Tần suất các gien D3S1358, vWA và FGA của người Việt ứng dụng trong giám định gien

Chia sẻ: Sunshine_6 Sunshine_6 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Thêm vào BST

Báo xấu

68
lượt xem 6
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Giám định gien giúp cho các nhà điều tra hình sự gi.i quyết đ-ợc những vụ án mà trước đây không thể giải quyết được bằng các phương pháp của huyết thanh học. Xuất phát từ yêu cầu thực tế Viện khoa học hình sự đã tiến hành đề tài nghiên cứu: "Điều tra và xây dựng cơ sở dữ liệu tần suất các gien hệ Nineplexll người Việt ứng dụng trong giám định gien ở VKHHS ". Qua kh.o sát, cho thấy : + Gen D3S1358 có 6 alen; vWA: 9 alen; FGA: 19 alen....

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Tần suất các gien D3S1358, vWA và FGA của người Việt ứng dụng trong giám định gien

TCNCYH 23 (3) 2003 TÇn suÊt c¸c gien D3S1358, vWA vµ FGA cña ng−êi ViÖt øng dông trong gi¸m ®Þnh gien Bïi ThÞ DiÖu Hång, Hµ Quèc Khanh, §inh ThÞ Nga vµ c¸c céng sù ViÖn Khoa häc h×nh sù – Bé C«ng an Gi¸m ®Þnh gien gióp cho c¸c nhµ ®iÒu tra h×nh sù gi¶i quyÕt ®−îc nh÷ng vô ¸n mµ tr−íc ®©y kh«ng thÓ gi¶i quyÕt ®−îc b»ng c¸c ph−¬ng ph¸p cña huyÕt thanh häc. XuÊt ph¸t tõ yªu cÇu thùc tÕ ViÖn khoa häc h×nh sù ®· tiÕn hµnh ®Ò tµi nghiªn cøu: "§iÒu tra vµ x©y dùng c¬ së d÷ liÖu tÇn suÊt c¸c gien hÖ Nineplexll ng−êi ViÖt øng dông trong gi¸m ®Þnh gien ë VKHHS ". Qua kh¶o s¸t, cho thÊy : + Gen D3S1358 cã 6 alen; vWA: 9 alen; FGA: 19 alen. + ë ng−êi ViÖt tÝnh ®a h×nh ë gen vWA, vµ ®Æc biÖt ë gien FAGA cao h¬n so víi mét sè quÇn thÓ ng−êi n−íc ngoµi. VÝ dô: sè alen ë gien vWA cña ng−êi ViÖt lµ 9, cßn cña ng−êi NhËt [5] vµ ng−êi Mü da tr¾ng lµ 8 [6]; sè alen ë gien FGA cña ng−êi ViÖt lµ 19, cßn cña ng−êi NhËt lµ 15 [5] vµ cña ng−êi Mü da tr¾ng lµ 12 [6]. + §· ph¸t hiÖn thÊy 2 alen sè 14 vµ 32 cña gien FGA. ViÖt Nam lµ mét quèc gia cã nhiÒu téc ng−êi kh¸c nhau cïng sinh sèng, v× vËy nhãm nghiªn cøu ®Ò xuÊt më réng ph¹m vi kh¶o s¸t ë mét sè téc ng−êi kh¸c cã sè d©n ®«ng. I. §Æt vÊn ®Ò: QB1 ë ng−êi Kinh vµ ng−êi M−êng (J.Immunogen. 1998 vµ t¹p chÝ Nghiªn cøu y Gi¸m ®Þnh t− ph¸p vÒ gien ®−îc ra ®êi tõ häc Tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi 2002). XuÊt n¨m 1985. Gi¸m ®Þnh gien gióp cho c¸c nhµ ph¸t tõ yªu cÇu thùc tÕ ViÖn khoa häc h×nh sù ®iÒu tra h×nh sù gi¶i quyÕt ®−îc nh÷ng vô ¸n ®· tiÕn hµnh ®Ò tµi nghiªn cøu: "§iÒu tra vµ x©y mµ tr−íc ®©y kh«ng thÓ gi¶i quyÕt ®−îc b»ng dùng c¬ së d÷ liÖu tÇn suÊt c¸c gien hÖ c¸c ph−¬ng ph¸p cña huyÕt thanh häc. TÝnh −u Nineplexll ng−êi ViÖt øng dông trong gi¸m viÖt cña gi¸m ®Þnh gien ®· ®−îc c¸c nhµ khoa ®Þnh gien ë VKHHS ". §Ò tµi nµy hoµn thµnh häc trªn thÕ giíi c«ng nhËn: truy nguyªn c¸ thÓ sÏ ®¸p øng yªu cÇu cña gi¸m ®Þnh gien trong ng−êi, x¸c ®Þnh quan hÖ huyÕt thèng, x¸c ®Þnh n−íc vµ ®ãng gãp mét phÇn t− liÖu vµo hÖ hµi cèt … thèng gien h×nh sù quèc tÕ. Trªn thÕ giíi ë c¸c n−íc cã phßng gi¸m C¸c gien trong hÖ Nineplex II còng nh− c¸c ®Þnh gien ®Òu ®· kh¶o s¸t, nghiªn cøu vµ c«ng gien ®−îc sö dông cho môc ®Ých t− ph¸p lµ bè kÕt qu¶ cña hä vÒ tÇn suÊt c¸c alen cña c¸c nh÷ng gien cã tÝnh ®a h×nh cao Ýt ®ét biÕn, gien sö dông cho môc ®Ých t− ph¸p (gäi t¾t lµ t−¬ng ®èi bÒn v÷ng vµ cho phÐp thùc hiÖn ®−îc gien h×nh sù). HiÖn nay ë ViÖt Nam míi chØ cã ph¶n øng nh©n gien cña nhiÒu gien kh¸c nhau Trung t©m c«ng nghÖ sinh häc (§¹i häc Quèc b»ng mét bé Kit vµ ph©n tÝch tù ®éng trªn m¸y gia Hµ Néi) c«ng bè kÕt qu¶ nghiªn cøu tÇn gi¶i tr×nh tù. suÊt alen cña hai gien D1S80 vµ D17S5 (theo t¹p chÝ Di truyÒn häc vµ øng dông sè 1-1999) C¸c gien cña hÖ Nineplex II ®Òu n»m ë vïng vµ Bé m«n MiÔn dÞch Sinh lý bÖnh Tr−êng §¹i intron (vïng kh«ng m· ho¸) cña ADN vµ ®Òu lµ häc Y Hµ Néi ®· c«ng bè kÕt qu¶ nghiªn cøu ®o¹n lÆp ng¾n (Short Tandem Repeat) hay cßn vÒ c¸c alen cña locus HLA líp II §RB1 vµ gäi lµ Microsettelite. 86
TCNCYH 23 (3) 2003 B¶ng tæng qu¸t c¸c locus gien hÖ Nineplex II : Tªn locus VÞ trÝ trªn Tr×nh tù ®o¹n lÆp kÝch th−íc Sè l−îng gien NST (bp) alen D3S1358 3P TCTA(TCTG)1-3(TCTA)n 114-142 12 vWA 12p12p-ter TCTA(TCTG)3-4(TCTA)n 157-197 13 FGA 4q28 (TTTC)3TTTTTCT (CTTT)nCTCC 219-267 32 D8S1179 8 (TCTR)n 128-168 12 D21S11 21 (TCTA)n (TCTG)n [(TCTA)3 TA (TCTA)3 189-243 35 TCA (TCTA)2 TCCATA] (TCTA)n D18S51 18q 21.3 (AGAT)n 273-341 25 D5S818 5q 21-31 (AGAT)n 135-171 10 D13S317 13q 22-31 (GATA)n 206-234 09 D7S820 7q (GATA)n 258-294 11 Kh¸i qu¸t vÒ gien D3S1358, vWA vµ FGA: 2. Ph−¬ng ph¸p t¸ch chiÕt ADN : + D3S1358 ®Þnh vÞ trªn nh¸nh ng¾n cña T¸ch chiÕt b»ng Chelex 5% [2]. nhiÔm s¾c thÓ sè 3, dµi 114-142bp, cã 12 alen 3. Ph−¬ng ph¸p ®Þnh l−îng ADN (Li vµ céng sù, 1993). Sö dông bé Kit ®Þnh l−îng "Quantiblot + vWA ®Þnh vÞ trªn nh¸nh ng¾n cña nhiÔm Human DNA Quantitation Kit" cña Perkin s¾c thÓ sè 12, dµi 157-197 bp , cã 13 alen Elmer (Mü) [3]. (Kimpton vµ céng sù 1992) [1]. 4. Ph−¬ng ph¸p khuÕch ®¹i chuçi ADN [3] + FGA ®Þnh vÞ trªn nh¸nh dµi cña nhiÔm s¾c Sö dông bé Kit Profiler plus (Perkin Elmer) thÓ sè 4, dµi 219-267 bp, cã 32 alen (Mill vµ thùc hiÖn trªn m¸y Geneamp PCR system 9700 céng sù 1992) [1]. (Mü) víi chu tr×nh nhiÖt nh− sau: Môc tiªu nghiªn cøu: x¸c ®Þnh tÇn suÊt c¸c 950C - 11 phót x 1 chu kú gien D3S1358, vWA vµ FGA cña ng−êi ViÖt. 940C - 1 phót II . VËt liÖu vµ ph−¬ng ph¸p 590C - 1phót x 28 chu kú nghiªn cøu: 720C - 1 phót 1 Thu vµ b¶o qu¶n mÉu: 600C - 45 phót x 1 chu kú Thu mÉu tãc, m¸u, tÕ bµo niªm m¹c miÖng 5. §iÖn di vµ ph©n tÝch kÕt qu¶: trùc tiÕp cña nh÷ng ng−êi cho mÉu tù nguyÖn §iÖn di trªn m¸y ABI Prism DNA vµ thu th«ng qua c¸c vô ¸n mµ ®· biÕt chÝnh Sequencer 377 (Perkin Elmer ) x¸c nh©n th©n cña n¹n nh©n hay ®èi t−îng nghi vÊn. TÊt c¶ nh÷ng ng−êi nµy ®Òu lµ ng−êi ViÖt Ph©n tÝch kÕt qu¶ dùa vµo hÖ thèng alen kh«ng cã quan hÖ hä hµng huyÕt thèng, bao chuÈn cña hÖ thèng Nineplex [4]. gåm c¶ giíi nam vµ giíi n÷ ë c¸c løa tuæi vµ 6. Xö lý sè liÖu thèng kª: c¸c vông ®Þa lý kh¸c nhau. Chóng t«i ®· sö dông tiªu chuÈn ChiSquare 2 MÉu thu ®¶m b¶o chÊt l−îng, kh«ng bÞ (χ ) cña Peason ®Ó thÈm ®Þnh sè liÖu. nhiÔm chÐo vµ ®−îc b¶o qu¶n trong tñ l¹nh s©u iii. KÕt qu¶ (- 800C). - Tæng sè mÉu (c¸ thÓ) ®· ph©n tÝch lµ 212: 87
TCNCYH 23 (3) 2003 + Gåm 146 nam vµ 66 n÷. 17 83 0,195754717 + §é tuæi : tõ 1 ®Õn 70 tuæi, trong ®ã ®é tuæi tõ 17 ®Õn 40 lµ 115 c¸ thÓ. 18 86 0,202830189 + Ph©n bè ë 41 tØnh, thµnh cña c¶ ba miÒn B¾c - Trung - Nam . 19 49 0,115566038 Gen D3S 1358 20 8 0,018867925 Sè mÉu 212 21 2 0,004716981 Sè allele: 6 Sè genotype: 21 22 1 0,002358491 Chisquare 0.06057541 TS : 9 24N = 424 1 Df 11, p = 0.9992 35.5605625 Gen FGA Sè mÉu 212 §ång hîp tö: 73, DÞ hîp tö: 139, Tæng sè: 212 Sè allele: 19 Sè gennotype: 190 Alen Sè l−îng TÇn suÊt Chisquare 0.716908 quan s¸t df 6, p = 0,9992 100.6118 14 15 0.035377 §ång hîp tö: 34, DÞ hîp tö: 178, Tæng sè: 212 15 133 0.313679 Alen Sè l−îng TÇn suÊt 16 154 0.363208 quan s¸t 17 94 0.221698 14 1 0,0023585 18 27 0.063679 15 1 0,0023585 19 1 0.002358 18 6 0,0141509 TS: 6 2N = 424 1 19 30 0,0707547 Gen vWA: 20 25 0,0589623 Sè mÉu 212 21 59 0,1391509 Sè allele: 9 Sè genotype: 45 21.2 7 0,0165094 Chisquare 0.174929226 22 79 0,1863208 Df 45, p = 0.9992 80.9886894 22.2 7 0,0165094 23 64 0,1509434 §ång hîp tö: 73, DÞ hîp tö: 139, Tæng sè: 212 23.2 3 0,00770755 Alen Sè l−îng TÇn suÊt quan s¸t 24 63 0,148549 14 108 0.25471698 24.2 7 0,0165094 15 7 0.016509434 25 40 0,0943396 16 80 0,188679245 25.2 6 0,0141509 88
TCNCYH 23 (3) 2003 + ë ng−êi ViÖt tÝnh ®a h×nh ë gen vWA, vµ 26 18 0,0424528 ®Æc biÖt ë gien FAGA lµ cao h¬n so víi mét sè 26.2 3 0,0070755 quÇn thÓ ng−êi n−íc ngoµi. VÝ dô: sè alen ë gien vWA cña ng−êi ViÖt lµ 9, cßn cña ng−êi 27 4 0,009434 NhËt [5] vµ ng−êi Mü da tr¾ng lµ 8 [6]; sè alen 32 1 0,0023585 ë gien FGA cña ng−êi ViÖt lµ 19, cßn cña ng−êi NhËt lµ 15 [5] vµ cña ng−êi Mü da tr¾ng TS : 19 2N = 424 1 lµ 12 [6]. + §· ph¸t hiÖn thÊy 2 alen sè 14 vµ 32 cña iv. Bµn luËn gien FGA. Qua kh¶o s¸t, cho thÊy : Theo PE Applied Biosystems Hunman + Gen D3S1358 cã 6 alen; vWA: 9 alen; Identification Group th× FGa cã c¸c alen trong FGA: 19 alen. thang chuÈn vµ c¸c alen kh¸c nh− sau [7]: Str Alen thang chuÈn C¸c alen kh¸c Alen kiÓm tra 9947A Fga 18,19,20,21,22,23,24, 15,16,16.2,17,18.2,19.2,20.2,21.2,22.2,23.2, 23,24 25,26,27,28,29,30 24.2,25.2,27.2,28.2,30.2,34.2,46.2 v. KÕt luËn 3. Quantification of Human DNA using + Gen D3S1358 cã 6 alen; vWA: 9 alen; the Quantiblot Human DNA Quantiblot Kit, FGA: 19 alen. Method No: 14A, VFSC, 1998. + §· ph¸t hiÖn thÊy 2 alen sè 14 vµ 32 cña 4. Amplification and Typing of the STR gien FGA. loci in Human DNA using the ABI 377 Sequencer Method No: 12, VFSC, 1998. vi. §Ò xuÊt 5. Department of Legal Medicine, + ViÖt Nam lµ mét quèc gia cã nhiÒu téc Okayama University- Graduate School, Japan, ng−êi kh¸c nhau cïng sinh sèng, v× vËy nhãm 2001. nghiªn cøu ®Ò xuÊt më réng ph¹m vi kh¶o s¸t ë 6. Forensic Science Services, South mét sè téc ng−êi kh¸c cã sè d©n ®«ng. Australia, 199. Tµi liÖu tham kh¶o. 7. AmpFISTR Profiler PlusTM 1. DNA Technology in Forensic Science, Aplification Kit user’s Manual, The Perkin Nation Academty Press, Washinton, 1992. Elmer, 1998. 2. Chelex DNA extraction, method No: 6A, Victoria Forensis Science Centre (VFSC), 1998. Abstract Viet (Kinh) population’s D3S1358, vWA and FGA frequencies for forensic medicine DNA determination for Forensic purposes was inaugurated in 1985. DNA technology offers to crime investigators and to the courts and opportunity in dealing with caseworks that have not been resolved by serlogy’s mmethods. DNA profiling is a mujor advance in individual idetification, paternity testing, bone DNA identification typing... 89
TCNCYH 23 (3) 2003 At the preesent, in Vietnam, there is only database of D1S80 and D1S5 frequencies public by Biothenology Centre - Ha Noi University of Natural Sciences. (Jornal Genetics and Applications No1 - 1999). So the Institute of forensis science - Ministry of public Security has made a rrsearch on the theme: “Database of Nineplexll allelic frequency of Viet population applied for forensic purposes in Viet Nam”. The results can be summarized as follows: + There are 6 alleles in D3S1358, 9 alleles in vWA and 19 allenles in FGA. + Polymorphism of vWA, especially of FGA in Viet (Kinh) population are higher than in some other foreign popualtion. For examples, nuber of vWWA alleles in Viet population are 0, but in Japanese popotaliton and in Caucasian are 8 (6); nuber of FGA alleles in Viet are 19, but in Japanese are 15 (5) and in Caucasian are 12 (6). + We find out two rate alleles of FGA; they are 14 and 32. There are many ethenics living in Vietnam. So we would like to survey allelic frequency of other ethenics. 90