Tạp chí khoa học: Điều chế và kiểm tra chất lượng kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ 131I-rituximab dùng trong điều trị U Lympho ác tính không Hodgkin

Chia sẻ: Hoàng Thiện | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:8

Thêm vào BST

Báo xấu

79
lượt xem 7
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Kháng thể đơn dòng rituximab được đánh dấu với đồng vị phóng xạ 131I dùng trong điều trị bệnh u lympho ác tính không Hodgkin theo phương pháp hướng đích. Phức hợp 131I-rituximab được điều chế bằng phương pháp chloramin T và iodogen.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Tạp chí khoa học: Điều chế và kiểm tra chất lượng kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ 131I-rituximab dùng trong điều trị U Lympho ác tính không Hodgkin

Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 29, Số 3 (2013) 51-58 i u ch và ki m tra ch t lư ng kháng th ơn dòng g n ng v phóng x 131I-rituximab dùng trong i u tr U Lympho ác tính không Hodgkin Nguy n Th Thu1,*, Mai Tr ng Khoa2, Tr n ình Hà2, Võ Th C m Hoa1, Dương Văn ông1, Bùi Văn Cư ng1, Nguy n Th Khánh Giang1 1 Vi n Nghiên c u h t nhân, à L t, Vi t Nam 2 B nh Vi n B ch Mai, Hà N i, Vi t Nam Nh n ngày 27 tháng 2 năm 2013 Ch nh s a ngày 06 tháng 5 năm 2013; ch p nh n ăng ngày 27 tháng 9 năm 2013 Tóm t t: Kháng th ơn dòng rituximab ư c ánh d u v i ng v phóng x 131I dùng trong i u tr b nh u lympho ác tính không Hodgkin theo phương pháp hư ng ích. Ph c h p 131I-rituximab ư c i u ch b ng phương pháp chloramin T và iodogen. Ph c mi n d ch phóng x ư c ki m tra ch t lư ng b ng các phương pháp hóa lý như s c ký l ng cao áp, s c ký l p m ng, s c ký gi y, o ph gamma. Các ánh giá sinh h c c a thu c phóng x ư c th nghi m như vô khu n, n i c t vi khu n, n nh invitro, phân b trên chu t nh t. Hi u su t ánh d u kháng th v i ng v phóng x 131I t 95% b ng phương pháp chloramin T và t hơn 85% b ng phương pháp riêng c a h p ch t ánh d u thu ư c theo hai phương pháp là 0,246 iodogen t i pH 7,5. Ho t GBq/mg và 0,037 GBq/mg. Ph c mi n d ch phóng x ư c i u ch có tinh khi t hoá phóng x c a t hơn 98% và tinh khi t h t nhân phóng x t hơn 99%. Thu c phân b cao trong h tư i máu, trong các mô và ào th i nhanh theo con ư ng bài ti t qua th n. Dư c ch t phóng x 131 I-rituximab t các tiêu chu n ch t lư ng thu c phóng x có th s d ng i u tr lâm sàng. T khóa: i u tr mi n d ch phóng x , 131I-rituximab, Ki m tra ch t lư ng dư c ch t phóng x . 1. Gi i thi u∗ Trong nh ng năm g n ây, kháng th ơn dòng ánh d u phóng x ã ư c nghiên c u i u ch và ng d ng trong ch n oán và i u tr lâm sàng [1]. Trong s ó, ch ph m 131I rituximab ch a kháng th ơn dòng kháng CD20 ánh d u ng v phóng x 131I là m t trong nh ng dư c ch t phóng x ư c s d ng _______ ∗ Tác gi liên h . T: 84-0918223739. E-mail: ngthithu2006@yahoo.com có hi u qu trong i u tr b nh u lympho ác tính không Hodgkin (Non Hodgkin’s Lymphoma, NHL) [1, 2]. Kháng th ơn dòng rituximab th c hi n ch c năng nh m ích lên kháng nguyên c hi u CD20 trên t bào ung thư lympho B. Bên c nh ch c năng tiêu di t t bào ung thư theo các cơ ch sinh h c, kháng th ơn dòng sau khi ánh d u phóng x 131I-rituximab tìm n và di t t bào ung thư theo cơ ch b c x ion hóa [3, 4]. V i th i gian bán rã 8 ngày, phát tia gamma v i năng lư ng 364 keV và tia 51 52 N.T. Thu và nnk. /Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 29, Số 3 (2013) 51-58 beta v i năng lư ng trung bình là 192 keV, 131I là ng v phóng x lý tư ng cho vi c ch p hình và i u tr b nh khi g n v i phân t kháng th [5]. Trong báo cáo này chúng tôi trình bày các phương pháp nghiên c u ki m tra ch t lư ng 131I-rituximab b ng các phương pháp lý, hóa, sinh h c như phương pháp s c ký l ng protein nhanh (FPLC), s c ký l p m ng (TLC), o ho t phóng x , o ph , th vô khu n, phân b sinh h c... [6, 7]. Cùng v i các thi t b chuyên d ng o ho t phóng x , thi t b phân tích và các thi t b ki m tra ch t lư ng thu c phóng x , dư c ch t phóng x 131I-rituximab dư c ánh giá toàn di n v ch t lư ng theo quy nh c a Dư c i n v thu c phóng x t các tiêu chu n ch t lư ng dùng i u tr trong y h c [8]. ch a 80 µg iodogen, ph n ng x y ra trong vòng 10 phút t i pH 7,5 trong m phosphat. Ph c h p 131I-rituximab ư c tách ra kh i h n h p b ng phương pháp s c ký l c gel dùng c t sephadex G-25 [9]. Dung môi r a gi i là nư c mu i sinh lý 0,9% ho c m phosphate 0,2 M vô trùng. Hi u su t ánh d u kháng th ư c tính b ng cách l y ho t phóng x t i v trí nh 131I-rituximab chia cho ho t t ng s . Phương pháp s c ký l ng protein nhanh FPLC: t các m u rituximab, 131I - rituximab 131 và I vào h s c ký FPLC 6850A, Perkin Elmer, dùng c t s c ký Agilentb Zorbax GF250, dung môi m phosphate trong nư c mu i sinh lý (PBS) 0,1 mol/L, pH 7, th tích m u 4 µl, v n t c x i 0,6 ml/phút, detector UV o t i 280 nm. Phương pháp s c ký l p m ng: Kích thư c b n m ng TLC là 1 x 10 cm, h dung môi khai tri n là methanol và NaCl 0,9% t l 85:15. Ch m 5 µl m u lên băng TLC, t băng gi y vào bình ch a s n h n h p dung môi [10], th i gian s c ký là 15 phút. Khi dung môi di chuy n n centimet th 10, l y băng gi y ra. Ho t phóng x trên băng s c ký có th o trên các thi t b o phóng x ho c quét trên máy Bioscan. Có th ưa băng s c ký vào bu ng phóng x t ch p Cyclone, ch p 10 giây ho c c t băng s c ký thành t ng băng nh r ng 1 cm, o m ho t phóng x trên máy Caprat. Trên m i băng s c ký, phân t 131I t do di chuy n v tuy n trên dung môi (Rf=1). Ph c 131Irituximab n m t i i m g c (Rf=0). Tính t l ho t phóng x c a các vùng tương ng v i các h p ch t c a 131I . Ph n trăm tinh khi t hóa phóng x tính theo công th c sau: 2. Phương pháp nghiên c u Nguyên li u, hoá ch t: ng v phóng x I d ng Na131I s n xu t t i Vi n Nghiên c u h t nhân, n ng phóng x 100-200 mCi/ml. Kháng th ơn dòng kháng CD20 rituximab, hãng Roche. C t s c ký l c gel sephadex G25 c a hãng Amersham Biosciences. Gi y s c ký TLC-SG, c. Dung môi MEK (Methyl Ethyl Ketol), Merck. Các hóa ch t Sodium Dihydro Phosphate, Sodium Phosphate, Human Serum Albumin mua t hãng Sigma Aldrich. Thi t b s d ng là máy i n di, máy s c ký FPLC 6850A (Perkin Elmer), máy phóng x t ch p radioautography B431201, máy quét Bioscan, máy o phóng x Capintec, máy o phóng x Caprat, ph k gamma ORTEC® DSPEC jrTM. 131 Phương pháp ánh d u và tinh s ch 131Irituximab: i u ch ph c mi n d ch phóng x , s d ng 3 mg kháng th ánh d u v i 740 MBq 131I và 100 µg chloramin T ho c cho 20 mg kháng th v i 740 MBq 131I vào ng ph %= Ax ×100 Atot . Ax: Ho t c a m u ư c tách, Atot: T ng ho t c a băng s c ký. N.T. Thu và nnk. /Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 29, Số 3 (2013) 51-58 53 Phương pháp s c ký gi y PC: Dùng gi y s c ký whatman 01 có kích thư c 2 x 20 cm [10]. Dung môi s d ng là methanol và NaCl 0,9% t l 85:15. Th i gian s c ký là 60 phút. Có th dùng gi y s c ký TCC Biodex có kích thư c 5 x 58 mm, ch m m u lên v ch 1, t gi y sau khi ch m m u vào dung d ch NaCl 0,9%, dung môi di chuy n v màu xanh vùng 2, s c ký trong vòng 2 phút (Hình 1). Phương pháp i n di trên gi y [9]: Dùng gi y s c ký Whatman 01 có kích thư c 20 x 380 mm, ch t i n gi i là m photphat 0,025 M, pH 7,5. t băng gi y ã th m ch t i n phân vào máy, ch m 5 µl m u c n phân tích lên gi y t i v trí ch a ch t mang KI 5 µg, hi u i n th 300 V, th i gian 60 phút. Ki m tra tính n nh s n ph m: Kháng th ánh d u phóng x ư c b o qu n i u ki n 40C và -200C, ch a ch t b o qu n [13]. Sau các kho ng th i gian 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 17 ngày, l y s n ph m phân tích s ch hoá phóng x b ng phương pháp TLC. làm n nh s n ph m trong huy t thanh ngư i, l y 100 MBq/ml 131I-rituximab, thêm vào ó huy t thanh sao cho n ng 100.000 CPM/ml. Chia ra các ng nghi m 1ml/ ng. 370C trong kho ng th i gian 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 17 ngày. Sau các kho ng th i gian, l y h p ch t phân tích s ch hoá phóng x b ng phương pháp TLC ho c i n di. Ki m tra vô khu n và n i c t vi khu n: Th theo Dư c i n Vi t Nam IV, ph l c 13.2 [8]. Th vô khu n b ng phương pháp c y thu c vào các môi trư ng thioglicolat nhi t 30 - 350C, môi trư ng soya - bean casein digest nhi t 20 - 250C, quan sát 14 ngày liên t c. Ki m tra n i c t vi khu n theo USP. Hòa tan thu c trong dung d ch nư c mu i sinh lý vô trùng, không có chí nhi t t . Th n i c t vi khu n b ng phương pháp k t t gel dùng kit LAL (Limulus Amebocyte Lysate) [12] và dùng máy o PTS 100 c a hãng Charles River Laboratory, M . Ki m tra phân b và ào th i trên ng v t: Tiêm vào tĩnh m ch uôi m i con chu t 100 µl 131 I -rituximab (100 µCi) [9, 10], m i nhóm 5 chu t, gi t và m theo các kho ng th i gian 1 gi , 4 gi , 16 gi , 2 ngày, 3 ngày, 5 ngày, 7 ngày. L y các cơ quan n i t ng như gan, lách, th n, tim, máu và tuy n giáp cân và o m phóng x , tính phân b theo ID%/g. 3. K t qu và bàn lu n K t qu ánh d u phóng x và tinh s ch ph c mi n d ch phóng x 131I-rituximab qua c t: Sau khi ánh d u phóng x b ng phương pháp chloramin T và iodogen hai ho t riêng thu ư c là 0,246 GBq/mg và 0,037 GBq/mg, dùng trong nghiên c u li u ng h c và li u i u tr . Hi u su t ánh d u phóng x b ng phương pháp chloramin T t 95% (hình 1A) và phương pháp iodogen t 85-90% (hình 1B). Quá trình ánh d u phóng x ư c bi u di n trên các th sau: 54 N.T. Thu và nnk. /Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 29, Số 3 (2013) 51-58 Hình 1. ánh d u kháng th v i 131I b ng phương pháp chloramin T và iodogen. H n h p mi n d ch sau khi ánh d u phóng x bao g m ph c mi n d ch phóng x 131Irituximab và 131I t do, các thành ph n ư c tách ra kh i nhau b ng phương pháp s c ký l c gel. Ph c h p mi n d ch 131I-rituximab ư c tách kh i h n h p ph n ng. Quá trình tinh s ch s n ph m ư c bi u di n trên các th sau: Hình 2. Tinh s ch ph c h p 131I-rituximab sau khi ánh d u phóng x . Hình 2A cho th y sơ tách ph c mi n d ch phóng x qua c t sephadex. Các phân t kháng th g n phóng x do có tr ng lư ng phân t l n, kho ng 150 KDa nên di chuy n xu ng trư c, các phân t nh như 131I t do, các ch t oxy hóa, kh còn th a di chuy n ch m, do ó nh thu ư c c a 131I-rituximab và 131I cách xa nhau rõ ràng, m tách là dung d ch NaCl 0,9% ho c phosphate PBS pH 7,2 u thích h p tách phân o n 131I-rituximab. th 2B cho th y ph c 131I-rituximab thu ư c trong mi n 46 ml. Phân t 131I t do tách kh i h n h p và thu ư c trong kho ng 10-11 ml. tinh khi t hóa phóng x c a 131Irituximab ư c phân tích trên h FPLC dùng detector UV và detector o phóng x như hình 3. N.T. Thu và nnk. /Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 29, Số 3 (2013) 51-58 55 Hình 3. Ki m tra tinh khi t hóa phóng x c a 131I-rituximab b ng phương pháp FPLC. th trên hình 3 cho th y, th i gian lưu c a các phân t k t t c a kháng th là 12,5 phút, phân t rituximab và 131I-rituximab là 131 14,0 phút và I là 22,2 phút, o trên hai detector phóng x và detector UV. Phân t kháng th ánh d u phóng x 131I-rituximab và rituximab có th i gian lưu gi ng nhau. Ph c I-rituximab ư c phân tích b ng phương pháp TLC và ch p trên thi t b phóng x t ch p cyclone (hình 4A). Các m u 131I-rituximab phân tích b ng s c ký i n di ư c quét trên máy bioscan như hình 4B, 4C. 131 Hình 4. tinh khi t hóa phóng x c a 131I-rituximab.