Xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong bạch cầu cấp dòng tủy tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> XÁC ĐỊNH 4 TỔ HỢP GEN AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9<br /> TRONG BẠCH CẦU CẤP DÒNG TỦY TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU<br /> HUYẾT HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH<br /> Phan Nguyễn Thanh Vân*, Nguyễn Tấn Bỉnh*, Nguyễn Thị Kim Định*, Phan Thị Xinh**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong<br /> bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT).<br /> Phương pháp nghiên cứu: Mô tả cắt ngang. Sử dụng phản ứng khuếch đại gen phiên mã ngược với mồi<br /> thiết kế có thể phát hiện được tất cả các kiểu bản sao của mỗi tổ hợp gen. Nghiên cứu được tiến hành trên bệnh<br /> nhân BCCDT tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM từ ngày 01 tháng 03 năm 2010 đến 31 tháng 7<br /> năm 2011.<br /> Kết quả: 19 bệnh nhân (BN) biểu hiện AML1/ETO (11,7%), 11 BN biểu hiện PML/RARA (6,8%), 7 BN<br /> biểu hiện CBFB/MYH11 (4,3%), và 4 BN biểu hiện MLL/AF9 (2,5%), trong số 162 BN BCCDT.<br /> Kết luận: Kỹ thuật RT-PCR đơn giản, có độ nhạy cao nên được triển khai tại các cơ sở chuyên khoa Huyết<br /> học tại Việt Nam để giúp phát hiện nhanh các chuyển vị NST thường gặp không những trong BCCDT mà còn<br /> trong các bệnh lý máu ác tính khác.<br /> Từ khóa: Bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT), Phản ứng khuếch đại gen phiên mã ngược (RT-PCR: Reverse<br /> Transcriptase Polymerase Chain Reaction).<br /> <br /> ABSTRACT<br /> DETECTION OF 4 FUSION GENES: AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 IN ACUTE<br /> MYELOID LEUKEMIA PATIENTS AT BLOOD TRANSFUSION HEMATOLOGY HOSPITAL HO CHI<br /> MINH CITY<br /> Phan Nguyen Thanh Van, Nguyen Tan Binh, Nguyen Thi Kim Dinh, Phan Thi Xinh<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 4 - 2011: 498 - 502<br /> Objective: To detect 4 fusion genes AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 in Acute<br /> Myeloid Leukemia (AML) patients.<br /> Method: Case series - descriptive research. Using RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction)<br /> with primer sets that can amplify all possible transcripts of each fusion gene. From March 01, 2010 to July 31,<br /> 2011, we analysed Acute Myeloid Leukemia patients at Blood Transfusion Hematology Hospital.<br /> Results: 19 patients expressing AML1/ETO (11.7%), 11 patients expressing PML/RARA (6.8%), 7<br /> patients expressing CBFB/MYH11 4.3%), and 8 patients expressing MLL/AF9 (2.5%), among 162 newly<br /> diagnosed patients with AML.<br /> Conclusion: RT-PCR is simple and highly sensitive technique that should apply to detect the frequent<br /> chromosome translocations not only in AML but also in other hematologic malignancies in hematology centers in<br /> Vietnam.<br /> * Bệnh Viện Truyền Máu Huyết Học Thành Phố Hồ Chí Minh<br /> ** Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: ThS. BS. Phan Nguyễn Thanh Vân<br /> <br /> ĐT: 0919.691.770<br /> <br /> Email:<br /> <br /> vanntp@yahoo.com<br /> <br /> 498<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Keywords: Acute Myeloid Leukemia (AML), Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR).<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> <br /> Phương pháp<br /> <br /> Cho đến nay, các bất thường về nhiễm sắc<br /> thể (NST) liên quan chặt chẽ với bệnh lý ác tính<br /> hệ tạo máu và là chỉ điểm quan trọng trong việc<br /> chẩn đoán và tiên lượng bệnh(11). Khảo sát<br /> những bất thường về NST và đột biến gen lúc<br /> chẩn đoán là yếu tố tiên lượng độc lập đối với<br /> đáp ứng điều trị và thời gian sống còn của bệnh<br /> nhân (BN). Việc phân nhóm nguy cơ theo di<br /> truyền tế bào khác nhau giữa nhóm BN trẻ tuổi<br /> và nhóm ≥ 60 tuổi và những bất thường NST<br /> mắc phải hiện diện trong tế bào ung thư máu<br /> của hầu hết bệnh nhân BCCDT.<br /> <br /> Mẫu máu hoặc mẫu tủy được ly trích RNA<br /> sử dụng Sepazol-I (Nacalai Tesque Inc., Nhật<br /> Bản) theo qui trình kỹ thuật do công ty cung<br /> cấp. Sau khi ly trích RNA, cDNA được tổng hợp<br /> bằng cách sử dụng kít iScript cDNA synthesis<br /> (Công ty Biorad, Mỹ), tuân thủ qui trình kỹ<br /> thuật của công ty.<br /> <br /> Một số chuyển vị NST tạo ra những tổ hợp<br /> gen đặc trưng trong bệnh BCCDT như<br /> AML1/ETO,<br /> PML/RARA,<br /> CBFB/MYH11,<br /> MLL/AF9 của 4 chuyển vị nhiễm sắc thể<br /> t(8;21)(q22;q22)(1,15,16,17),<br /> t(15;17)(q22;q11)(2,5,6,8),<br /> (4,7,13)<br /> inv(16)(p13;q22)<br /> , và t(9;11)(p21-22;q23)(3,10,14),<br /> tương ứng.<br /> Từ đầu năm 2010 đến nay, Bệnh viện Truyền<br /> máu Huyết học TP. HCM đã sử dụng phương<br /> pháp RT-PCR để khảo sát bộ 4 tổ hợp gen<br /> thường gặp là AML1/ETO, PML/RARA,<br /> CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong BCCDT ngay lúc<br /> chẩn đoán. Với phương pháp này, kết quả sẽ<br /> được xác định trong vòng 1 tuần góp phần phân<br /> nhóm tiên lượng vào ngày thứ 8 của phác đồ<br /> điều trị, giúp lựa chọn hướng điều trị phù hợp<br /> cho từng bệnh nhân.<br /> <br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Thiết kế nghiên cứu<br /> <br /> Thành phần phản ứng PCR gồm có 1 μL<br /> cDNA được trộn với 0,1 μL (0,5 U) iTaq<br /> Polymerase (Biorad), 1 μL (10 pmol) cặp mồi<br /> xuôi và ngược trong 20 μL hỗn hợp. Để khuếch<br /> đại bộ 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA,<br /> CBFB/MYH11, MLL/AF9, 4 mồi cho mỗi tổ hợp<br /> gen được sử dụng. Riêng đối với những tổ hợp<br /> gen cần được khảo sát qua hai giai đoạn thì<br /> phản ứng PCR lần thứ hai sử dụng 1 μL sản<br /> phẩm của phản ứng PCR lần thứ nhất làm mạch<br /> khuôn. Nhiệt độ bắt cặp và thời gian phản ứng<br /> có thể thay đổi tùy theo từng loại tổ hợp gen,<br /> cặp mồi, tùy theo từng trường hợp cụ thể. Phản<br /> ứng PCR được thực hiện bằng cách sử dụng<br /> máy luân nhiệt iCycler (Công ty Biorad).<br /> Sản phẩm của phản ứng PCR được điện di<br /> trên thạch 2% chứa 0,5 μg/mL ethidium bromide<br /> trong 0,5 x TBE, quan sát bằng hệ thống Gel Doc<br /> EQ (Công ty Biorad). Kết quả dương tính nếu<br /> như biểu hiện kích thước băng tương ứng các<br /> cặp mồi được mô tả trong bảng 1(18). Kết quả<br /> được xử lý bằng phần mềm Excell và Medicalc.<br /> Bảng 1: Danh sách các đoạn mồi khảo sát 4 tổ hợp<br /> gen trong BCCDT<br /> STT Tên mồi Trình tự nucleotide<br /> <br /> Mô tả loạt ca.<br /> <br /> Đối tượng<br /> Nghiên cứu được tiến hành trên 162 bệnh<br /> nhân BCCDT tại Bệnh viện Truyền máu Huyết<br /> học TP.HCM từ ngày 01 tháng 03 năm 2010 đến<br /> 31 tháng 7 năm 2011. Bệnh nhân mới được chẩn<br /> đoán xác định bệnh bạch cầu cấp dòng tủy, dựa<br /> vào huyết đồ, tủy đồ và dấu ấn miễn dịch tế bào.<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> <br /> Tên gen và kích<br /> thước sản phẩm<br /> <br /> 5' CTA CCG CAG<br /> AML1-A CCA TGA AGA ACC<br /> AML1/ETO<br /> 3'<br /> AML1 exon 5/ ETO<br /> 5' AGA GGA AGG<br /> exon 2: 395 bp<br /> ETO-B CCC ATT GCT GAA<br /> 3'<br /> 5' AGC GCG ACT<br /> PML/RARA<br /> PML-C2<br /> ACG AGG AGA T 3' Type bcr1: 688 bp<br /> 5' CTG CTG CTC<br /> Type bcr2: 652 bp<br /> RARA-D<br /> TGG GTC TCA AT 3' Type bcr3: 289 bp<br /> <br /> 499<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> STT Tên mồi Trình tự nucleotide<br /> 5<br /> <br /> CBFB-C<br /> <br /> 6<br /> <br /> MYH11D2<br /> <br /> 7<br /> <br /> MLL-F1<br /> <br /> 8<br /> <br /> AF9-R1<br /> <br /> 9<br /> <br /> MLL-F2<br /> <br /> 10<br /> <br /> AF9-R2<br /> <br /> Tên gen và kích<br /> thước sản phẩm<br /> <br /> 5' GGG CTG TCT<br /> GGA GTT TGA TG 3' CBFB/MYH11<br /> Type A: 271 bp<br /> 5' CTT GAG CGC<br /> CTG CAT GTT 3'<br /> 5' CCA GAG CAG<br /> AGC AAA CAG AAA<br /> A 3'<br /> MLL/AF9<br /> 5' CGA TCT GCT<br /> GCA GAA TGT GTC MLL exon 9/ AF9<br /> 3'<br /> exon 5: 468bp<br /> 5' CCG CCC AAG MLL exon 10/ AF9<br /> TAT CCC TGT A 3'<br /> exon 4: 645 bp<br /> 5' GTA TGC CTT<br /> GTC ACA TTC ACC<br /> A 3'<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Từ 01/03/2010 đến 31/07/2011, 162 bệnh nhân<br /> BCCDT đã được chọn vào nhóm nghiên cứu, để<br /> xác định 4 tổ hợp gen nêu trên. Tuổi trung vị là<br /> 35,5 tuổi, giá trị bách phân thứ 25 (25%) là 16 và<br /> giá trị bách phân thứ 75 (75%) là 46. Trong đó,<br /> tuổi trung vị của giới nam là 39, của giới nữ là<br /> 31,5. Sự phân bố tuổi được thể hiện ở bảng 2.<br /> Bảng 2: Sự phân phối nhóm bệnh BCCDT theo tuổi<br /> Nhóm tuổi<br /> Dưới 15 tuổi<br /> Từ 15 đến dưới 30 tuổi<br /> Từ 30 đến dưới 45 tuổi<br /> Từ 45 đến dưới 60 tuổi<br /> Từ 60 tuổi trở lên<br /> Tổng số<br /> <br /> Số lượng<br /> 36<br /> 35<br /> 39<br /> 40<br /> 12<br /> 162<br /> <br /> Tỉ lệ%<br /> 22,2%<br /> 21,6%<br /> 24,1%<br /> 24,7%<br /> 7,4%<br /> 100,0%<br /> <br /> Tỉ lệ nam (51,9%) và nữ (48,1%) gần như<br /> tương đồng nhau. Chẩn đoán tủy đồ chiếm đa<br /> số là M2 (61,1%); kế tiếp, M3 (14,2%), M4 (12,3%)<br /> (Bảng 3).<br /> Bảng 3: Sự phân phối nhóm bệnh BCCDT theo chẩn<br /> đoán tủy đồ<br /> Chẩn đoán<br /> M0<br /> M1<br /> M2<br /> M3<br /> M4<br /> M5<br /> M6<br /> M7<br /> Tổng số<br /> <br /> 500<br /> <br /> Số lượng<br /> 3<br /> 5<br /> 99<br /> 23<br /> 20<br /> 3<br /> 7<br /> 2<br /> 162<br /> <br /> Tỉ lệ%<br /> 1,9%<br /> 3,1%<br /> 61,1%<br /> 14,2%<br /> 12,3%<br /> 1,9%<br /> 4,3%<br /> 1,2%<br /> 100,0%<br /> <br /> Kết quả xác định gen được mô tả trong bảng<br /> 4. Trong đó, nhóm tiên lượng tốt (AML1/ETO,<br /> PML/RARA, CBFB/MYH11) chiếm tỉ lệ 22,8%,<br /> nhóm còn lại chiếm tỉ lệ 77,2%.<br /> Bảng 4: Kết quả 4 tổ hợp gen trong BCCDT<br /> Loại gen<br /> AML1/ETO<br /> PML/RARA<br /> CBFB/MYH11<br /> MLL/AF9<br /> Không biểu hiện gen<br /> Tổng số<br /> <br /> Số lượng<br /> 19<br /> 11<br /> 7<br /> 4<br /> 121<br /> 162<br /> <br /> Tỉ lệ%<br /> 11,7%<br /> 6,8%<br /> 4,3%<br /> 2,5%<br /> 74,7%<br /> 100,0%<br /> <br /> Chẩn đoán tủy đồ và dấu ấn miễn dịch tế<br /> bào có liên quan với tổ hợp gen (Bảng 5, 6, 7<br /> và 8).<br /> Bảng 5: Phân phối nhóm bệnh BCCDT theo chẩn<br /> đoán tủy đồ và tổ hợp gen (P < 0,0001)<br /> Loại gen<br /> Không<br /> AML1/<br /> CBFB/M MLL/A<br /> PML/RARA<br /> biểu hiện Tổng số<br /> ETO<br /> YH11<br /> F9<br /> gen<br /> M0<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 3<br /> 3 (1,9%)<br /> M1<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 5<br /> 5 (3,1%)<br /> M2<br /> 17<br /> 0<br /> 4<br /> 1<br /> 77<br /> 99 (61,1%)<br /> M3<br /> 0<br /> 11<br /> 0<br /> 1<br /> 11<br /> 23 (14,2%)<br /> M4<br /> 2<br /> 0<br /> 3<br /> 0<br /> 15<br /> 20 (12,3%)<br /> M5<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 2<br /> 1<br /> 3 (1,9%)<br /> M6<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 7<br /> 7 (4,3%)<br /> M7<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 0<br /> 2<br /> 2 (1,2%)<br /> 19<br /> 11<br /> 7<br /> 4<br /> 121<br /> Tổng số (11,7%<br /> 162<br /> (6,8%)<br /> (4,3%) (2,5%) (74,7%)<br /> )<br /> Chẩn<br /> đoán<br /> <br /> Bảng 6: Phân phối nhóm bệnh BCCDT, thể M2 và tổ<br /> hợp gen AML1/ETO (P = 0,0143)<br /> Tổ hợp gen<br /> AML1/ETO +<br /> AML1/ETO Tổng số<br /> <br /> Chẩn đoán<br /> Không phải<br /> M2<br /> Tổng số<br /> M2<br /> 17<br /> 2<br /> 19 (11,7%)<br /> 82<br /> 61<br /> 143 (88,3%)<br /> 99<br /> 63<br /> 162<br /> (61,1%)<br /> (38,9%)<br /> <br /> Bảng 7: Phân phối nhóm bệnh BCCDT, thể M2 và tổ<br /> hợp gen PML/RARA (P = 0,0001)<br /> Tổ hợp gen<br /> PML/RARA +<br /> PML/RARA Tổng số<br /> <br /> Chẩn đoán<br /> M2<br /> Không phải M2 Tổng số<br /> 0<br /> 11<br /> 11 (6,8%)<br /> 99<br /> 52<br /> 151 (93,2%<br /> )<br /> 99 (61,1%) 63 (38,9%)<br /> 162<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> Bảng 8: Phân phối nhóm bệnh BCCDT, thể M3 và tổ<br /> hợp gen PML/RARA (P < 0,0001)<br /> Tổ hợp gen<br /> Chẩn đoán<br /> M3<br /> Không phải M3<br /> Tổng số<br /> 11<br /> 0<br /> 11 (6,8%)<br /> PML/RARA +<br /> 12<br /> 139<br /> 151 (93,2%)<br /> PML/RARA Tổng số<br /> 23 (14,2%)<br /> 139 (85,8%)<br /> 162<br /> <br /> BÀN LUẬN<br /> Đối với BCCDT, những bất thường NST<br /> lúc chẩn đoán có ý nghĩa tiên lượng rất rõ<br /> ràng. Có 4 kiểu chuyển vị NST thường gặp<br /> trong<br /> BCCDT<br /> là<br /> t(8;21)(q22;q22),<br /> t(15;17)(q22;q11),<br /> inv(16)(p13;q22),<br /> và<br /> t(9;11)(p21-22;q23) tạo ra 4 kiểu tổ hợp gen là<br /> AML1/ETO,<br /> PML/RARA,<br /> CBFB/MYH11,<br /> MLL/AF9 tương ứng. Trong 4 chuyển vị NST<br /> trên, thì t(8;21)(q22;q22), t(15;17)(q22;q11),<br /> inv(16)(p13;q22) thuộc nhóm tiên lượng tốt,<br /> và t(9;11)(p21-22;q23) hay không có chuyển vị<br /> NST thuộc nhóm tiên lượng trung bình.<br /> Từ 01/03/2010 đến 31/07/2011, khảo sát 162<br /> bệnh nhân (BN) BCCDT mới chẩn đoán bằng<br /> kỹ thuật RT-PCR, chúng tôi phát hiện 19 BN<br /> biểu hiện AML1/ETO (11,7%), 11 BN biểu hiện<br /> PML/RARA (6,8%), 7 BN biểu hiện<br /> CBFB/MYH11 (4,3%), và 4 BN biểu hiện<br /> MLL/AF9 (2,5%) (Bảng 4). Trong nghiên cứu<br /> này, chỉ với kỹ thuật RT-PCR, chúng tôi đã<br /> phát hiện được 41 bệnh nhân có mang 4 kiểu<br /> tổ hợp gen thường gặp trên, chiếm tỷ lệ 25,3%<br /> giúp phân nhóm tiên lượng được bệnh nhân<br /> BCCDT. Trong đó, nhóm tiên lượng tốt<br /> (AML1/ETO,<br /> PML/RARA,<br /> CBFB/MYH11)<br /> chiếm tỉ lệ 22,8%, tỉ lệ này tương đương với<br /> nghiên cứu của United Kingdom Medical<br /> Research Council (MRC-10). Nhóm còn lại<br /> chiếm tỉ lệ 77,2% có biểu hiện MLL/AF9 hay<br /> không biểu hiện tổ hợp gen nào trong số 4 tổ<br /> hợp gen khảo sát, tuy nhiên chúng ta chưa thể<br /> loại trừ bất thường nhiễm sắc thể (NST) khác<br /> nên không xếp vào nhóm tiên lượng trung<br /> bình được.<br /> Điều đó cho chúng ta thấy được vai trò quan<br /> trọng của NST đồ trong phân nhóm tiên lượng<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> BCCDT, các kỹ thuật di truyền phân tử hiện đại<br /> như FISH hoặc RT-PCR cũng chỉ hỗ trợ chứ<br /> không thể thay thế hoàn toàn NST đồ. Tuy<br /> nhiên, kỹ thuật RT-PCR có nhiều ưu điểm trong<br /> việc khảo sát bộ 4 tổ hợp gen thường gặp của<br /> BCCDT, trong thời gian ngắn nhất (trong vòng<br /> 24 giờ), có ý nghĩa tiên lượng cũng như định<br /> hướng điều trị. Tiêu biểu như phát hiện t(15;17)<br /> và tổ hợp gen PML/RARA đóng góp rất lớn<br /> trong việc quyết định điều trị bằng ATRA; cũng<br /> như là cơ sở cho chẩn đoán, theo dõi điều trị và<br /> tiên lượng.<br /> Trong nghiên cứu của chúng tôi, có mối liên<br /> quan giữa chẩn đoán tủy đồ và tổ hợp gen (P <<br /> 0,0001 - Bảng 5), cụ thể liên quan có ý nghĩa<br /> thống kê (P < 0,05) giữa chẩn đoán BCCDT thể<br /> M2 và gen AML1/ETO (Bảng 6), thể M2 và gen<br /> PML/RARA (Bảng 7), thể M3 và gen PML/RARA<br /> (Bảng 8). Nói cách khác, tổ hợp gen PML/RARA<br /> thường gặp ở BCCDT thể M3 và không gặp ở<br /> BCCDT thể M2 cũng như các thể khác; trong khi<br /> đó tổ hợp gen AML1/ETO thường gặp ở BCCDT<br /> thể M2. Điều này góp phần cho hướng chẩn<br /> đoán chính xác các thể bệnh BCCDT.<br /> Gần đây, có nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng<br /> do sự xuất hiện những đột biến gen hoặc những<br /> thay đổi về biểu hiện của một gen nào đó đã ảnh<br /> hưởng trực tiếp đến tiên lượng của bệnh nhân.<br /> Điều này được ghi nhận trên cả bệnh nhân<br /> BCCDT người lớn lẫn trẻ em(9,12). Có mối tương<br /> quan giữa kiểu gen được quy định bởi các đột<br /> biến trên với dự hậu điều trị hay nguy cơ tái<br /> phát ở BN được chẩn đoán BCCDT có kết quả di<br /> truyền học bình thường. Trong tương lai, ngoài<br /> các kỹ thuật NST đồ, FISH và RT-PCR đã thiết<br /> lập điều kiện và ứng dụng thành công vào chẩn<br /> đoán các bất thường NST, chúng ta cần triển<br /> khai khảo sát các đột biến gen trên để phân<br /> nhóm tiên lượng chính xác hơn nữa cho nhóm<br /> bệnh nhân có NST đồ bình thường hoặc những<br /> bệnh nhân cấy NST không mọc. Đồng thời,<br /> cũng cần triển khai RQ-PCR để định lượng số<br /> bản sao của những tổ hợp gen để theo dõi đáp<br /> ứng chính xác hơn trong quá trình điều trị. Đó<br /> là một công việc lớn cần nhiều thời gian và kinh<br /> <br /> 501<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> phí vì liên quan đến nhiều gen và nhiều tổ hợp<br /> gen.<br /> <br /> 7.<br /> <br /> Đây là nghiên cứu đầu tiên khảo sát bộ 4 tổ<br /> hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11,<br /> MLL/AF9 trên người Việt Nam. Chúng tôi đã<br /> chuẩn hóa thành công và đang sử dụng các kỹ<br /> thuật trên một cách thường quy trong khảo sát<br /> những bất thường NST và gen cho những bệnh<br /> nhân BCCDT tại Bệnh viện Truyền máu Huyết<br /> học TP. Hồ Chí Minh.<br /> <br /> 8.<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Kỹ thuật RT-PCR phát hiện 4 tổ hợp gen<br /> thường gặp trong BCCDT một cách nhanh<br /> chóng, có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, góp phần<br /> cho hướng chẩn đoán chính xác các thể bệnh<br /> BCCDT, giúp phân nhóm tiên lượng chính xác<br /> góp phần nâng cao chất lượng và hiệu quả điều<br /> trị. Kỹ thuật đơn giản nên có thể dễ dàng triển<br /> khai trong những phòng xét nghiệm sinh học<br /> phân tử của chuyên ngành Huyết học.<br /> <br /> 9.<br /> <br /> 10.<br /> <br /> 11.<br /> <br /> 12.<br /> <br /> 13.<br /> <br /> 14.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 3.<br /> <br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> <br /> 502<br /> <br /> Asou H, Tashiro S, Hamamoto K, et al. (1991). Establishment of<br /> a human acute myeloid leukemia cell line (Kasumi-1) with 8;21<br /> chromosome translocation. Blood, 77 (9): 2031-2036.<br /> Borrow J, Goddard AD, Sheer D, et al. (1990). Molecular analysis<br /> of acute promyelocytic leukemia breakpoint cluster region on<br /> chromosome 17. Science, 249 (4976): 1577-1656.<br /> Cavazzini F, Bardi A, Tammiso E, et al. (2006). Validation of an<br /> interphase fluorescence in situ hybridization approach for the<br /> detection of MLL gene rearrangements and of the MLL/AF9<br /> fusion in acute myeloid leukemia. Haematologica, 91 (3): 381385.<br /> Claxton DF, Liu P, Hsu HB, et al. (1994). Detection of fusion<br /> transcripts generated by the inversion 16 chromosome in acute<br /> myelogenous leukemia. Blood, 83 (7): 1750-1755.<br /> de Thé H, Chomienne C (1990). The t(15;17) translocation of<br /> acute promyelocytic leukemia fuses the retinoic acid receptor α<br /> gene to a novel transcribed locus. Nature, 347: 558-561.<br /> Lemons RS, Eilander D (1990). Cloning and characterization of<br /> the t(15;17) translocation breakpoint region in acute<br /> promyelocytic leukemia. Genes Chromosome Cancer, 2: 79-87.<br /> <br /> 15.<br /> <br /> 16.<br /> <br /> 17.<br /> <br /> 18.<br /> <br /> Liu PP, Tarle SA, Hajra A (1993). Fusion between transcription<br /> factor CBFβ/PEBP2β and a myosin heavy chain in acute myeloid<br /> leukemia. Science, 261: 1041-1044.<br /> Longo L, Pandolfi PP (1990). Rearrangements and aberrant<br /> expression of the RARa gene in acute promyelocytic leukemias. J<br /> Exp Med, 172: 1571-1575.<br /> Mrozek K, Marcucci G, Paschka P, et al. (2007). Clinical relevance<br /> of mutations and gene-expression changes in adult acute<br /> myeloid leukemia with normal cytogenetics: are we ready for a<br /> prognostically prioritized molecular classification? Blood, 109 (2):<br /> 431-478.<br /> Muller CI, Trepel M, Kunzmann R, et al. (2004). Hematologic<br /> and molecular spontaneous remission following sepsis in acute<br /> monoblastic leukemia with translocation (9;11): a case report and<br /> review of the literature. Eur J Haematol, 73 (1): 62-67.<br /> Raimondi CS (2006). Cytogenetics of acute leukemias. In: PUI<br /> (Eds.). Childhood Leukemias, 2nd edition: 235-237. Cambrigde<br /> University Press, UK.<br /> Shimada A, Taki T, Tabuchi K, et al. (2008). Tandem<br /> duplications of MLL and FLT3 are correlated with poor<br /> prognoses in pediatric acute myeloid leukemia: a study of the<br /> Japanese childhood AML Cooperative Study Group. Pediatr<br /> Blood Cancer, 50 (2): 264-272.<br /> Shurtleff SA, Meyers S, Hiebert SW, et al. (1995). Heterogeneity<br /> in CBF beta/MYH11 fusion messages encoded by the<br /> inv(16)(p13q22) and the t(16;16)(p13;q22) in acute myelogenous<br /> leukemia. Blood, 85 (12): 3695-4397.<br /> Strissel PL, Strick R, Tomek RJ, et al. (2000). DNA structural<br /> properties of AF9 are similar to MLL and could act as<br /> recombination hot spots resulting in MLL/AF9 translocations<br /> and leukemogenesis. Hum Mol Genet, 9 (11): 1671-1679.<br /> Tighe JE, Calabi F (1994). Alternative, out-of-frame runt/MTG8<br /> transcripts are encoded by the derivative (8) chromosome in the<br /> t(8;21) of acute myeloid leukemia M2. Blood, 84 (7): 2115-2135.<br /> Tighe JE, Daga A, Calabi F (1993). Translocation breakpoints are<br /> clustered on both chromosome 8 and chromosome 21 in the<br /> t(8;21) of acute myeloid leukemia. Blood, 81 (3): 592-597.<br /> van de Locht L. T., Smetsers T. F., Wittebol S., et al. (1994).<br /> Molecular diversity in AML1/ETO fusion transcripts in patients<br /> with t(8;21) positive acute myeloid leukaemia. Leukemia, 8 (10):<br /> 1780-1783.<br /> van Dongen JJ, Macintyre EA, Gabert JA, et al. (1999).<br /> Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from<br /> chromosome aberrations in acute leukemia for detection of<br /> minimal residual disease. Report of the BIOMED-1 Concerted<br /> Action: investigation of minimal residual disease in acute<br /> leukemia. Leukemia, 13 (12): 1901-1928.<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br />