Bước đầu nghiên cứu sử dụng tế bào gốc trung mô tạo các mảnh ghép mô công nghệ ứng dụng trong y học tái tạo

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TẠO<br /> CÁC MẢNH GHÉP MÔ CÔNG NGHỆ ỨNG DỤNG TRONG Y HỌC TÁI TẠO<br /> Huỳnh Duy Thảo*, Trần Lê Bảo Hà**, Võ Quốc Vũ*, Trần Công Toại*<br /> <br /> TÓMTẮT<br /> Đặt vấn đề: Nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc hiện nay đang rất phát triển và đạt được nhiều kết quả khả<br /> quan, từ các nghiên cứu khoa học cơ bản cho đến các ứng dụng lâm sàng trong y học. Nhiều loại tế bào gốc trong<br /> cơ thể đã được nghiên cứu và triển khai ứng dụng. Tuy nhiên, tế bào gốc trung mô thu nhận từ mô trưởng thành<br /> trong cơ thể cho thấy có những ưu điểm nổi bật. Sự kết hợp của tế bào gốc và vật liệu sinh học để tạo ra mô công<br /> nghệ nhằm thay thế và tái tạo mô trong cơ thể là xu hướng phát triển rất nhanh và mạnh trong thời gian gần đây.<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Tạo ra các mảnh ghép từ sự kết hợp của tế bào gốc trung mô với các loại vật liệu như<br /> san hô, Gelatin-Alginate và fibrin để tạo ra các mảnh ghép trong điều kiện in vitro.<br /> Phương pháp nghiên cứu: Thí nghiệm thực nghiệm mô tả. Mô mỡ người được thu nhận và sử dụng để<br /> phân lập tế bào gốc trung mô. Sau đó, tế bào gốc trung mô được sử dụng để tạo mảnh ghép bằng cách kết hợp với<br /> các loại vật liệu sinh học.<br /> Kết quả: Tế bào gốc trung mô thỏa mãn theo tiêu chí của ISCT. Các mảnh ghép được tạo ra từ tế bào gốc<br /> trung mô với khung san hô, khung Gelatin-Alginate và Fibrin.<br /> Kết luận: Nhóm nghiên cứu bước đầu đã tạo ra được các mảnh ghép dựa trên công nghê mô, nghiên cứu<br /> này chỉ là bước khởi đầu để triển khai những nghiên cứu tiếp theo.<br /> Từ khóa: Tế bào gốc trung mô, san hô biển, gelatin-alginate, fibrin, mảnh ghép.<br /> ABSTRACT<br /> PRELIMINARY STUDIES USING MESENCHYMAL STEM CELLS<br /> TO CREATE TISSUE ENGINEERED GRAFTS FOR APPLICATIONS<br /> IN REGENERATIVE MEDICINE<br /> Huynh Duy Thao, Tran Le Bao Ha, Vo Quoc Vu, Tran Cong Toai<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 5 - 2016: 5 - 13<br /> <br /> Background: Research and application of stem cells is now very developed and achieved many positive<br /> results, from basic research to clinical applications. Many types of stem cells in the body have been studied and<br /> applied in clinical practice. However, the mesenchymal stem cells derived from adult tissues in the body show that<br /> there are outstanding advantages. The combination of stem cells and biomaterials to create new kinds of tissue<br /> engineering to replace and regenerate tissues in the human body has developed very quickly and effectively in<br /> recent times.<br /> Objectives: Generate different types of tissue grafts from a combination of mesenchymal stem cells with<br /> biomaterials like sea coral, Gelatin-Alginate and fibrin in vitro.<br /> Methods: The experiment was performed as described experiments. Human adipose tissue is collected and<br /> used to isolate mesenchymal stem cells. Then, mesenchymal stem cells are used to create tissue graft by combining<br /> with types of biomaterials.<br /> <br /> * Bộ môn Mô – Phôi – Di truyền, ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch<br /> ** Bộ môn Sinh lý Động vật, ĐH Khoa học Tự nhiên TP.HCM<br /> Tác giả liên lạc: TS Huỳnh Duy Thảo ĐT: 01693891481 Email: thao_huynhduy@pnt.edu.vn<br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016 5<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016<br /> <br /> Results: Mesenchymal stem cells are identified by the standards of ISCT. The tissue graft made from<br /> mesenchymal stem cells with other types of substrates such as coral, Gelatin-Alginate and fibrin.<br /> Conclusion: Our research team has succeeded initially to create tissue graft based on tissue engineering<br /> technology, this research is only the first step to implement the follow-up study.<br /> Keywords: Mesenchymal stem cell, sea coral, gelatin-alginate, fibrin, graft tissue.<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> Nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc hiện nay Đối tượng nghiên cứu<br /> đang rất phát triển và đi vào nhiều lĩnh vực Mô mỡ người được thu nhận từ việc chọc<br /> nghiên cứu, từ các nghiên cứu khoa học cơ bản hút mỡ trong các quy trình phẫu thuật thẩm mỹ.<br /> cho đến các ứng dụng lâm sàng trong y học. Mẫu mô được thu nhận từ các người hiến khỏe<br /> Nhiều loại tế bào gốc trong cơ thể đã được mạnh, đồng ý hiến mô để tiến hành nghiên cứu<br /> nghiên cứu và triển khai ứng dụng. Tuy nhiên, và có các xét nghiệm âm tính với HIV, HBV,<br /> tế bào gốc trung mô (Mesenchymal Stem Cells – HCV và VDRL.<br /> MSC) thu nhận từ mô trưởng thành như tủy<br /> San hô tự nhiên (Porites lutea) được thu nhận<br /> xương, mô liên kết, tuyến tiêu hóa … hoặc các<br /> từ viện Hải Dương Học Nha Trang.<br /> phần phụ của thai như máu cuống rốn, cuống<br /> rốn(15) là các tế bào gốc đa tiềm năng, có những Máu ngoại vi dùng để tạo giá thể fibrin từ<br /> ưu điểm nổi bật và hiệu quả trong lĩnh vực công huyết thanh người.<br /> nghệ mô(15,8). Gelatin và Alginate được thu nhận từ nguồn<br /> Do đó, MSC cần phải có một quy trình thu gốc sinh học để tạo giá thể Gelatin-Alginate (G-<br /> nhận phù hợp để nhân khốiin vitro trước khi sử A).<br /> dụng với số lượng lớn tế bào(7) . Phương pháp nghiên cứu<br /> Mô ghép nói riêng và vật liệu cấy ghép nói Thí nghiệm được thiết kế là phương pháp<br /> chung ngày nay được sử dụng khá phổ biến thực nghiệm mô tả.<br /> trong y học. Đối với những bệnh lý dẫn đến tổn Thu nhận mô mỡ<br /> thương mô, khuyết mô thì việc điều trị có thể sử<br /> Mẫu mô được thu nhận trong điều kiện vô<br /> dụng mô ghép tự thân, mô ghép đồng loại, mô<br /> trùng của phòng mổ. Sau đó, mẫu được vận<br /> ghép dị loại, các loại vật liệu ghép sinh học … để<br /> chuyển nhanh chóng về phòng thí nghiệm.<br /> thay thế. Bên cạnh đó, để cải thiện hiệu quả cho<br /> các vật liệu ghép các nhà nghiên cứu tìm cách Phân lập và nuôi cấy tế bào gốc từ mô mỡ<br /> đưa các yếu tố sinh học vào mô ghép như tế bào Mô mỡ được cho vào các tube 50ml khoảng<br /> và các yếu tố hoạt tính sinh học(5,11,9)… Trong đó, 20-30ml dịch mô mỡ cho mỗi tube. Sau đó bổ<br /> vai trò của tế bào gốc trung mô hiện tại rất được sung hỗn hợp enzyme Dispase-Collagenase vào<br /> quan tâm và triển khai nghiên cứu để tạo ra các các tube với tỉ lệ (1 mẫu: 2 enzyme, v/v), mẫu mô<br /> mô ghép công nghệ. được ủ trong enzyme ở nhiệt độ 370C, trong thời<br /> Do đó nhóm nghiên cứu của chúng tôi bước gian 90 phút. Sau đó, ly tâm thu nhận phần cặn<br /> đầu thử nghiệm tạo ra các loại mảnh ghép khác lắng ở đáy chai. Bổ sung môi trường nuôi cơ bản<br /> nhau từ sự kết hợp của tế bào gốc trung mô và vào tube và huyền phù phần cặn lắng ở đáy chai.<br /> các loại khung nâng đỡ sinh học khác nhau để Lọc phần dịch tế bào qua phễu lọc tế bào (cell<br /> đánh giá tiềm năng của các loại mảnh ghép này strainer, BD FalconTM) với đường kính 70 μM.<br /> trong y học tái tạo. Sau đó thu phần cặn lắng ở đáy chai và bổ<br /> sung dung dịch ly giải hồng cầu để loại bỏ hồng<br /> cầu còn lẫn tạp. Sau đó, quay li tâm thu phần cặn<br /> <br /> <br /> 6 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> lắng, bổ sung môi trường nuôi và đếm mật độ tế 10%) để nhuộm Giemsa và H&E nhằm đánh giá<br /> bào với dung dịch Trypan blue bằng buồng đếm cấu trúc và sự phát triển của tế bào bên trong<br /> Neubauer. Tế bào được nuôi trong chai nuôi T- mảnh ghép.<br /> 25 cm2 (Corning) và ủ trong tủ nuôi ở nhiệt độ Để xác định các nguyên bào xương (thông<br /> 370C và 5% CO2. Môi trường được thay mới 3 qua sự hoạt động của enzyme alkaline<br /> ngày/ 1lần. Mẫu sẽ được cấy chuyền trong phosphatase - AP) biệt hóa trên khung san hô từ<br /> khoảng thời gian từ 7 – 14 ngày từ lúc bắt đầu các MSC, tiến hành nhuộm mảnh ghép với thuốc<br /> nuôi cấy(12,8). nhuộm Fast Red violet LB salt (sigma) để đánh<br /> Định danh tế bào gốc trung mô từ mô mỡ giá sự biểu hiện của enzyme này. Đây là một<br /> Để định danh các tế bào gốc trung mô trong những marker được sử dụng phổ biến để<br /> (Mesenchymal Stem Cell – MSC) thu nhận từ mô định danh cho các nguyên bào xương.<br /> mỡ, chúng tôi đánh giá theo tiêu chí của Hội liệu Tạo mô ghép hướng đến tái tạo mô mềm từ giá<br /> pháp Tế bào Quốc tế (International Society for thể G-4A, Fibrin và MSC<br /> Cellular Therapy – ISCT)(11). Chúng tôi sử dụng MSC được thu nhận và chuyển trực tiếp lên<br /> quy trình nghiên cứu đã được thiết lập để phân 2 loại giá thể là G-A và Fibrin để tạo ra mảnh<br /> lập và định danh MSC(13). ghép mô mềm. Giá thể G-A và fibrin được tạo ra<br /> Tạo mảnh ghép từ sự kết hợp của MSC với theo quy trình nghiên cứu của chúng tôi đã được<br /> các loại vật liệu sinh học thiết lập(13,17,7). Trong nghiên cứu này chúng tôi<br /> định hướng phát triển mô ghép thành mô tạo<br /> Tạo mô ghép hướng đến tái tạo mô cứng từ san<br /> mô mở để có thể tái tạo lại các khuyết hỗng mô<br /> hô và MSC<br /> mềm trên lâm sàng hoặc trong phẫu thuật thẩm<br /> MSC sau khi được nhân khối để làm giàu số mỹ, do đó tế bào phát triển trên 2 loại giá thể này<br /> lượng sẽ được thu nhận bằng dung dịch sẽ được nuôi trong môi trường cảm ứng tạo tế<br /> Trypsin-EDTA (Gibco). Dịch tế bào sau khi tách bào mỡ gồm DMEM/F12, FBS (10%),<br /> sẽ được chuyển lên các giá thể san hô bằng Gentamycine (50μg/ml), HEPES (15 mm),<br /> phương pháp quay ly tâm 1000 vòng/phút trong NaHCO3 (14nM), Biotin (33μm), D-Panto (17<br /> 1 phút (lặp lại 5 lần). Trong nghiên cứu này, μm), Human insulin (66nM), Triiodo-L-<br /> chúng tôi định hướng phát triển mô ghép thành thyronine (1nM), Humantransferrin (10μg/ml),<br /> mô tạo xương. Do đó, mảnh ghép sẽ được nuôi Isobutyl-methylxanthin (0,5 mM),<br /> cấy trong môi trường cảm ứng tạo xương gồm Hydrocortisone (100 nM) và Dexamethasone (0,1<br /> DMEM/F12, 10% FBS, 10-7M Dexamethasone, nM)(10,12,14).<br /> 10mM/ml -Glycerol phosphate, 50ng/ml<br /> Mảnh ghép được theo dõi dưới kính hiển<br /> Ascorbic acid, 10ng/ml FGF9, 10-7M vitamin D2<br /> vi đảo ngược và vào ngày thứ 21 sẽ được thu<br /> và kháng sinh(1,18,19).<br /> nhận và đánh giá bằng các phương pháp<br /> Mảnh ghép sẽ được theo dõi dưới kính nhuộm mô học (H&E) và quan sát dưới kính<br /> hiển vi đảo ngược và vào ngày thứ 21 sẽ được hiển vi điện tử quét.<br /> thu nhận và đánh giá bằng các phương pháp<br /> Ngoài ra, tế bào cũng được nhuộm Oil Red O<br /> nhuộm mô học và quan sát dưới kính hiển vi<br /> để đánh giá khả năng biệt hóa của MSC thành tế<br /> điện tử quét.<br /> bào mỡ trên hai loại khung này.<br /> Ngoài ra, mảnh ghép sẽ được xử lý trong<br /> dung dịch cố định (Neutral Buffer Formalin<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016 7<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016<br /> <br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Phân lập và định danh MSC từ mô mỡ<br /> A 10X B 10X C 10X D 10X<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Mẫu chứng Alkaline phosphatase Oil red O staining Alcian blue staining<br /> staining<br /> Hình 1.Tiềm năng biệt hóa của MSC.<br /> (A) Tế bào bám dính, tăng trưởng trong chai cấy tạo thành lớp đơn tế bào (mẫu chứng).<br /> (B) MSC cảm ứng biệt hóa thành nguyên bào xương (được nhuộm với marker alkaline phosphatase).<br /> (C) MSC cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ (được nhuộm Oil Red O).<br /> (D). MSC cảm ứng biệt hóa thành nguyên bào sụn (được nhuộm với alcian blue). Kết quả cho thấy các tế bào gốc phân lập từ<br /> mô mỡ thỏa mãn tiêu chí biệt hóa theo ISCT.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 2. Kết quả phân tích marker dùng để định danh MSC.<br /> Các tế bào sau khi phân lập từ mô mỡ bắt hình thái của nguyên bào sợi. Những tế bào này<br /> đầu xuất hiện và bám dính sau hai ngày nuôi cấy bám dính trên đáy chai nuôi. Sau một tuần nuôi<br /> trong môi trường nuôi cơ bản. Các tế bào bám cấy, các tế bào này tăng trưởng và phát triển<br /> dính riêng lẻ, có hình dạng thon, dài giống với mạnh, tạo thành các cụm trên chai nuôi. Sau 14<br /> <br /> <br /> <br /> 8 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> ngày nuôi cấy, các tế bào này đạt đến mật độ nhuộm và trong bào tương xuất hiện màu hồng,<br /> phù hợp để cấy chuyền (chiếm khoảng 75-80% do sự hoạt động của enzyme alkaline<br /> diện tích bề mặt chai nuôi). phosphatase. Đây là một trong những enzyme<br /> Theo tiêu chí của ISCT, các MSC có tiềm được sử dụng phổ biến để định danh cho các<br /> năng biệt hóa được thành nguyên bào xương, nguyên bào xương.<br /> nguyên bào sụn và tế bào mỡ in vitro. Kết quả Kết quả được mô tả trong hình 3.<br /> biệt hóa MSC thành các tế bào trên được mô tả Tạo mô ghép hướng đến tái tạo mô mềm từ<br /> trong hình 1.<br /> giá thể G-A, Fibrin và MSC<br /> Ngoài ra, MSC cũng phải biểu hiện được các<br /> Tạo mô ghép từ MSC và giá thể fibrin<br /> marker đặc hiệu là CD73, CD90 và CD105 cũng<br /> Các MSC sau khi biệt hóa thành tế bào mỡ<br /> như không biểu hiện một số marker âm tính. Kết<br /> trên giá thể fibrin được xử lý và nhuộm H&E<br /> quả được đánh giá bằng Flow Cytometry. Kết<br /> cũng như quan sát dưới kính hiển vi điện tử<br /> quả cho trong hình 2.<br /> quét để đánh giá kết quả. Tế bào mở được xác<br /> Kết quả cho thấy một quần thể tế bào có kiểu<br /> định bằng cách nhuộm với thuốc nhuộm Oil Red<br /> hình: CD45NegCD73+CD90+CD105+thỏa mãn tiêu<br /> O. Kết quả được mô tả trong hình 4:<br /> chuẩn của ISCT.<br /> Ngoài ra mảnh ghép mô mềm cũng được<br /> Như vậy, với kết quả khảo sát khả năng bám<br /> đánh giá cấu trúc mô học để xem sự phát triển<br /> dính, tiềm năng biệt hóa và sự biểu hiện các<br /> và phân bố của tế bào bên trong mảnh ghép<br /> marker bề mặt cho thấy quần thể tế bào nuôi cấy<br /> cũng như khảo sát đặc tính bề mặt. Kết quả mô<br /> chính là các tế bào gốc trung mô. Đây là nguồn tế<br /> tả trong hình 5.<br /> bào gốc rất quan trọng và đầy tiềm năng cho các<br /> Các MSC sau khi biệt hóa thành tế bào mỡ<br /> ứng dụng cơ bản cũng như trên lâm sàng.<br /> trên giá thể G-A được xử lý và nhuộm H&E<br /> Tạo mảnh ghép từ sự kết hợp của MSC với cũng như quan sát dưới kính hiển vi điện tử<br /> các loại vật liệu sinh học quét để đánh giá kết quả. Tế bào mở được xác<br /> Tạo mô ghép hướng đến tái tạo mô cứng từ san định bằng cách nhuộm với thuốc nhuộm Oil<br /> hô và MSC Red O. Kết quả được mô tả trong hình 6.<br /> Mẫu san hô có mang các MSC sau khi biệt Như vậy, với các loại khung nâng đỡ phù<br /> hóa thành nguyên bào xương được xử lý và hợp như G-A và Fibrin có thể sử dụng để nuôi<br /> nhuộm Giemsa, H&E cũng như quan sát dưới cấy các MSC và cảm ứng phát triển trên khung<br /> kính hiển vi điện tử quét để đánh giá kết quả. để tạo ra được các mảnh ghép công nghệ theo xu<br /> Bên cạnh đó, chúng tôi tiến hành nhuộm hướng tạo ra các mô mềm. Đây là một trong<br /> khối san hô với thuốc nhuộm Fast Red violet LB những mảnh ghép có thể đáp ứng nhu cầu trong<br /> salt để đánh giá khả năng MSC biệt hóa thành các phẫu thuật làm đầy các khuyết hổng mô<br /> nguyên bào xương trên khung san hô, nếu các mềm hoặc trong các phẫu thuật thẩm mỹ dùng<br /> MSC biệt hóa được thành các nguyên bào xương để làm đầy mô mềm.<br /> thì các tế bào này sẽ phản ứng lại với thuốc<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016 9<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> C D<br /> <br /> <br /> <br /> Hình 3. Đánh giá khả năng bám dính, phát triển và biệt hóa của các MSC thành nguyên bào xương trên giá thể<br /> san hô. (A). Mẫu san hô được được chụp SEM ở kích thước 200µm, không nuôi tế bào. (B) Mẫu san hô chụp SEM (100µm)<br /> có mang các MSC đã biệt hóa thành nguyên bào xương, các MSC tạo lớp và phát triển bên trong cũng như phía ngoài các hốc<br /> san hô. (C). Nhuộm H&E, tế bào phát triển phân bố bên trong khối san hô. (D). Nhuộm AP, các tế bào dương tính với thuốc<br /> nhuộm chứng tỏ biểu hiện được en zyme AP. Điều này cho thấy các MSC đã biệt hóa được thành nguyên bào xương trên giá<br /> thể san hô.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 10 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> C D<br /> <br /> Hình 4. Kết quả nuôi cấy và cảm ứng biệt hóa MSC thành tế bào tạo mỡ trên khung fibrin. (A). Tế bào cảm ứng<br /> thành tế bào tạo mỡ in vitro, quan sát dưới kính hiển vi đảo ngược (20X). (B). Tế bào được nhuộm Oil red O trực tiếp trên<br /> khung fibrin (4X). (C) và (D). Tế bào được nhuộm Oil red O lần lượt ở vật kính (20X) và (40X).<br /> <br /> C<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> Hình 5. Kết quả tạo mảnh ghép mô mềm từ MSC và khung fibrin. (A). Mẫu tế bào phát triển trong khung fibrin in<br /> vitro sau 7 ngày nuôi (20X). (B). MSC được cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ phát triển trên khung fibrin được nhuộm<br /> H&E tại ngày thứ 7 (20X), kết quả cho thấy tế bào phát triển và phân bố khá đồng đều trong khung fibrin, ngoài ra do MSC<br /> cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ nên bào tương tế bào khá rộng do tích trữ mỡ khi làm mô học để lại nhiều khoảng trống.<br /> (C). Kết quả chụp SEM đánh giá sự bám dính của tế bào trên khung fibrin. Kết quả quan sát cho thấy tế bào bám dính trên<br /> mạng lưới fibrin khá chặt.<br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016 11<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016<br /> <br /> <br /> Tạo mô ghép từ MSC và giá thể fibrin<br /> C<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> <br /> Hình 6. Kết quả tạo mảnh ghép mô mềm từ MSC và khung G-A. (A). Mẫu tế bào phát triển trong khung G-A in vitro<br /> sau 7 ngày nuôi (20X). Tế bào được nhuộm Oil Red O để đánh giá sự biệt hóa của MSC thành tế bào mỡ trực tiếp trên khung<br /> G-A, kết quả cho thấy có sự hiện diện của tế bào mỡ trong khung fibrin. (B). MSC được cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ<br /> phát triển trên khung G-A được nhuộm H&E tại ngày thứ 7 (40X), kết quả cho thấy MSC cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ<br /> với bào tương tế bào tích trữ giọt mỡ khá nhiều. (C). Kết quả chụp SEM đánh giá sự bám dính của tế bào trên khung fibrin.<br /> Kết quả quan sát cho thấy tế bào bám dính trên mạng lưới G-A khá tốt.<br /> KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1. Chen F et al (2007), Segmental bone tissue engineering by<br /> Với quần thể tế bào gốc thu nhận từ mô mỡ<br /> seeding osteoblast precursor cells into titaniummesh-coral<br /> đã phân lập và nuôi cấy,chúng tôi đã đánh giá composites scaffolds, Journal of Oral and Maxillofacial Surgery,<br /> quần thể tế bào này là các tế bào gốc trung mô 36: 822-827.<br /> 2. Chen F, S Chen, K Tao, X Feng, Y Liu, D Lei, T Mao.(2004).<br /> theo các tiêu chí quốc tế (ISCT). Marrow derived osteoblasts seeded into porous natural coral<br /> Các MSC thu từ mô mỡ có thể tiến hành nuôi to prefabricate a vascularized bone graft in the shape of<br /> human mandibular ramus: experimental study in rabbits.<br /> cấy trên các loại giá thể khác nhau. Chúng tôi có Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, 42:532-537.<br /> thể tạo ra được các mảnh ghép hướng đến phát 3. Chen F, Tianqiu M, Kai T, Shujun C, Guicong D,<br /> Xiaoming.(2002). Bone graft in the shape of Human<br /> triển thành mô cứng (mô xương) cũng như mô<br /> mandibular condyle reconstruction via seeding marrow-<br /> mềm (mô mỡ). Đây là một trong những bước derived osteoblast into porous coral in a nude mice model. J<br /> nghiên cứu đầu tiên trong điều kiện in vitro để Oral Maxillofac Surg, 60:1155-1159.<br /> 4. Coleman SR (2006). Structural fat grafting: more than a<br /> nhóm nghiên cứu tiếp tục đánh giá in vivo trên permanent filler. Plast Reconstr Surg. 118:108S-120S.<br /> các mô hình động vật thực nghiệm. Đây là một 5. Gregory CA (2008), Mesenchymal stem cells: from culture to<br /> trong những hướng nghiên cứu theo xu hướng clinic, Stem Cell Repair and Regeneration, Imperial College<br /> Press, Singapore, 2: 21-45.<br /> phát triển của công nghệ mô trên thế giới với 6. Holmes RE (1979), Bone regenaration within a coralline<br /> mục tiêu là tạo ra được các mảnh ghép công hydroxyapatite implant, Plastic and Reconstructive Surgery,<br /> nghệ mô để ứng dụng cụ thể vào trong lĩnh vực 63:626-633.<br /> 7. Huỳnh Duy Thảo (2015), Bước đầu đánh giá hiệu quả keo dán<br /> y học tái tạo nhằm làm đầy các trường hợp fibrin tự thân điều trị phẫu thuật mộng thịt trong nhãn khoa,<br /> khuyết hổng mô. Tạp chí Y học TP.HCM,<br /> 8. Huỳnh Duy Thảo, Trần Lê Bảo Hà, Lê Thanh Hùng, Võ Quốc<br /> Các nghiên cứu bước đầu cũng đạt được Vũ, Hoàng Kc Hương, Thái Trúc Quỳnh, Trần Công Toại.<br /> nhiều kết quả tích cực sẽ là động lực để nhóm Nghiên cứu quy trình thu nhận tế bào gốc trung mô từ mô mỡ<br /> người hướng đến ứng dụng trong lĩnh vực y học. Y Học<br /> nghiên cứu chúng tôi tiếp tục triển khai những TP.HCM, 17(1): 459-466.<br /> nghiên cứu tiếp theo sau này. 9. Jo A (2009). Comparison neural cell differentiation of human<br /> adipose mesenchymal stem cells derived from young and old<br /> age. Dev Repord. 13:227-237.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 12 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> 10. Katz AJ, Mesenchymal cell culture: Adipose tissue. In: Atala 18. Tran Cong Toai, Huynh Duy Thao, Nguyen Phuong Thao,<br /> A, Lanza R (2002) Method of Tissue Engineering. Academic Ciro Gargiulo and Phan Kim Ngoc, et al (2010). In vitro<br /> Press San Diego. culture and differentiation of osteoblasts from human<br /> 11. Le Blanc DM, K, Mueller, I, Slaper-Cortenbach, I, Marini, F, umbilical cord blood. Cell and Tissue Banking. 11:269-280.<br /> Krause, D, Deans, R, Keating, A, Prockop, D, and Horwitz, E 19. Tran CT, Ciro Gargiulo, Huynh Duy Thao, Huynh Minh<br /> (2006), Minimal criteria for defining multipotent Tuan, Luis Filgueira and D. Michael Strong (2011). Culture<br /> mesenchymal stromal cells, The International Society for and differentiation of osteoblasts on coral scafford from<br /> Cellular Therapy position statement. Cytotherapy, 8(4):315–317 human bone marrow mesenchymal stem cells. Cell and Tissue<br /> 12. Locke M, John Windsor, P. Rod Dunbar (2009), Human Banking. 12:247-261.<br /> adipose-derived stem cell: isolation, characterization and 20. Trần Giao Hòa, Đỗ Thu Hằng.(2002). Bước đầu đánh giá kết<br /> application in surgrey, ANZ Surgrey Journal, 79:235-244. quả lâm sàng việc sử dụng chế phẩm san hô Việt Nam để<br /> 13. Nguyen Htt, Quan Minh To, Thao Duy Huynh, Toai Cong điều trị sang thương trong xương. Tuyển tập cong trình nghiên<br /> Tran, Ha Le Bao Tran (2015), gelatin-alginate sponge: a cứu khoa học Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược TP.HCM, 131-<br /> potential scaffold for adipose tissue engineering, european jour 138.<br /> nal of biomedical and pharmaceutical sciences, 2(7): 48-53 21. Wolter TP, Von Heimburg D, Stoffels I et al (2005).<br /> 14. Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC et al (1999). Multilineage Cryopreservation of mature human adipocytes: In vitro<br /> potential of adult human mesenchymal stem cell. Science; measurement of viability. Ann Plast Surg. 55:408-413.<br /> 284:143-147. 22. Zaffe D (2005). Some considerations on biomaterials and bone.<br /> 15. Sen A et al (2001). Adipogenic potential of human adipose Micron, 36:583–592.<br /> derived stromal cells from multiple donors is heterogenous. J 23. Zuk PA, Zhu M, Ashjian P. et al (2002), Human adipose tissue<br /> Cell biochem. 81:312-319. is a source of multipotent stem cells, Molecular Biological Cell,<br /> 16. Strem BM et al (2005). Multipotential differentiation of 13:4279-4295.<br /> adipose tissue-derived stem cells. The Keio journal of medicine,<br /> 54:132-141.<br /> 17. Thái Trúc Quỳnh, Huỳnh Duy Thảo, Võ Quốc Vũ, Nguyễn Ngày nhận bài báo: 03/08/2016<br /> Khánh Hòa, Lưu Thị Thu Thảo, Đặng Trần Quân, Trần Công<br /> Toại. Nghiên cứu quy trình tạo keo dán từ huyết tương người.<br /> Ngày phản biện nhận xét bài báo: 10/08/2016<br /> Tạp chí Y Học Việt Nam. 2014. Ngày bài báo được đăng: 05/10/2016<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện An Bình năm 2016 13<br />