Xác định hợp chất polyphenol toàn phần có trong một số loại rau quả có tác dụng làm mịn da bằng phương pháp folin-ciocalteu

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> XÁC ĐỊNH HỢP CHẤT POLYPHENOL TOÀN PHẦN<br /> CÓ TRONG MỘT SỐ LOẠI RAU QUẢ CÓ TÁC DỤNG LÀM MỊN DA BẰNG<br /> PHƯƠNG PHÁP FOLIN-CIOCALTEU<br /> Giang Thị Phương Anh*, Phan Thanh Dũng*, Võ Thị Bạch Huệ*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục đích: Xác định hàm lượng polyphenol toàn phần có trong các loại rau củ quả: cà chua, cà rốt, cần tây,<br /> khổ qua và ớt chuông có trong bài thuốc làm đẹp da phổ biến trong dân gian hiện nay.<br /> Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Các loại rau, củ, quả như cà chua, cà rốt, cần tây, khổ qua và ớt<br /> chuông được khảo sát sơ bộ thành phần hóa thực vật; định lượng polyphenol toàn phần bằng phương pháp FolinCiocalteu.<br /> <br /> Kết quả và bàn luận: Kết quả khảo sát cho thấy: Có nhiều carotenoid trong cà chua và cà rốt. Trong dịch<br /> chiết nước và dịch chiết cồn có sự hiện diện của hợp chất polyphenol. Trong dịch chiết cồn ngoài sự hiện diện của<br /> proanthocyanidin còn có flavonoid.Đã khảo sát được điều kiện tối ưu để chiết xuất và xây dựng được phương<br /> pháp xác định hàm lượng polyphenol toàn phần, trong cà chua, cà rốt, cần tây, khổ qua và ớt chuông. Kết quả<br /> thẩm định qui trình cho thấy phương pháp định lượng có độ lặp lại và đô chính xác cao (RSD < 4%); tỉ lệ phục<br /> hồi nằm trong giới hạn cho phép (85% - 110%).<br /> <br /> Kết luận: Đã xây dựng thành công qui trình định lượng polyphenol toàn phần có trong một số loại rau củ<br /> quả bằng phương pháp Folin Ciocalteu. Qui trình định lượng được thẩm định và áp dụng thành công trên một<br /> số loại rau củ quả như cà chua, khổ qua, ớt chuông, cần tây.<br /> Từ khóa: Folin Ciocalteu, ớt chuông, cà rốt, cà chua, khổ qua, cần tây<br /> <br /> ABSTRACT<br /> DETERMINATION OF TOTAL POLYPHENOL IN SOME VEGETABLES, TUBERS AND FRUITS<br /> FOLIN-CIOCALTEU METHOD<br /> Giang Thị Phương Anh, Phan Thanh Dung, Vo Thi Bach Hue<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - Supplement of No 2 - 2014: 193 - 197<br /> Objective: To determination of total polyphenol components of some vegetables, tubers and fruits: tomato,<br /> carrot, celery, green pepper and bitter melon in a popular skin-care medication.<br /> Materials and methods: Some vegetables, tubers and fruits such as tomato, carrot, celery, bitter melon and<br /> green pepper were characterized for chemical components and quantification of the total polyphenol compounds<br /> by Folin-Ciocalteu method.<br /> Results and disscussion: Preliminary study of plant chemistry found the presence carotenoids in<br /> tomato and carrot. The aqueous and ethanol extracts contain polyphenol. The ethanol extrac contains<br /> proanthrocyanidine and also flavonoid. The optimized conditions for extracting and quantity determination<br /> of total polyphenol compound have been investigated. Validation results showed that the quantification<br /> method has good repeatability and accuracy with (RSD < 4%); recovery range from (85-110%) which is<br /> within acceptable limit.<br /> Conclusion: The quantification procedure for determination of total polyphenol in some vegetables, tubers<br /> * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh<br /> ĐT: 0983 957158<br /> Tác giả liên lạc: TS. Phan Thanh Dũng<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Email: dungpharm@yahoo.com<br /> <br /> 193<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> and fruits by Folin Ciocalteu method has been established. The procedure has been validated and succesfully<br /> applied for tomato, bitter melon, green pepper and celery.<br /> Key word: Folin Ciocalteu, green peppers, carrot, tomato, bitter melon, celery.<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> <br /> Trang thiết bị<br /> <br /> Để giữ gìn tuổi trẻ và sắc đẹp thì ngoài việc<br /> ăn uống đầy đủ dinh dưỡng, xu hướng hiện nay<br /> của đa số chị em là sử dụng các sản phẩm dưỡng<br /> da, chống lão hóa. Trên thị trường hiện nay các<br /> sản phẩm làm đẹp rất đa dạng chủ yếu là các sản<br /> phẩm ngoại nhập. Rất khó phân biệt các sản<br /> phẩm thật, sản phẩm giả và cũng rất khó biết rõ<br /> tác dụng phụ của chúng đến đâu. Chính vì vậy,<br /> xu hướng làm đẹp da bằng các sản phẩm từ<br /> thiên nhiên đang được thịnh hành. Có rất nhiều<br /> bài thuốc dân gian làm đẹp da từ một số rau, củ,<br /> quả phổ biến dễ tìm, dễ chế biến như: dưa leo, cà<br /> chua, cà rốt, sữa chua, mật ong, trà<br /> xanh.v.v…Bài thuốc làm đẹp da phổ biến hiện<br /> nay gồm hỗn hợp các loại rau, củ, quả: cà chua,<br /> cà rốt, cần tây, khổ qua và ớt chuông. Đề tài này<br /> góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của<br /> các loại rau củ quả có trong bài thuốc.<br /> <br /> Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu 2550 với<br /> phần mềm UVProbe V. 1,11 (Japan).<br /> <br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> Khảo sát sơ bộ thành phần hóa thực<br /> vật 3 9 : Chiết các chất có trong nguyên liệu<br /> thực vật thành 3 phân đoạn có độ phân cực<br /> tăng dần lần lượt với các dung môi: ether<br /> ethylic, ethanol (hay methanol) và nước. Xác<br /> định các nhóm hợp chất trong từng dịch chiết<br /> bằng các phản ứng đặc trưng.<br /> ( , )<br /> <br /> Định lượng hợp chất phenol toàn phần bằng<br /> phương pháp Folin-Ciocalteu(1,5,6,7,10): dựa trên<br /> sự khử của tungstat/molybdat trong thuốc thử<br /> Folin-Ciocalteu bởi hợp chất phenol/môi trường<br /> kiềm tạo ra sản phẩm có màu, đo độ hấp thu ở<br /> bước sóng cực đại của sản phẩm thu được<br /> (phương pháp quang phổ)<br /> Thăm dò các điều kiện tối ưu để định lượng:<br /> tiến hành xác định độ ổn định của thuốc thử<br /> Folin Ciocalteu 1/10 và dung dịch natri carbonat<br /> 7,5%. Xác định bước sóng hấp thu cực đại của<br /> các dung dịch thử nghiệm. Xác định độ ổn định<br /> hấp thu quang của các dung dịch thử nghiệm.<br /> Khảo sát chiết xuất ở nhiệt độ phòng và ở 40 oC.<br /> Xác định thời gian siêu âm để chiết hoàn toàn<br /> hợp chất polyphenol trong mẫu thử.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU<br /> Đối tượng<br /> Dịch chiết cồn từ 5 loại rau, củ, quả: cà chua,<br /> cà rốt, cần tây, ớt chuông và khổ qua thu mua tại<br /> Đà Lạt.<br /> <br /> Chất đối chiếu: Pyrogallol 98,00%, Fluka,<br /> lot 1273740, Vitamin C 99,56%, SanofiSynthelabo VN (chuẩn làm việc, số kiểm soát:<br /> 100256-WS), Acid gallic 99,00%, Trung Quốc.<br /> <br /> Xây dựng qui trình, thẩm định quy trình<br /> phân tích(2,4).<br /> <br /> KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU<br /> Khảo sát sơ bộ thành phần hóa thực vật(3,9)<br /> Bảng 1: Khảo sát sơ bộ thành phần hóa thực vật<br /> Hợp chất xác định<br /> Dịch chiết ether<br /> Carotenoid (TT H2SO4 đđ)<br /> Dịch chiết cồn<br /> <br /> Cà chua<br /> <br /> Ớt chuông<br /> <br /> +++<br /> <br /> -<br /> <br /> Flavonoid γ-pyron<br /> Anthocyanosid<br /> Proanthocyanidin<br /> <br /> +++<br /> ++<br /> <br /> +++<br /> +++<br /> <br /> 194<br /> <br /> Dược liệu<br /> Cà rốt<br /> <br /> Cần tây<br /> <br /> Khổ qua<br /> <br /> +++<br /> <br /> -<br /> <br /> -<br /> <br /> +<br /> <br /> +<br /> <br /> +<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Hợp chất xác định<br /> - Polyphenol<br /> Dịch chiết nước<br /> Proanthocyanidin<br /> - Polyphenol<br /> <br /> Cà chua<br /> ++<br /> <br /> Ớt chuông<br /> ++<br /> <br /> +++<br /> ++<br /> <br /> +<br /> ++<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Dược liệu<br /> Cà rốt<br /> +++<br /> +<br /> +++<br /> <br /> Cần tây<br /> ++<br /> <br /> Khổ qua<br /> ++<br /> <br /> +<br /> ++<br /> <br /> +<br /> ++<br /> <br /> Ghi chú: (+): phản ứng có màu nhạt; (++): phản ứng có màu rõ; (+++): phản ứng có màu rất rõ; (-): phản ứng âm tính<br /> <br /> Kết quả khảo sát cho thấy trong dịch chiết<br /> ether có nhiều carotenoid trong cà chua và cà<br /> rốt. Trong dịch chiết nước và dịch chiết cồn có<br /> sự hiện diện của hợp chất flavonoid và hợp<br /> chất polyphenol. Trong dịch chiết cồn ngoài sự<br /> hiện diện của proanthocyanidin như dịch chiết<br /> nước còn có flavonoid cấu trúc pyron.<br /> <br /> Tiến hành khảo sát thời gian ổn định phản<br /> ứng màu từ 0-120 phút. Kết quả cho thấy, thời<br /> gian tối ưu từ 30-40 phút.<br /> <br /> Khảo sát bước sóng hấp thu cực đại<br /> Bảng 2: Kết quả khảo sát bước sóng hấp thu cực đại<br /> (λmax /nm)<br /> <br /> Định lượng hợp chất phenol toàn phầnphương pháp Folin-Ciocalteu<br /> <br /> (λmax /nm)<br /> <br /> Acid gallic Pyrogallol<br /> 758<br /> 752<br /> Cần tây<br /> 746<br /> <br /> Khổ qua<br /> 748<br /> <br /> Cà chua<br /> 760<br /> <br /> Cà rốt<br /> 768<br /> <br /> Ớt chuông<br /> 753<br /> <br /> Điều kiện tối ưu để định lượng<br /> Tiến hành khảo sát phương pháp chiết xuất,<br /> thời gian chiết, nhiệt độ chiết xuất, thời gian ổn<br /> định màu của phản ứng và bước sóng hấp thu<br /> cực đại của các nguyên liệu kết quả cho thấy<br /> điều kiện định lượng tối ưu như sau:<br /> - Mẫu được chiết với dung môi là cồn 50%<br /> bằng phương pháp siêu âm trong 5 phút. Nhiệt<br /> độ chiết xuất: 40 oC. Thời gian ổn định phản ứng<br /> màu: 30 - 40 phút. Đo quang ở bước sóng hấp<br /> thu cực đại: 750 nm.<br /> <br /> Xác định dung môi chiết<br /> Qua khảo sát sơ bộ thành phần hóa thực vật<br /> dung môi để chiết hợp chất phenol trong các<br /> nguyên liệu sẽ là cồn vì chiết được nhiều hợp<br /> chất hơn so với nước.<br /> Khảo sát nhiệt độ và thời gian siêu âm<br /> Tiến hành khảo sát thời gian siêu âm từ 5- 60<br /> phút và nhiệt độ từ 30 đến 45 0C. Kết quả cho<br /> thấy nhiệt độ chiết xuất tối ưu là 400 C và thời<br /> gian siêu âm tối ưu là 5 phút<br /> Khảo sát thời gian ổn định phản ứng màu<br /> <br /> Kết quả thẩm định quy trình<br /> Bảng 3: Tương quan tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thu<br /> Mẫu<br /> <br /> Nồng độ (mg/ml)<br /> <br /> Chuẩn gallic<br /> Chuẩn pyrogallol<br /> Cà chua<br /> Cà rốt<br /> Cần tây<br /> Khổ qua<br /> Ớt chuông<br /> <br /> 0,01 - 0,1<br /> 0,01 - 0,1<br /> 60 - 600<br /> 60 - 600<br /> 120 - 1200<br /> 60 - 600<br /> 20 - 200<br /> <br /> Hệ số tương quan (R ≥ 0,99)<br /> 0,9998<br /> 0,9990<br /> 0,9963<br /> 0,9930<br /> 0,9937<br /> 0,9919<br /> 0,9974<br /> <br /> Phương trình hồi quy<br /> Ŷ = 10,3955 X + 0,0108<br /> Ŷ = 13,721 X<br /> Ŷ = 1,5083X + 0,066<br /> Ŷ = 0,5049 X + 0,0285<br /> Ŷ = 0,5936 X + 0,0296<br /> Ŷ = 1,379 X + 0,1545<br /> Ŷ = 0,8697 X + 0,0622<br /> <br /> ⇒ Có sự tương quan chặt chẽ giữa nồng độ và độ hấp thu.<br /> <br /> Bảng 4: Kết quả khảo sát độ đúng<br /> Khoảng tin cậy 95% (n=5)<br /> <br /> Cà chua<br /> Cà rốt<br /> Cần tây<br /> <br /> 80%<br /> 89,72<br /> 94,00<br /> 89,74<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Thêm chuẩn gallic<br /> 100%<br /> 94,53<br /> 91,26<br /> 89,12<br /> <br /> 120%<br /> 99,66<br /> 98,63<br /> 92,74<br /> <br /> 80%<br /> 103,71<br /> 86,04<br /> 92,83<br /> <br /> Thêm chuẩn pyrogallol<br /> 100%<br /> 102,24<br /> 89,28<br /> 92,79<br /> <br /> 120%<br /> 93,78<br /> 91,91<br /> 91,37<br /> <br /> 195<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Khoảng tin cậy 95% (n=5)<br /> <br /> Khổ qua<br /> Ớt chuông<br /> <br /> 80%<br /> 108,51<br /> 101,10<br /> <br /> Thêm chuẩn gallic<br /> 100%<br /> 108,50<br /> 98,11<br /> <br /> 120%<br /> 108,99<br /> 95,84<br /> <br /> 80%<br /> 103,72<br /> 94,74<br /> <br /> Thêm chuẩn pyrogallol<br /> 100%<br /> 120%<br /> 106,45<br /> 102,14<br /> 89,27<br /> 90,33<br /> <br /> Tỉ lệ phục hồi nằm trong giới hạn cho phép 85% - 110%.<br /> Bảng 5: Kết quả khảo sát độ lặp lại<br /> RSD% (n=5)<br /> <br /> Cà chua<br /> Cà rốt<br /> Cần tây<br /> Khổ qua<br /> Ớt chuông<br /> <br /> 80%<br /> 1,2<br /> 4,1<br /> 0,7<br /> 2,1<br /> 2,4<br /> <br /> Thêm chuẩn gallic<br /> 100%<br /> 2,6<br /> 2,4<br /> 2,2<br /> 0,6<br /> 3,1<br /> <br /> 120%<br /> 2,5<br /> 3,1<br /> 3,2<br /> 1,3<br /> 3,9<br /> <br /> 80%<br /> 2,2<br /> 2,9<br /> 2,5<br /> 3,7<br /> 2,9<br /> <br /> Thêm chuẩn pyrogallol<br /> 100%<br /> 120%<br /> 3,5<br /> 2,8<br /> 3,9<br /> 3,4<br /> 3,9<br /> 3,5<br /> 3,2<br /> 4,2<br /> 3,2<br /> 2,9<br /> <br /> Độ lặp lại nằm trong giới hạn cho phép ≤ 4%.<br /> Bảng 6: Kết quả độ lặp lại cùng ngày và khác ngày<br /> Hợp chất phenol toàn phần /100 g nguyên liệu tươi tính theo mg chuẩn gallic và pyrogallon (khoảng tin cậy 95%)<br /> Chuẩn gallic<br /> Chuẩn pyrogallol<br /> Nguyên liệu<br /> Cùng ngày<br /> Khác ngày<br /> Cùng ngày<br /> Khác ngày<br /> Cà chua<br /> 27,99 (1,0%)<br /> 25,15 (2,4%)<br /> 17,61 (1,0%)<br /> 15,87 (2,4%)<br /> Cà rốt<br /> 21,07 (2,8%)<br /> 22,58 (3,1%)<br /> 13,26 (2,8%)<br /> 14,25 (3,1%)<br /> Cần tây<br /> 9,41 (2,1%)<br /> 9,27 (2,0%)<br /> 6,00 (2,1%)<br /> 5,87 (2,0%)<br /> Khổ qua<br /> 22,58 (2,5%)<br /> 23,71 (1,1%)<br /> 14,21(2,5%)<br /> 14,96 (1,1%)<br /> Ớt chuông<br /> 56,51 (1,6%)<br /> 51,99 (2,7%)<br /> 35,56 (1,6%)<br /> 32,81 (2,7%)<br /> <br /> Phương pháp có độ lặp lại trên nguyên liệu<br /> tốt % RSD ≤ 4%.<br /> <br /> Quy trình định lượng<br /> - Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 25<br /> mg acid gallic hoặc 25 mg pyrogallol vào bình<br /> định mức 50 ml. Thêm 30 ml dung dịch cồn 50%,<br /> siêu âm để tan hoàn toàn. Để nguội, thêm dung<br /> dịch cồn 50% đến vạch. Đảo đều, được dung<br /> dịch có nồng độ 0,5 mg/ml (dung dịch S), bảo<br /> quản tránh ánh sáng.<br /> <br /> - Dung dịch thử: Cân 15 g (cà chua, cà rốt,<br /> khổ qua); 30 g cần tây vào cốc thủy tinh 100 ml,<br /> thêm cồn 50% (lần 1-10 ml, lần 2-5 ml) và 5 g ớt<br /> chuông vào cốc thủy tinh 100 ml, thêm cồn 50%<br /> (lần 1-10 ml, lần 2-10 ml). Siêu âm trong 5 phút ở<br /> 40 oC với cường độ 100%. Gạn dịch chiết. Gộp tất<br /> cả dịch chiết, để nguội, lọc qua giấy lọc, loại bỏ 2<br /> ml dịch lọc đầu, được các dung dịch thử (dung<br /> dịch T), bảo quản tránh ánh sáng.<br /> <br /> Bảng 7: Bảng thực hiện phản ứng xác định hợp chất phenol toàn phần<br /> Dung dịch thêm vào (ml)<br /> <br /> N Mẫu chuẩn<br /> <br /> Mẫu thử<br /> <br /> Mẫu trắng<br /> <br /> Dung dịch ethanol 50%<br /> 0<br /> 0<br /> Dung dịch S<br /> 1,0<br /> 0<br /> Dung dịch T<br /> 0<br /> 1,0<br /> TT F-C 1/10<br /> 5,0<br /> 5,0<br /> Lắc rung để đồng nhất hỗn hợp. Để yên 5 phút trong tối ở nhiệt độ phòng.<br /> Dung dịch Na2CO3 7,5 %<br /> Điền đầy đến vạch 10 ml. Đảo đều.<br /> Lắc rung để đồng nhất hỗn hợp. Để yên trong tối 30 phút ở nhiệt độ phòng.<br /> Đo hấp thu quang ở 750 nm.<br /> <br /> Công thức tính lượng hợp chất phenol toàn<br /> <br /> 196<br /> <br /> 1,0<br /> 0<br /> 0<br /> 5,0<br /> <br /> phần/ 100 g nguyên liệu tươi theo chuẩn gallic<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> hay pyrogallol (mg):<br /> <br /> X=<br /> <br /> At × mS × CS × f ×100<br /> AS × mt<br /> <br /> At, AS: độ hấp thu quang của thử và chuẩn,<br /> mS:khối lượng chuẩn (mg), CS: hàm lượng<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> chuẩn tinh khiết (số mg chuẩn tinh khiết có<br /> trong 100 mg nguyên liệu). mt: khối lượng thử<br /> (g), f: hệ số pha loãng (f = 0,03 đối với cà chua,<br /> khổ qua và cần tây; f = 0,04 đối với nguyên liệu<br /> cà rốt và ớt chuông).<br /> <br /> Kết quả xác định hợp chất phenol toàn phần trong nguyên liệu<br /> Bảng 8: Kết quả xác định hợp chất phenol toàn phần (n = 6)<br /> Nguyên liệu<br /> Cà chua<br /> Cà rốt<br /> <br /> Hợp chất phenol toàn phần/100 g nguyên liệu tươi được tính theo mg chuẩn<br /> Chuẩn gallic<br /> Chuẩn pyrogallol<br /> 28,29 ± 0,30 (1,0%)<br /> <br /> 17,70 ± 0,19 (1,0%)<br /> <br /> 21,29 ± 0,62 (2,8%)<br /> <br /> 13,32 ± 0,39 (2,8%)<br /> <br /> Cần tây<br /> <br /> 9,41 ± 0,21 (2,1%)<br /> <br /> 6,00 ± 0,14 (2,1%)<br /> <br /> Khổ qua<br /> Ớt chuông<br /> <br /> 22,83 ± 0,60 (2,5%)<br /> 57,12 ± 0,93 (1,6%)<br /> <br /> 14,28 ± 0,38 (2,5%)<br /> 35,73 ± 0,68 (1,6%)<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Đề tài đã khảo sát được sơ bộ thành phần<br /> hóa học trong các dược liệu cà chua, cà rốt, cần<br /> tây, khổ qua và ớt chuông. Kết quả khảo sát cho<br /> thấy. Có nhiều carotenoid trong cà chua và cà<br /> rốt. Trong dịch chiết nước và dịch chiết cồn có sự<br /> hiện diện của hợp chất flavonoid và hợp chất<br /> polyphenol. Trong dịch chiết cồn ngoài sự hiện<br /> diện của proanthocyanidin còn có flavonoid.<br /> - Đã khảo sát được điều kiện tối ưu để<br /> chiết xuất và xây dựng được phương pháp xác<br /> định hàm lượng hợp chất phenol toàn phần,<br /> trong cà chua, cà rốt, cần tây, khổ qua và ớt<br /> chuông. Kết quả thẩm định qui trình cho thấy<br /> phương pháp định lượng có độ lặp lại và đô<br /> chính xác cao; tỉ lệ phục hồi nằm trong giới<br /> hạn cho phép 85% - 110%.<br /> Áp dụng qui trình đã thẩm định xác định<br /> hàm lượng hợp chất polyphenol toàn phần,<br /> trong cà chua, cà rốt, cần tây, khổ qua và ớt<br /> chuông.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> Doss A, Pugalenthi M, Rajendrakumaran D and Vadivel V<br /> (2010), Phenols, flavonoids and antioxidant activity of under-<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 3.<br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> 6.<br /> <br /> 7.<br /> <br /> 8.<br /> 9.<br /> <br /> 10.<br /> <br /> utilized legume seeds, Asian J.Exp. SCI 1(3): 700-705.<br /> AOAC Guidelines for Single Laboratory (2002), Validation of<br /> Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals,<br /> pp. 13-22.<br /> Bộ môn Dược Liệu (2008), Phương pháp nghiên cứu dược<br /> liệu, Đại học Y Dược TP. HCM, 26-42.<br /> Ermer J, McB. Miller JH (2004), Method Validation in<br /> Pharmaceutical Analysis, A Guide to best Practice, WileyVCH. p. 418<br /> Antolovich M et al (2002), “Methods for testing antioxidant<br /> activity”, Analyst 127 (1): 183-198.<br /> Turkmen T et al. (2007),“Effect of extraction conditions on<br /> measured Total Polyphenol contents and Antioxidant and<br /> antibacterial activities of Black tea”, Molecules 12: 484-496.<br /> Pham Thanh Quan, Tong Van Hang, Nguyen Hai Ha,<br /> Nguyen Xuan De, Truong Ngoc Tuyen (2006), “Microwaveassisted extraction of polyphenols from fresh tea shoot”, tạp<br /> chí phát triển KH&CN 9:70.<br /> Burda S and Oleszek W (2001), “Antioxidant and antiradical<br /> activities of flavonoids”, J Agric Food Chem 49 (6):2774-2779.<br /> Trương Văn Thiện (2008), Tổng hợp và khảo sát tác dụng<br /> chống oxy hoá in vitro của các dẫn chất Chrysin, luận văn<br /> Dược sỹ đại học, Khoa Dược - Đại học Y Dược Tp. HCM.<br /> Zhang Z, Jin J, Shi L (2008), Antioxidant activities of the<br /> derivaties of polysaccharide extracted from a Chinese medical<br /> herb (Ramulus mori), Food Sci.Technol. 14: 160-168.<br /> <br /> Ngày nhận bài báo:<br /> <br /> 10.12.2012<br /> <br /> Ngày phản biện nhận xét bài báo: 24.12.2013<br /> Ngày bài báo được đăng:<br /> <br /> 10.03.2014<br /> <br /> 197<br /> <br />