong gen cystatin của dòng RM46 và R44 với giống gốc L18 và<br /> các trình tự của lạc đã công bố trên GenBank. Dòng có nguồn gốc từ mô sẹo chịu ảnh hƣởng của<br /> chiếu xạ kết hợp chịu xử lý mất nƣớc (RM46) có 9 vị trí sai khác so với giống gốc và có quan hệ<br /> di truyền gần hơn với giống chịu hạn tốt. Dòng R44 có hai vị trí nucleotide sai khác so với giống<br /> gốc, đồng thời sai khác 1 amino acid trên chuỗi polypeptide, tuy nhiên chƣa xác định đƣợc sự sai<br /> khác này với khả năng chống chịu hạn. Gen cystatin của RM46 và R44 là thành viên của nhóm I<br /> của phân họ phytocystatin.<br /> Từ khóa: Cây lạc, gen cystatin, mất nước, mô sẹo, phytocystatin.<br /> <br /> MỞ ĐẦU*<br /> Lạc (Arachis hypogaea L.) là loại cây trồng<br /> họ đậu, có giá trị dinh dƣỡng cao, đƣợc trồng<br /> phổ biến ở Việt Nam. Trồng cây lạc vừa<br /> mang lại hiệu quả kinh tế, đồng thời có khả<br /> năng thâm canh, cải tạo đất. Ở Việt Nam,<br /> năng suất và sản lƣợng lạc không ổn định.<br /> Một trong những nguyên nhân chính ảnh<br /> hƣởng đến vấn đề này là sự biến đổi khí hậu<br /> toàn cầu theo xu hƣớng xa mạc hóa, gây hạn<br /> hán kéo dài ở nhiều nơi. Do đó, vấn đề đặt ra<br /> là cần nghiên cứu và tuyển chọn đƣợc những<br /> giống lạc có năng suất, chất lƣợng tốt và có<br /> khả năng chịu hạn, thích hợp với điều kiện<br /> thổ nhƣỡng và khí hậu ở nƣớc ta [2].<br /> Kỹ thuật chọn dòng biến dị soma đƣợc ứng<br /> dụng có hiệu quả trong chọn tạo các giống<br /> cây trồng. Tế bào nuôi cấy in vitro có tỷ lệ<br /> biến dị cao (10-5 – 10-8), đa dạng về kiểu gen<br /> và kiểu hình. Do đó, có thể tiến hành chọn lọc<br /> những dòng tế bào khác nhau và nghiên cứu<br /> ảnh hƣởng của các tác nhân bất lợi lên thực<br /> vật ở các mức độ khác nhau (gen, tế bào, mô,<br /> cơ quan nuôi cấy, phân lập cây hoàn chỉnh).<br /> Tính ƣu việt của kỹ thuật này đã đƣợc khẳng<br /> định trên cây lúa [1]. Đối với cây lạc, theo<br /> *<br /> <br /> hƣớng chọn dòng chịu hạn nhóm tác giả Vũ Thị<br /> Thu Thủy (2009, 2011) đã xử lý mô sẹo bằng<br /> cách gây mất nƣớc và chiếu xạ kết hợp với gây<br /> mất nƣớc chọn đƣợc một số dòng cây xanh từ<br /> giống lạc L18. Các dòng lạc chọn lọc đƣợc<br /> trồng và đánh giá qua nhiều thế hệ, kết quả đánh<br /> giá đã tuyển chọn và phân loại các dòng theo<br /> nhóm có triển vọng về năng suất, chất lƣợng hạt<br /> và có khả năng chống chịu hạn [5].<br /> Phytocystatin (PhyCYSs) là chất ức chế<br /> cysteine proteinase ở thực vật. Gần đây, nhiều<br /> nghiên cứu chỉ ra rằng phytocystatin có liên<br /> quan đến khả năng chống chịu của thực vật<br /> dƣới tác động bất lợi của các nhân tố môi<br /> trƣờng, giúp cây thích nghi với điều kiện<br /> ngoại cảnh [7], [12], [18]. Công bố đầu tiên<br /> về cystatin có nguồn gốc thực vật là cystatin<br /> của lúa (Oryzacystatin-I) [6] và cho đến nay<br /> đã có một số công trình nghiên cứu về phân<br /> lập, biểu hiện gen cystatin đƣợc công bố ở<br /> thực vật một và hai lá mầm: ngô [12]; đậu<br /> tƣơng [19]; đậu xanh [9]; lạc [14], [15], [16],<br /> [17]. Để tiếp tục hƣớng nghiên cứu chọn lọc<br /> các dòng cây lạc mang các tính trạng mong<br /> muốn, chúng tôi tiến hành phân lập và so sánh<br /> trình tự gen cystatin của hai dòng lạc RM46<br /> và R44 có nguồn gốc từ mô sẹo chịu mất<br /> nƣớc và xử lý chiếu xạ của giống lạc L18.<br /> <br /> Tel: 0913383289; Email: mauchdhtn@gmail.com<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 133<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Phạm Tuấn Oanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP<br /> Vật liệu<br /> Giống lạc L18 có nguồn gốc từ Trung Quốc,<br /> do Trung tâm Nghiên cứu và phát triển đậu<br /> đỗ, Viện Cây lƣơng thực và cây thực phẩm<br /> thuộc Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam<br /> nhập nội năm 2004. Giống L18 có năng suất<br /> cao, chịu thâm canh, có khả năng kháng sâu,<br /> nhƣng chịu hạn kém. Dòng lạc R44 có nguồn<br /> gốc từ mô sẹo chịu xử lý mất nƣớc liên tục<br /> trong 9 giờ. Dòng lạc RM46 có nguồn gốc từ<br /> mô sẹo chịu chiếu xạ 2 krad kết hợp với xử lý<br /> mất nƣớc liên tục trong 9 giờ. Hai dòng lạc<br /> RM46 và R44 có nguồn gốc từ mô sẹo của<br /> giống L18 chịu mất nƣớc ở thế hệ thứ Năm.<br /> Phương pháp<br /> - Tách chiết DNA tổng số theo phƣơng pháp<br /> của Gawel và đtg (1991) [8] có cải tiến.<br /> - Gen cystatin đƣợc phân lập bằng kỹ thuật<br /> PCR với cặp mồi đặc hiệu, Cys Ara F/Cys<br /> Ara R đƣợc thiết kế dựa trên trình tự<br /> nucleotide của gen cystatin lạc (Arachis<br /> hypogaea L.) đƣợc tác giả Yan và đtg (2004)<br /> công bố tại Ngân hàng Gen Quốc tế với mã số<br /> AY722693 [17]. Mồi đƣợc tổng hợp tại hãng<br /> Invitrogen.<br /> CysAraF 5’ATGGCAGCAGTGGGTGCA 3’<br /> CysAraR 5’ TTAAGCATTGGAGCCATCAC 3’<br /> Thành phần phản ứng PCR nhân gen cystatin<br /> gồm: PCR master mix 12,5μl; DNA templet<br /> (50ng/μl) 2 μl; CysAra F (10pmol/μl ) 2 μl;<br /> CysAra R (10pmol/μl ) 2 μl; Nƣớc khử ion 6,5<br /> μl. Hỗn hợp đƣợc thực hiện với 30 chu kỳ<br /> phản ứng, các giai đoạn gồm 94°C/3 phút;<br /> 94°C/30 giây; 56°C/1 phút; 72°C/1 phút;<br /> 72°C/10 phút và sản phẩm đƣợc lƣu giữ ở 4°C.<br /> - Tách dòng gen: Tách dòng gen theo phƣơng<br /> pháp của Sambrook và Russell (2001) [13].<br /> - Trình tự của gen cystatin đƣợc xác định trên<br /> máy đọc trình tự nucleotide tự động ABI<br /> PRISM@ 3100 Advant Genetic Analyner<br /> (Applied Biosystem) tại Viện Công nghệ sinh<br /> học. Kết quả đọc trình tự gen đƣợc xử lý bằng<br /> phần mềm Lasergene và BioEdit.<br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 85(09)/1: 133 - 141<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> Nhân gen cystatin<br /> Lá non cây lạc đƣợc sử dụng để tách chiết<br /> DNA tổng số với CTAB. Sau khi tách chiết<br /> DNA tổng số đƣợc kiểm tra bằng phƣơng<br /> pháp điện di trên gel agarose 1% và đo độ<br /> sạch trên máy quang phổ ở bƣớc sóng 260nm/<br /> 280nm. Kết quả nhận đƣợc DNA tổng số có<br /> chất lƣợng tốt, hàm lƣợng đủ lớn đảm bảo<br /> tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.<br /> Sản phẩm PCR nhân gen cystatin với cặp mồi<br /> CysAra F và CysAra R từ DNA tổng số đƣợc<br /> phân tích bằng điện di trên gel agarose 1%<br /> (hình 1). Kết quả ở hình 1 cho thấy, gen đƣợc<br /> nhân là 1 đoạn DNA có kích thƣớc phân tử<br /> khoảng gần 500bp tƣơng đƣơng với kích<br /> thƣớc gen cystatin của giống lạc L18 mà tác<br /> giả Vũ Thị Thu Thủy đã phân lập và công bố<br /> trên Ngân hàng Gen quốc tế với mã số<br /> FN811133 [14]. Vì vậy, chúng tôi cho rằng<br /> gen cystatin của hai dòng lạc RM46, R44 đã<br /> đƣợc nhân bản. Để khẳng định điều này,<br /> chúng tôi tiến hành tách dòng và xác định<br /> trình tự gen cystatin của hai dòng lạc này và<br /> so sánh với các trình tự gen cystatin cây lạc<br /> đã đƣợc công bố.<br /> RM46 R44<br /> <br /> M<br /> <br /> 500 bp<br /> <br /> 461 bp<br /> <br /> 250 bp<br /> <br /> Hình 1. Kết quả nhân gen cystatin của dòng<br /> RM46 và R44<br /> <br /> Kết quả tách dòng gen cystatin<br /> Sản phẩm PCR của gen cystatin đƣợc tinh<br /> sạch theo bộ Kit AccuPrep PCR Purification<br /> của hãng Bioneer. Gen tinh sạch đƣợc gắn<br /> 134<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Phạm Tuấn Oanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Tiến hành chọn khuẩn lạc có màu trắng, hình<br /> tròn đều trên môi trƣờng cấy chuyển sang môi<br /> trƣờng LB lỏng (10g peptone + 5g yeast<br /> extract + 10g NaCl + nƣớc cất vừa đủ 1 lit) có<br /> bổ sung ampicilin nuôi lắc 200 vòng/phút ở<br /> 37°C qua đêm. Lựa chọn một số dòng vi khuẩn<br /> tái tổ hợp để kiểm tra bằng phản ứng colonyPCR. Sản phẩm colony-PCR chọn dòng đƣợc<br /> kiểm tra trên gel agarose 1% (hình 2).<br /> <br /> vào vector tách dòng pTZ57R/T, biến nạp vào<br /> tế bào khả biến của chủng E.coli DH5α bằng<br /> cách sốc nhiệt. Nhân dòng trên môi trƣờng<br /> LB lỏng, sau đó cấy trải trên môi trƣờng LB<br /> đặc có bổ sung ampicilin 100 mg/ml, X-gal<br /> 40 mg/ml và IPTG 100 μM. Ủ đĩa petri trong<br /> 16 giờ ở 37°C. Kết quả thu đƣợc cả khuẩn lạc<br /> xanh và trắng trên môi trƣờng LB đặc.<br /> M<br /> <br /> 85(09)/1: 133 - 141<br /> <br /> RM46 R44<br /> <br /> M<br /> R44<br /> <br /> RM46<br /> 2886 bp<br /> <br /> 500 bp<br /> 500 bp<br /> <br /> 461 bp<br /> <br /> 250bp<br /> <br /> Hình 2. Kết quả colony – PCR gen cystatin của<br /> dòng RM46 và R44<br /> <br /> Kết quả ở hình 2 cho thấy gen cystatin của hai<br /> dòng lạc có kích thƣớc đúng nhƣ dự tính.<br /> DNA plasmid tái tổ hợp đƣợc tách bằng bộ<br /> kit của hãng BIONEER (AccuPrep™ Plasmid<br /> Mini Extraction Kit). Kiểm tra sản phẩm tách<br /> plasmid bằng phản ứng cắt với 2 enzyme là<br /> EcoRI và BamHI. Kết quả thể hiện ở hình 3<br /> cho thấy, sản phẩm phân cắt thành 2 băng<br /> DNA tƣơng ứng với phần vector dài 2886 bp<br /> và đoạn DNA có kích thƣớc khoảng 500 bp.<br /> Nhƣ vậy có thể kết luận là chúng tôi đã tách<br /> chiết đƣợc plasmid tái tổ hợp có chứa gen<br /> cystatin.<br /> Kết quả xác định trình tự gen cystatin<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> Hình 3. Kết quả cắt plasmid bằng EcoRI và<br /> BamHI<br /> <br /> Trình tự của gen cystatin đƣợc xác định từ<br /> plasmid trên máy đọc trình tự nucleotide tự<br /> động. Xử lý kết quả thu đƣợc bằng phần mềm<br /> Lasergene nhận đƣợc gen cystatin của hai<br /> dòng lạc có kích thƣớc 461 bp. Gen cystatin<br /> của lạc gồm 2 exon và 1 intron, đoạn exon 1<br /> gồm 102 nucleotide bắt đầu từ vị trí 1 đến 102<br /> và đoạn exon 2 có 195 nucleotide, từ vị trí<br /> 267 đến 461; đoạn intron ở giữa có 164<br /> nucleotide, từ vị trí 103 đến 266.<br /> So sánh trình tự nucleotide của 2 gen cystatin<br /> phân lập đƣợc với 3 trình tự nucleotide của<br /> gen cystatin lạc đã công bố trên GenBank, kết<br /> quả thu đƣợc thể hiện ở hình 4.<br /> <br /> 135<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Phạm Tuấn Oanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 85(09)/1: 133 - 141<br /> <br /> 10<br /> 20<br /> 30<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A T G G C A G C A G T G G G T G C A C C T C G C G A A G<br /> <br /> RM46<br /> T A<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> A T G G C A G C A G T G G G T G C A C C T C G C G A A G T A<br /> A T G G C A G C A G T G G G T G C A C C T C G C G A A G T A<br /> A T G G C A G C A G T G G G T G C A C C T C G C G A A G T A<br /> A T G G C A G C A G T G G G T G C A C C T C G C G A A G T A<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 40<br /> 50<br /> 60<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G C T G G A A A C G A G A A C A G C C T C G A G A T C G A T<br /> G C C G G A A A C G A G A A C A G C C T C G A G A T C G A T<br /> G C C G G A A A C G A G A A C A G C C T C G A G A T C G A T<br /> G C T G G A A A C G A G A A C A G C C T C G A G A T C G A T<br /> G C C G G A A A C G A G A A C A G C C T C G A G A T C G A T<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 70<br /> 80<br /> 90<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A G T C T T G C T C G C T T T G C T G T T G A T G A A C A C<br /> A G T C T T G C T C G C T T T G C T G T C G A T G A A C A C<br /> A G T C T T G C T C G C T T T G C T G T C G A T G A A C A C<br /> A G T C T T G C T C G C T T T G C T G T T G A T G A A C A C<br /> A G T C T T G C T C G C T T T G C T G T T G A T G A C A C A<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 100<br /> 110<br /> 120<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A A C A A G A A A C A G G T T T C T T T C T C T C T C T T G<br /> A A C A A G A A A C A G G T T T C T T T C T C T C T C T A C<br /> A A C A A G A A A C A G G T T T C T T T C T C T C T C T A C<br /> A A C A A G A A A C A G G T T T C T T T C T C T C T C T T G<br /> A C A A G A A A C A G G G T T T C T T T C T C T C T C T A G<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 130<br /> 140<br /> 150<br /> ------------------+-------------------+-------------------+C G A A G A T C G C T T T C G C T T T G G T T T T G G T T C<br /> C G A T C A T C G C T T T G G C T C T G G T T T T G G T T C<br /> C G A T C A T C G C T T T G G C T C T G G T T T T G G T T C<br /> C G A A G A T C G C T T T C G C T T T G G T T T T G G T T C<br /> C G A A G A T C G C T T T G G C T C T G G T T T T G G T T C<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 160<br /> 170<br /> 180<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G T T T T G T G T G A T T G A T C A T G A T T A G T G T T C<br /> G T T T T G T A T G A T T G A T C A T G A T T A G T G T T C<br /> G T T T T G T A T G A T T G A T C A T G A T T A G T G T T C<br /> G T T T T G T G T G A T T G A T C A T G A T T A G T G T T C<br /> G T T T T G T A T G A T T G A T C A T G A T T A G T G T T C<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 190<br /> 200<br /> 210<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G A T T T T G A T T T A A T T T T A A A A T A A T T T G G G<br /> G A T T T T G A T T T A A T C T T A A A A T A A T T T G G G<br /> G A T T T T G A T T T A A T T T T A A A A T A A T T T G G G<br /> G A T T T T G A T T T A A T T T T A A A A T A A T T T G G G<br /> G A T T T T G A T T T A A T T T T A A A A T A A T T T G G G<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 136<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Phạm Tuấn Oanh và Đtg<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 85(09)/1: 133 - 141<br /> <br /> 220<br /> 230<br /> 240<br /> ------------------+-------------------+-------------------+T G G T T G T T T T G G A T T T T T A T C T A A T G T G A C<br /> T G G T T G T T T T G G A T T T T T A T C T A A T G T G A C<br /> T G G T T G T T T T G G A T T T T T A T C T A A T G T G A C<br /> T G G T T G T T T T G G A T T T T T A T C T A A T G T G A C<br /> T T G T T G T C T T G G A T T T T T A T C T A A T G T A A C<br /> 250<br /> 260<br /> 270<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G A A T T A A A T T G G G A A T G A T G A T G C A G A A T G<br /> G A A T T A A A T T G G G A A T G A T G A T G C A G A A T G<br /> G A A T T A A A T T G G G A A T G A T G A T G C A G A A T G<br /> G A A T T A A A T T G G G A A T G A T C A T G C A G A A T G<br /> G A A T T A A A T T G G G A A T G A T C A T G C A G A A T G<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 280<br /> 290<br /> 300<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G C C T T C T C G A G T T T A A G A G G G T T A T A A G T G<br /> G C C T T C T C G A G T T T A A G A G G G T T A T A A G T G<br /> G C C T T C T C G A G T T T A A G A G G G T T A T A A G T G<br /> C C C T T C T T G A G T T T A A G A G G G T T A T A A G T G<br /> C C C T T C T C G A G T T T A A G A G G G T T A T A A G T G<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 310<br /> 320<br /> 330<br /> ------------------+-------------------+-------------------+C T A A G C A G C A A G T T G T T G C T G G G A C T T T G C<br /> C T A A G C A G C A A G T T G T T G C T G G G A C T T T G C<br /> C T A A G C A G C A A G T T G T T G C T G G G A C T T T G C<br /> C T A A G C A G C A A G T T G T T G C T G G G A C C T T G C<br /> C T A A G C A G C A A G T T G T T G C T G G G A C T T T G C<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 340<br /> 350<br /> 360<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A C C A C A T C A C T T T G G A G G C A G C A A G T G G T G<br /> A C C A C A T C A C T T T G G A G G C A G C A A G A G G T G<br /> A C C A C A T C A C T T T G G A G G C A G C A A G T G G T G<br /> A C C A C A T C A C T T T G G A G G C A G C A A G T G G T G<br /> A C C A C A T C A C T T T G G A G G C A G C A A G T G G T G<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 380<br /> 390<br /> 370<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A T A G T A A G A A T G T T T A T G A A G C C A A G G T G T<br /> A T A G T A A G A A T G T T T A T G A A G C C A A G G T G T<br /> A T A G T A A G A A T G T T T A T G A A G C C A A G G T G T<br /> A T A G T A A G A A T G T T T A T G A A G C C A A G G T T T<br /> A T A G T A A G A A T G T T T A T G A A G C C A A G G T G T<br /> <br /> RM46<br /> R44<br /> FN811133<br /> FR691053<br /> FR745399<br /> <br /> 400<br /> 410<br /> 420<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G G G A A A A G C C A T G G A T G A A C T T C A A G G A G G<br /> G G G A A A A G C C A T G G A T G A A C T T C A A G G A G G<br /> G G G A A A A G C C A T G G A T G A A C T T C A A G G A G G<br /> G G G A A A A G C C A T G G A T G A A C T T C A A G G A G G<br /> G G G A A A A G C C A T G G A T G A A C T T C A A G G A G G<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 137<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br />