Tạo dòng và xác định trình tự cDNA mã hóa Peptid kháng khuẩn tương tự Crustin ở Tôm sú ( penaeus monodon)

Hoàng Thị Thu Yến và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 97(09): 87 - 92<br /> <br /> TẠO DÒNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ cDNA MÃ HÓA PEPTID<br /> KHÁNG KHUẨN TƯƠNG TỰ CRUSTIN Ở TÔM SÚ (PENAEUS MONODON)<br /> Hoàng Thị Thu Yến1*, Kim Thị Phương Oanh2,<br /> Phạm Anh Tuấn3, Nông Văn Hải2<br /> 1<br /> Đại học Thái Nguyên<br /> Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam<br /> 3<br /> Tổng Cục Thủy sản, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn Việt Nam<br /> 2<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Peptid kháng khuẩn (Antimicrobial peptide - AMP) được tìm thấy ở hầu hết các sinh vật sống, có vai<br /> trò quan trọng trong hệ miễn dịch tự nhiên và thực hiện chức năng như là hàng rào đầu tiên chống lại<br /> các vi sinh vật xâm nhiễm. AMP cung cấp một lựa chọn tốt để phòng và trị các bệnh vi khuẩn truyền<br /> nhiễm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành tạo dòng và xác định trình tự cDNA mã hóa peptid<br /> kháng khuẩn tương tự crustin (Crustin - like antimicroial peptide). Gen mã hóa peptid kháng khuẩn<br /> tương tự crustin có chiều dài 426 bp, mã hóa cho 141 amino acid. Kết quả so sánh trình tự nucleotid<br /> của gen mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin ở tôm sú cho thấy không có sự sai khác so với<br /> trình tự đã công bố có mã số EF654659. Tuy nhiên, chúng tôi thấy có 5 vị trí sai khác nucleotid so<br /> với trình tự công bố với mã số FJ539178: 91 G → C; 291 T → A; 311 G → A; 338 C → A và 342 C<br /> → A, sự sai khác trình tự nucleotid này dẫn đến sự sai khác trình tự amino acid ở 5 vị trí: 35 V → L;<br /> 108 D → E; 112V → I; 124 T → N; 125 D → E. Điểm đáng lưu ý là trình tự nucleotid của gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin này không có đoạn trình tự từ 128-142<br /> (TTCCTGGAGTTGGAG). Trình tự gen mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin phân lập từ<br /> tôm sú Việt Nam được đăng ký trên GenBank với mã số HQ662560. Đoạn cDNA mã hóa peptid<br /> kháng khuẩn mà chúng tôi phân lập được là nguyên liệu tốt phục vụ cho những nghiên cứu tiếp theo<br /> nhằm làm sáng tỏ chức năng của peptid kháng khuẩn này.<br /> Từ khóa: Tôm sú, Penaeus monodon, miễn dịch, crustin, peptid kháng khuẩn.<br /> <br /> MỞ ĐẦU*<br /> Peptid kháng khuẩn (AMPs) là một đoạn<br /> peptid hoặc protein nhỏ có độ dài phân tử<br /> thấp khoảng 15-100 amino acid, chúng khác<br /> nhau về trình tự và cấu trúc. Các AMP được<br /> tìm thấy ở hầu hết các sinh vật sống, có vai<br /> trò quan trọng trong hệ miễn dịch tự nhiên và<br /> thực hiện chức năng như là hàng rào đầu tiên<br /> chống lại các vi sinh vật xâm nhiễm [3], [5].<br /> Hiện nay, để xử lý tác nhân gây bệnh là vi<br /> khuẩn ở tôm, thuốc kháng sinh và hóa chất là<br /> phương pháp chính được sử dụng. Tuy nhiên,<br /> hạn chế của phương pháp này là chi phí mua<br /> thuốc lớn, tồn dư kháng sinh có thể đe dọa<br /> đến sức khỏe cộng đồng, ảnh hưởng đến môi<br /> trường, đồng thời xuất hiện các mầm bệnh<br /> kháng thuốc và chúng có thể lây nhiễm cho<br /> con người [9].<br /> *<br /> <br /> Tel: 0912. 896. 298; Email: yenhtt79@gmail.com<br /> <br /> Các AMP ở tôm được tổng hợp đầu tiên ở tế<br /> bào máu và giải phóng để đáp ứng lại sự lây<br /> nhiễm. Mô hình biểu hiện khác nhau của các<br /> AMP đã được đánh giá kết hợp với sự kích<br /> thích của nhiều nguồn bệnh. AMP có 3 họ<br /> peptid đại diện chính là: Penaeidin, crustin và<br /> yếu tố kháng khuẩn (ALF - antilipopolisaccharid factor). Phân tích trình tự<br /> nucleotid và amino acid đã phát hiện mỗi họ<br /> AMP của tôm có sự đa dạng về trình tự và có<br /> nhiều loại isoform, nhóm nhỏ. Hoạt tính sinh<br /> học của các AMP ở mỗi họ của tôm cũng<br /> được mô tả trong in vitro và in vivo khi<br /> nghiên cứu sử dụng các protein và peptid tái<br /> tổ hợp của chúng [9]. Ngoài ra, AMP khác<br /> được tìm thấy ở tôm có nguồn gốc từ<br /> hemocyanin, đoạn trình tự đầu C có hoạt tính<br /> kháng nấm. Tuy nhiên, cơ chế mà<br /> hemocyanin được phân tách và hoạt hóa vẫn<br /> chưa rõ ràng [4].<br /> 87<br /> <br /> Hoàng Thị Thu Yến và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Crustin là các peptid kháng khuẩn giàu<br /> cystein chứa một vùng WAP (whey acidic<br /> protein) ở đầu C [7], vùng WAP có chứa 50<br /> gốc amino acid với 8 gốc cystein ở các vị trí<br /> xác định, chúng hình thành 4 liên kết disulfid<br /> [6]. Hiện có khoảng hơn 50 trình tự crustin<br /> đã được phân lập từ các loài giáp xác như<br /> tôm, cua… Crustin có hoạt tính kháng các<br /> loại vi khuẩn Gram (-) [7], [9]. Ở họ tôm<br /> penaeid, các crustin đã được phát hiện ở<br /> nhiều loài tôm. Smith và đtg (2008) đã xếp<br /> họ crustin thành 3 loại: I, II và III trên cơ sở<br /> sự khác biệt trong tổ chức vùng giữa trình tự<br /> tín hiệu và vùng WAP (Whey acidic<br /> protein). Theo sự phân loại này, hầu hết các<br /> crustin thuộc loại II và một số ít thuộc loại<br /> III. So sánh trình tự amino acid loại II phát<br /> hiện hai nhóm nhỏ là: crustin II và peptid<br /> kháng khuẩn tương tự crustin (crustin-like<br /> antimicrobial peptide), 2 loại này khác nhau<br /> ở amino acid suy diễn của peptid tín hiệu và<br /> đoạn cystein ở giữa vùng giàu cystein và<br /> vùng WAP [6]. Crustin loại III được gọi là<br /> protein vùng WAP đơn (single WAP domain<br /> - SWDs) không chứa vùng giàu cystein và<br /> glycin nhưng có vùng giàu prolin-arginin<br /> giữa trình tự tín hiệu và vùng WAP [7].<br /> Ở tôm sú, có 5 isoform của crustin loại III với<br /> chiều dài rất khác nhau đã được phân lập và<br /> đây là peptid đa dạng nhất trong họ AMP ở<br /> loài này [9]. Ở tôm sú, crustin loại II và III đã<br /> được tạo dòng và xác định trình tự [8]. Trong<br /> đó, gen mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự<br /> crustin có chiều dài 716 bp, chứa 2 exon và 1<br /> intron. Exon 1 có kích thước 38 bp gồm cả<br /> 5’UTR đến intron có kích thước 191 bp, sau<br /> đó đến exon 2 có kích thước 487 bp bao gồm<br /> cả vùng mã hóa và 3’UTR [2]. cDNA mã hóa<br /> peptid kháng khuẩn tương tự crustin có chiều<br /> dài 426 bp, mã hóa 141 amino acid<br /> (EF654659). Để góp phần tạo nguyên liện<br /> nghiên cứu sự đa dạng trong trình tự gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin và<br /> nghiên cứu chức năng, chúng tôi tiến hành tạo<br /> dòng gen này từ mẫu tôm sú Việt Nam.<br /> 88<br /> <br /> 97(09): 87 - 92<br /> <br /> NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> Nguyên liệu<br /> Chúng tôi đã tiến hành thu thập mẫu tôm bị<br /> bệnh đốm trắng tại Trạm Nghiên cứu thủy sản<br /> nước lợ, km10 đường cao tốc Hải Phòng - Đồ<br /> Sơn và các đầm nuôi tư nhân vùng lân cận.<br /> Ngay sau khi nhận tôm nguyên con, mô gan<br /> đã được tách riêng và bảo quản trong dung<br /> dịch nitơ lỏng.<br /> Phương pháp<br /> Tách chiết RNA tổng số, tinh sạch mRNA và<br /> tổng hợp cDNA<br /> Phương pháp tách chiết RNA tổng số, tinh<br /> sạch mRNA và tổng hợp cDNA được thực<br /> hiện theo mô tả của Hoàng Thị Thu Yến và<br /> đtg [1].<br /> Nhân gen bằng kỹ thuật RT-PCR<br /> Cặp mồi được thiết kế để khuếch đại gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin dựa<br /> trên trình tự gen đã được đăng ký trong ngân<br /> hàng Genbank với mã số EF654659. Để phục<br /> vụ cho những nghiên cứu tiếp theo, chúng tôi<br /> thiết kế thêm đoạn nhận biết của enzym giới<br /> hạn SpeI- NdeI vào đầu 5’ mồi xuôi (AntmicF1) và XhoI-BamHI vào đầu 3’ mồi ngược<br /> (Antmic- R426):<br /> Antmic-F1:5’ACTAGTCATATGCTAAAGTTTGTA-3’<br /> Antmic-R426:5’CTCGAGGGATCCCTATCCCTGAGA-3’<br /> Phản ứng RT-PCR được thực hiện bằng<br /> enzym Dream Taq DNA Polymeraza<br /> (Fermentas) với chu trình nhiệt như sau: 95oC<br /> -3 phút; (95oC -1 phút; 55oC -45 giây; 72oC 45 giây) x 30 chu kỳ; 72o, 10 phút; kết thúc và<br /> giữ ở 4oC.<br /> Tách dòng gen và xác định trình tự gen<br /> Phương pháp tách dòng và xác định trình tự<br /> cDNA mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự<br /> crustin đầy đủ được thực theo mô tả của<br /> Hoàng Thị Thu Yến và đồng tác giả [1].<br /> <br /> Hoàng Thị Thu Yến và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> <br /> K huếch đại gen mã hóa peptid kháng<br /> khuẩn tương tự crustin từ mẫu tôm sú<br /> Việt Nam<br /> Dựa trên cơ sở trình tự đoạn gen mã hóa<br /> peptid kháng khuẩn tương tự crustin đã công<br /> bố trên GenBank (EF654659), chúng tôi thiết<br /> kế mồi để nhân gen mã hóa peptid kháng<br /> khuẩn tương tự crustin hoàn chỉnh. Mẫu<br /> mRNA tách chiết và tinh sạch từ mô tim của<br /> tôm sú bị bệnh đốm trắng được dùng làm<br /> khuôn tổng hợp sợi cDNA thứ nhất bằng cách<br /> sử dụng mồi Oligo(dT). Phản ứng RT-PCR<br /> sau đó được tiến hành với cDNA thu được.<br /> Sản phẩm RT-PCR được điện di kiểm tra trên<br /> gel agarose 0,8%.<br /> kb<br /> <br /> M<br /> <br /> 1<br /> <br /> 97(09): 87 - 92<br /> <br /> Sau khi phân tích các dòng plasmid tái tổ<br /> hợp bằng enzym EcoRI, kết quả điện di cho<br /> thấy mỗi plasmid bị cắt thành hai đoạn: một<br /> đoạn lớn có kích thước tương ứng với<br /> vector pCR2.1 (~3,9 kb) và một đoạn nhỏ<br /> hơn có kích thước 0,4 kb tương ứng với sản<br /> phẩm RT-PCR (Hình 1). Như vậy, bước đầu<br /> chúng tôi khẳng định các dòng plasmid này<br /> đã có gắn gen mã hóa peptid kháng khuẩn<br /> tương tự crustin.<br /> kb<br /> <br /> M<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6,0<br /> 3,0<br /> 1,0<br /> 0,5<br /> 0,25<br /> <br /> 6,0<br /> 3,0<br /> <br /> Hình 2. Kết quả điện di kiểm tra sự có mặt của<br /> sản phẩm RT-PCR trong vector tái tổ hợp<br /> <br /> 1,0<br /> <br /> (M: Marker 1kb, 1-5: Plasmid pCR2.1 mang gen<br /> mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin)<br /> <br /> 0,5<br /> 0,25<br /> <br /> Hình 1. Kết quả điện di sản phẩm nhân gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin bằng kỹ<br /> thuật RT-PCR<br /> (M: Marker 1kb; 1: Sản phẩm RT-PCR)<br /> <br /> Kết quả ở hình 1 cho thấy sản phẩm RT-PCR<br /> nhân gen crustin-like antimicrobial peptide có<br /> kích thước khoảng 0,4 kb đúng với tính toán<br /> lý thuyết. Sản phẩm này được tinh sạch từ gel<br /> agarose và tách dòng phân tử.<br /> Tạo dòng gen mã hóa peptide kháng khuẩn<br /> tương tự crustin<br /> Sản phẩm RT-PCR được gắn vào vector tách<br /> dòng pCR 2.1. Để kiểm tra các plasmid tái tổ<br /> hợp chúng tôi sử dụng enzym giới hạn<br /> EcoRI, cho phép cắt gen crustin-like<br /> antimicrobial peptide (nếu có) ra khỏi vector.<br /> Kết quả phân tích các dòng plasmid tái tổ<br /> hợp được thể hiện ở hình 2.<br /> <br /> Xác định và phân tích trình tự gen mã hóa<br /> peptid kháng khuẩn tương tự crustin<br /> Chúng tôi đã xác định trình tự của gen mã hóa<br /> peptid kháng khuẩn tương tự crustin đầy đủ<br /> được gắn với vector pCR2.1. Sau khi phân<br /> tích trình tự, chúng tôi đã khẳng định được<br /> chắc chắn đoạn cDNA phân lập được là trình<br /> tự ORF hoàn chỉnh mã hóa peptid kháng<br /> khuẩn tương tự crustin. Gen mã hóa peptid<br /> kháng khuẩn tương tự crustin có kích thước<br /> 426 bp, mã hóa 141 amino acid và mã kết<br /> thúc là TAG (Hình 3).<br /> Khi so sánh trình tự nucleotid của gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin<br /> phân lập từ tôm sú Việt Nam với trình tự<br /> phân lập từ tôm sú Thái Lan đã đăng ký ở<br /> GenBank với mã số EF654659 không có sự<br /> sai khác trình tự nucleotid. Tuy nhiên, chúng<br /> tôi thấy có 5 vị trí sai khác nucleotid so với<br /> trình tự phân lập từ tôm sú Ấn Độ<br /> (FJ539178), đó là 91 G → C; 291 T → A;<br /> 89<br /> <br /> Hoàng Thị Thu Yến và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 311 G → A; 338 C → A và 342 C → A (số<br /> thứ tự theo trình tự gen phân lập từ tôm sú<br /> Việt Nam). Điểm đáng lưu ý là trình tự<br /> nucleotid gen mã hóa peptid kháng khuẩn<br /> tương tự crustin không có đoạn trình tự từ<br /> 128-142 (TTCCTGGAGTTGGAG). Trình tự<br /> gen mã hóa peptid kháng khuẩn tương tự<br /> crustin phân lập từ tôm sú Việt Nam được<br /> đăng ký trên GenBank với mã số HQ662560.<br /> <br /> 97(09): 87 - 92<br /> <br /> Hiện nay, gen mã hóa peptid kháng khuẩn<br /> tương tự crustin được phân lập với số lượng<br /> ít, chỉ được phát hiện ở tôm sú, tôm thẻ chân<br /> trắng, tôm thẻ Trung Quốc và Ấn Độ. Để<br /> phân tích sâu hơn trình tự gen mã hóa peptid<br /> kháng khuẩn tương tự crustin thu được, chúng<br /> tôi đã so sánh trình tự amino acid của peptid<br /> này với các trình tự đã công bố ở họ tôm. Kết<br /> quả so sánh được thể hiện trên hình 4.<br /> <br /> ATGCTAAAGTTTGTAGTATTATCCGTTGTCGCTGTGGCTGTGGTACACGCGCAGGATAAAGGCAATGCCGATACTCGCTT 80<br /> M L K F V V L S V V A V A V V H A Q D K G N A D T R F<br /> CCTAGGTGGAGTTGGAGTTCCTGGAGGTGGAGTTCCTGGAGTTGGAGTTCCTGGAGTTGGAGGTGGATTCCTGCCGGGGG 160<br /> L G G V G V P G G G V P G V G V P G V G G G F L P G<br /> TTCCTGGGCATGGTGGCGTTGTTCCTGGAGGCGGTGGCCTTCTCCCTGGAGGTCAATTCGAGTGCAATTACTGCAGAACG 240<br /> V P G H G G V V P G G G G L L P G G Q F E C N Y C R T<br /> AGGTACGGATACGTATGCTGCAAGCCCGGCAGGTGTCCACAGATTCGCGATACCTGCCCAGGCCTCAGAAAGGGTGTCCC 320<br /> R Y G Y V C C K P G R C P Q I R D T C P G L R K G V P<br /> GATCTGCCGTCAGGACACTGACTGCTTCGGCTCCGACAAATGCTGCTTCGACACCTGCTTGAACGACACCGTCTGCAAAC 400<br /> I C R Q D T D C F G S D K C C F D T C L N D T V C K<br /> CCATCGTGGCAGGTTCTCAGGGATAG 426<br /> P I V A G S Q G *<br /> <br /> Hình 3. Trình tự gen và amino acid suy diễn của gen mã hóa peptide kháng khuẩn tương tự crustin<br /> [---peptide tín hiệu---][----------------------------------------vùng giàu glycine-------------------------------------10<br /> 20<br /> 30<br /> 40<br /> 50<br /> 60<br /> 70<br /> 80<br /> ....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|<br /> AntmicVN MLKFVVLSVVAVAVVHAQDKGNADTRFLGGVGVPGGGVPGVGVPGVGGGFLPGV---PGHGGVVP-------GGGGLLP<br /> ABV25095.1 ......................................................----........-------.......<br /> ACL97378.1 ..............................L........-----..........----........-------.......<br /> FE049920.1 .......A......A.....DK.G..LG..F....A.G-----VFP.A.GV...GGVF..A...F.GAGGIGP.P...I.<br /> ACV84092.1 ...............QS.----E......---.S..--------VA....V...----.....IA.-------------AAZ76017.1 ..................N.--D.......--...----------.....V...----......A.VGGGLVP.....I.<br /> [vùng giàu cystein] [-------------------------------vùng WAP-----------------------------]<br /> 90<br /> 100<br /> 110<br /> 120<br /> 130<br /> 140<br /> 150<br /> ....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|..<br /> AntmicVN<br /> GGQFECNYCRTRYGYVCCKPGRCPQIRDTCPGLRKGVPICRQDTDCFGSDKCCFDTCLNDTVCKPIVA<br /> GSQG<br /> ABV25095.1 ........................................................................<br /> ACL97378.1 ...........................E........I......NE...........................<br /> FE049920.1 ..G.N......PV...........PV..V..ST.F.P.V....L..S......Y.V..E.............<br /> ACV84092.1 --G.....................PV......I.NRP.......E........Y.............L..E.<br /> AAZ76017.1 ..G.....................PV..V.....Q..................Y.V...........L..E.<br /> <br /> Hình 4. So sánh trình tự amino acid của peptid kháng khuẩn tương tự crustin ở tôm<br /> AntmicVN - peptide kháng khuẩn tương tự crustin được phân lập từ tôm sú Việt Nam, ABV25095.1 (phân<br /> lập từ tôm sú Thái Lan), ACL97378.1 (phân lập từ tôm sú Ấn Độ), FE049920.1 (phân lập từ tôm thẻ chân<br /> trắng ), ACV84092.1 (phân lập từ tôm thẻ Ấn Độ), AAZ76017.1 (phân lập từ tôm thẻ Trung Quốc), amino<br /> acid có nền xám là trình tự cystein bảo thủ trong họ crustin.<br /> <br /> 90<br /> <br /> Hoàng Thị Thu Yến và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Kết quả của hình 4 cho thấy, trình tự peptid<br /> kháng khuẩn tương tự crustin từ tôm của Việt<br /> Nam và Thái Lan không có sự sai khác trình<br /> tự amino acid. Tuy nhiên, trình tự amino acid<br /> của loại peptid này phân lập từ tôm sú Ấn Độ<br /> có 5 vị trí sai khác: 35 V → L; 108 D → E;<br /> 112V → I; 124 T → N; 125 D → E và không<br /> có đoạn trình tự GVGVP từ vị trí 45-49 (Số<br /> thứ tự theo trình tự peptid kháng khuẩn tương<br /> tự crustin trong nghiên cứu này), đoạn trình tự<br /> này cũng không có ở các loài tôm thẻ khác.<br /> Phân tích trình tự amino acid ở các vùng chức<br /> năng, chúng tôi thấy trình tự amino acid vùng<br /> peptid tín hiệu của peptid kháng khuẩn tương<br /> tự crustin có sự tương đồng hoàn toàn ở tôm sú<br /> và có sự sai khác amino acid thấp nhất so với<br /> trình tự ở các loài tôm khác. Các peptid kháng<br /> khuẩn mã hóa tương tự crustin ở các loài tôm<br /> khác nhau có sự sai khác nhiều nhất ở vùng<br /> giàu glycin, đặc biệt đoạn trình tự amino acid<br /> GGVF (60 - 63) có ở tôm thẻ chân trắng mà<br /> không phát hiện ở các loài tôm còn lại. Đoạn<br /> trình tự (72-78) chỉ có ở tôm thẻ chân trắng và<br /> tôm thẻ Trung Quốc. Ngoài ra, một số trình tự<br /> amino acid đặc trưng ở tôm sú thuộc về vùng<br /> này: ở vị trí 56, 88 amino acid của tôm sú là L<br /> và Q còn các loài còn lại tương ứng là V và G.<br /> Vùng giàu cystenin và WAP có 12 cystenin<br /> bảo thủ trong họ crustin [9]. Vùng WAP có các<br /> vị trí amino acid đặc trưng của tôm sú so với<br /> các loài tôm khác, đó là 105 P → Q, 106 V →<br /> I, 111 V → T, 134 F → Y. Như vậy, gen mã<br /> hóa peptid kháng khuẩn tương tự crustin có sự<br /> đa dạng về trình tự nucleotid và amino acid.<br /> Để biết được các vị trí sai khác đóng vai trò<br /> như thế nào cần có những nghiên cứu sâu hơn.<br /> KẾT LUẬN<br /> Chúng tôi đã tiến hành tạo dòng và xác định<br /> trình tự cDNA mã hóa peptid kháng khuẩn<br /> tương tự crustin từ mô gan của tôm sú nhiễm<br /> bệnh đốm trắng. Gen này có kích thước 426<br /> bp mã hóa cho 141 amino acid. Trình tự gen<br /> mã hóa peptid kháng khuẩn đã được đăng ký<br /> trên Genbank với mã số HQ662560.<br /> <br /> 97(09): 87 - 92<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> [1]. Hoàng Thị Thu Yến, Kim Thị Phương Oanh,<br /> Trần Trung Thành, Phạm Anh Tuấn, Nông Văn<br /> Hải (2010), "Phân lập và xác định trình tự hoàn<br /> chỉnh cDNA mã hóa syntenin liên quan đến đáp<br /> ứng miễn dịch đối với bệnh đốm trắng ở tôm sú<br /> (Penaeus monodon)", Tạp chí Công nghệ Sinh<br /> học, 8(2), pp. 155-163.<br /> [2]. Amparyup P., Kondo H., Hirono I., Aoki T.,<br /> Tassanakajon A. (2008b), "Molecular cloning,<br /> genomic organization and recombinant expression<br /> of a crustin-like antimicrobial peptide from black<br /> tiger shrimp Penaeus monodon", Mol Immunol,<br /> 45(4), pp. 1085-1093.<br /> [3]. Brown K. L., Hancock R. E. (2006), "Cationic<br /> host defense (antimicrobial) peptides", Curr Opin<br /> Immunol, 18(1), pp. 24-30.<br /> [4]. Destoumieux-Garzon D., Saulnier D., Garnier<br /> J., Jouffrey C., Bulet P., Bachere E. (2001),<br /> "Crustacean immunity. Antifungal peptides are<br /> generated from the C terminus of shrimp<br /> hemocyanin in response to microbial challenge", J<br /> Biol Chem, 276(50), pp. 47070-47077.<br /> [5]. Hancock R. E., Brown K. L., Mookherjee N.<br /> (2006), "Host defence peptides from invertebrates-emerging<br /> antimicrobial<br /> strategies",<br /> Immunobiology, 211(4), pp. 315-322.<br /> [6]. Ranganathan S., Simpson K. J., Shaw D. C.,<br /> Nicholas K. R. (1999), "The whey acidic protein<br /> family: a new signature motif and threedimensional structure by comparative modeling",<br /> J Mol Graph Model, 17(2), pp. 106-113, 134-106.<br /> [7]. Smith V. J., Fernandes J. M., Kemp G. D.,<br /> Hauton C. (2008), "Crustins: enigmatic WAP<br /> domain-containing antibacterial proteins from<br /> crustaceans", Dev Comp Immunol, 32(7), pp.<br /> 758-772.<br /> [8]. Smith V. J., Fernandes J. M., Kemp G. D.,<br /> Hauton C. (2008), "Crustins: Enigmatic WAP<br /> domain-containing antibacterial proteins from<br /> crustaceans", Dev Comp Immunol 32, pp. 758-772.<br /> [9].<br /> Tassanakajon<br /> A.,<br /> Amparyup<br /> P.,<br /> Somboonwiwat K., Supungul P. (2010), "Cationic<br /> antimicrobial peptides in penaeid shrimp", Mar<br /> Biotechnol (NY), 12(5), pp. 487-505.<br /> <br /> 91<br /> <br />