Khảo sát điều kiện nuôi cấy vi nấm monascus purpureus để thu sinh khối giàu monacolin k

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY VI NẤM MONASCUS PURPUREUS<br /> ĐỂ THU SINH KHỐI GIÀU MONACOLIN K<br /> Vũ Thanh Thảo*, Huỳnh Bái Nhi*, Cao Thị Hồng Gấm*, Trần Cát Đông*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Vi nấm Monascus được sử dụng từ rất lâu trong các thực phẩm truyền thống ở các nước Châu Á<br /> để làm chất màu. Nhiều nghiên cứu cho thấy nấm Monascus tạo ra sản phẩm trao đổi chất có giá trị thương mại<br /> như: chất màu thực phẩm, monacolin K, kháng sinh và chất chống oxy hóa.<br /> Mục tiêu: Khảo sát điều kiện nuôi cấy nấm Monascus pupureus nhằm thu nhận sinh khối giàu monacolin K.<br /> Phương pháp: Tiến hành khảo sát ảnh hưởng của chế độ nhiệt độ và độ ẩm ban đầu trên môi trường nền là<br /> gạo đến hàm lượng monacolin K. Tiếp theo khảo sát chất nền và sau đó tối ưu hóa môi trường nuôi cấy theo<br /> phương pháp Taguchi bằng cách khảo sát các nguồn dinh dưỡng bổ sung bao gồm nguồn carbon (ethanol,<br /> glucose), nguồn nitơ (NH4Cl, bột ngọt (MSG), NaNO3), chất béo (glycerol, dầu đậu nành, dầu oliu) và muối<br /> khoáng (MgSO4, CaCO3, NaCl). Hàm lượng monacolin K trong sinh khối được đánh giá bằng phương pháp sắc<br /> ký lỏng cao áp (HPLC).<br /> Kết quả: Chế độ nhiệt thích hợp là nuôi Monascus purpureus là duy trì ở 30oC trong 2 ngày đầu và ở 26oC<br /> trong 14 ngày sau, độ ẩm thích hợp là 65%. Môi trường tối ưu cho nấm sinh monacolin K cao là môi trường có<br /> chất nền là gạo, bổ sung thêm etanol 0,3%, NH4Cl 0,5%, glycerol 0,5% và NaCl 0,1%.<br /> Kết luận: Đã xác định được điều kiện tối ưu trên môi trường rắn để Monascus purpureus sản xuất<br /> monacolin K với hàm lượng cao hơn gấp 3 lần so với phương pháp nuôi cấy truyền thống.<br /> Từ khóa: Monascus, monacolin K, lên men rắn, sắc ký lỏng cao áp.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> INVESTIGATION OF MONASCUS PURPUREUS CULTURE CONDITIONS<br /> FOR PRODUCING MONACOLIN K RICH BIOMASS<br /> Vu Thanh Thao, Huynh Bai Nhi, Cao Thi Hong Gam, Tran Cat Dong<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 195 - 201<br /> Background: Monascus has been used long time ago in traditional food products in Asia as food colouring<br /> agent. Many studies have shown that Monascus produce commercially valuable metabolites including food<br /> colorants, cholesterol-lowering agents, antibiotics and antioxidants.<br /> Objectives: To optimize the growth condition of Monascus purpureus for production of monacolin K-rich<br /> biomass.<br /> Methods: Affect of temperature scheme and initial moisture on production of monacolin K were<br /> investigated. The basal subtrate and culture conditions including 4 factors carbon, nitrogen, oil and salt sources<br /> were optimized by Taguchi method for the production of monacolin K. The monacolin K level were measuring by<br /> HPLC.<br /> Results: The optimal temperature scheme during solid-state fermentation is 30oC for 2 days and maitained<br /> at 26oC for 14 days. Initial moisture of the solid medium is best around 65%. The optimum culture medium is rice<br /> with the addition of 0.3% ethanol, 0.5% NH4Cl, 0.5% glycerol and 0.1% NaCl.<br /> *Phòng Thí nghiệm Vi sinh Công nghệ Dược, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP.HCM<br /> Tác giả liên lạc: PGS. TS Trần Cát Đông<br /> ĐT: 08. 38295641 – 127<br /> Email: trancdong@gmail.com<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> 195<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Conclusion: The optimized solid-state fermentation conditions were defined. Using optimal culture<br /> conditions in cultivating, the yield of monacolin K in the fermentation process was three times higher than the<br /> traditional conditions.<br /> Keywords: Monascus, monacolin K, solid fermentation, HPLC.<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Monascus hay “nấm gạo đỏ” đã được sử<br /> dụng ở Trung Quốc và các nước Đông Nam Á<br /> từ hàng ngàn năm nay. Monascus được biết đến<br /> với nhiều ứng dụng rộng rãi trong sản xuất màu<br /> thực phẩm tự nhiên, dùng làm thuốc chữa bệnh.<br /> Các nghiên cứu cho thấy rằng tác dụng làm<br /> thuốc của Monascus chủ yếu nhờ các sản phẩm<br /> chuyển hóa thứ cấp của quá trình lên men<br /> Monascus. Trong đó sản phẩm bậc hai được chú<br /> ý đến nhiều nhất là monacolin K (C24H36O5) với<br /> tác dụng ức chế enzym 3-hydroxy3methylglutaryl-coenzym A reductase (HMGCoA reductase), enzym này xúc tác phản ứng<br /> chuyển HMG-CoA thành mevalonat trong quá<br /> trình tổng hợp cholesterol, đặc biệt là các<br /> lipoprotein tỉ trọng thấp gây hại cho cơ thể.<br /> Monacolin K tồn tại ở 2 dạng chính: dạng<br /> hydroxy acid và dạng lacton(3,7). Tỉ lệ dạng acid<br /> và dạng lacton tùy thuộc vào loài Monascus, điều<br /> kiện nuôi cấy và pH khác nhau(7,9). Dạng có hoạt<br /> tính sinh học là dạng hydroxyl acid, còn dạng<br /> lacton khi vào cơ thể sẽ được enzym chuyển hóa<br /> thành dạng hyroxyl acid. Năm 1998, Cục Quản<br /> lý thực phẩm và dược phẩm Mỹ (FDA) cho<br /> phép ứng dụng monacolin K chiết xuất từ<br /> Monascus trong dược phẩm, từ đó các nghiên<br /> cứu về Monascus hướng đến việc nâng cao lượng<br /> monacolin K tạo ra từ chủng nấm này. Mục tiêu<br /> của nghiên cứu này là khảo sát điều kiện nuôi<br /> cấy nấm Monascus purpureus cũng như môi<br /> trường tối ưu để thu sinh khối nấm giàu<br /> monacolin K.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> Hóa chất, dung môi, môi trường<br /> <br /> Hóa chất: NH4Cl, monosodium glutamat (MSG),<br /> NaNO3, glycerol, MgSO4, CaCO3, glucose do<br /> Xilong, Trung Quốc cung cấp.<br /> Chất chuẩn: monacolin K (Sigma).<br /> Môi trường nuôi cấy: PDA (potato dextrose<br /> agar), PDB (potato dextrose broth) do Merck<br /> cung cấp.<br /> Gạo, củ từ tươi: được mua từ siêu thị tại địa<br /> phương.<br /> <br /> Nấm Monascus và nhân giống<br /> Đối tượng nghiên cứu là chủng nấm<br /> Monascus purpureus được phân lập từ gạo đỏ bởi<br /> Phòng thí nghiệm Vi Sinh Công Nghệ Dược,<br /> Khoa Dược, Đại học Y Dược TP.HCM. Chủng<br /> nấm được duy trì trên thạch nghiêng PDA và<br /> được cấy truyền sau 30 ngày.<br /> Nhân giống cấp 1: Cấy nấm từ thạch đĩa PDA<br /> (5x103 bào tử/ml) vào môi trường PDB, lắc 150<br /> vòng/phút, trong 3 ngày.<br /> Chuẩn bị môi trường: Cân 100g gạo, ngâm<br /> trong 9 giờ, cho vào mỗi hộp nuôi cấy, thêm một<br /> ít nước rồi đem hấp tiệt trùng ở 121oC trong 15<br /> phút.<br /> Nuôi nấm tạo sản phẩm thứ cấp: Cấy giống<br /> cấp 1 (107 bào tử/ml) vào các hộp môi trường<br /> khảo sát ở tỷ lệ 10% (v/w).<br /> <br /> Khảo sát ảnh hưởng của độ ẩm<br /> Khảo sát độ ẩm của môi trường nuôi cấy từ<br /> 50, 55, 60, 65, 70, 75%, với môi trường nền là gạo.<br /> Hấp tiệt trùng ở 121oC trong 15 phút. Sau khi<br /> hấp tiến hành điều chỉnh độ ẩm cần khảo sát.<br /> Nuôi nấm ở nhiệt độ 30oC trong 2 ngày, sau đó<br /> duy trì ở 26oC trong 14 ngày. Định lượng<br /> monacolin K từ các mẫu này, chọn độ ẩm cho<br /> lượng monacolin K cao nhất(9).<br /> <br /> Các loại dung môi: etanol, acetonitril, acid<br /> trifloacetic (TFA) do Merck cung cấp.<br /> <br /> 196<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Khảo sát ảnh hưởng của chế độ nhiệt độ<br /> khác nhau<br /> <br /> monacolin K từ các mẫu này, chọn chế độ nhiệt<br /> độ thích hợp nhất(9).<br /> <br /> Khảo sát sự ảnh hưởng của 5 chế độ nhiệt độ<br /> khác nhau đến sự sản sinh chất chuyển hóa của<br /> nấm M. purpureus trên môi trường chất nền là<br /> gạo: (I): Nuôi ở 30oC trong 16 ngày.(II): Nuôi ở<br /> 26oC trong 16 ngày. (III): Nuôi ở 30oC trong 2<br /> ngày, sau đó duy trì ở 26oC trong 14 ngày. (IV):<br /> Nuôi ở 32oC trong 2 ngày, sau đó duy trì ở 26oC<br /> trong 14 ngày. (V): Nuôi ở 28oC trong 2 ngày, sau<br /> đó duy trì ở 26oC trong 14 ngày. Nuôi nấm ở<br /> điều kiện độ ẩm tối ưu đã khảo sát. Định lượng<br /> <br /> Khảo sát cơ chất nền<br /> Theo các tài liệu tham khảo(4,5), gạo và củ từ<br /> là hai chất nền để nuôi cấy Monascus Trong đó,<br /> chất nền là gạo được sử dụng phổ biến và lâu<br /> đời. Và gần đây chất nền là dioscorea cũng được<br /> chứng minh thích hợp cho cho việc sản xuất<br /> monacolin K. Do đó chúng tôi tiến hành khảo sát<br /> trên hai loại chất nền này ở nhiệt độ và độ ẩm tối<br /> ưu. Sau đó định lượng monacolin K để chọn<br /> chất nền tối ưu.<br /> <br /> Khảo sát các chất bổ sung ảnh hưởng đến việc tạo monacolin K<br /> Bảng 2. Thành phần môi trường thử nghiệm<br /> Yếu tố<br /> Cấp độ<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> <br /> (A) Nguồn Cacbon<br /> Ethanol<br /> Glucose<br /> 0,3 %<br /> 0,5 %<br /> 0,5 %<br /> 1%<br /> 0,7 %<br /> 2%<br /> <br /> (B) Nguồn Nitơ 0,5%<br /> <br /> (C) Chất béo 0,5%<br /> <br /> (D) Muối khoáng 0,1%<br /> <br /> NH4Cl<br /> MSG<br /> NaNO3<br /> <br /> Glycerol<br /> Dầu đậu nành<br /> Dầu oliu<br /> <br /> MgSO4<br /> CaCO3<br /> NaCl<br /> <br /> Áp dụng phương pháp Taguchi(2) để tối ưu<br /> hóa môi trường nuôi cấy cho M. purpureus sinh<br /> monacolin K. Các nhân tố khảo sát gồm các<br /> nguồn carbon (ethanol, glucose), nguồn nitơ<br /> <br /> Bảng 3. Bố trí thí nghiệm theo phương pháp<br /> Taguchi(2)<br /> A (hay A’)<br /> B<br /> C<br /> D<br /> Thử<br /> nghiệm Nguồn carbon Nguồn Nitơ Chất béo Khoáng<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 2<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 2<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 2<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 5<br /> <br /> 2<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> khác nhau (Bảng 1) vào chất nền tốt nhất đã<br /> <br /> 6<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> khảo sát ở trên. Sau đó tiến hành nuôi nấm ở<br /> <br /> 7<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> 3<br /> <br /> 2<br /> <br /> nhiệt độ và độ ẩm tối ưu. Đây là các nguồn<br /> <br /> 8<br /> <br /> 3<br /> <br /> 2<br /> <br /> 1<br /> <br /> 3<br /> <br /> 9<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 2<br /> <br /> 1<br /> <br /> (NH4Cl, MSG, NaNO3), chất béo (glycerol, dầu<br /> đậu nành, dầu oliu) và chất khoáng (MgSO4,<br /> CaCO3, NaCl) được bổ sung với các nồng độ<br /> <br /> sinh dưỡng cần thiết cho sự sinh trưởng và sản<br /> sinh chất chuyển hóa thứ cấp của nấm<br /> Monascus sp.(1).<br /> Tiến hành 9 thí nghiệm với sự bố trí theo<br /> phương pháp Taguchi (Bảng 2), và dựa vào tỉ<br /> lệ S/N của các cấp độ để xác định điều kiện tối<br /> ưu cho M. purpureus sinh monacolin K. Với 2<br /> loại nguồn carbon bổ sung (ethanol và<br /> glucose) có tổng cộng 18 thử nghiệm tương<br /> ứng với 18 môi trường.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Trong đó: Nguồn carbon: A1 =ethanol 0,3%; A2 =ethanol<br /> 0,5%; A3 =ethanol 0,7%; A’1 =glucose 0,5%; A’2 =glucose<br /> 1%; A’3 =glucose 2%; Nguồn nitơ 0,5%: B1 = NH4Cl, B2<br /> = MSG, B3 = NaNO3; Chất béo 0,5%: C1 = glycerol, C2 =<br /> dầu đậu nành, C3 = dầu oliu.; Khoáng 0,1%: D1 = MgSO4,<br /> D2 = CaCO3, D3 = NaCl.<br /> <br /> Với 9 cách phối hợp theo phương pháp<br /> Taguchi, chúng tôi có 9 môi trường thử nghiệm.<br /> Tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu (S/N ratio, η) của mỗi<br /> môi trường được tính toán từ các dữ liệu thí<br /> nghiệm theo công thức sau:<br /> <br /> 197<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> B) như sau: 20 phút đầu tăng từ 35-75% A, phút<br /> 20-28 giữ nguyên 75% A, sau đó giảm về 35% A.<br /> Tổng thời gian phân tích là 35 phút. Bước sóng<br /> phát hiện 237 nm(6).<br /> <br /> Trong đó: yi là giá trị của môi trường thử nghiệm lần thứ<br /> i; n là số lần lặp lại thử nghiệm (n=2).<br /> <br /> Dựng đường chuẩn monacolin K<br /> Để định lượng monacolin K trong mẫu nấm,<br /> <br /> Dựa vào giá trị S/N (η) của từng môi trường<br /> để tính giá trị S/N của từng cấp độ theo phương<br /> pháp Taguchi.<br /> <br /> tiến hành dựng đường chuẩn của 2 dạng<br /> <br /> Thu sinh khối và chiết tách monacolin K<br /> <br /> dạng hydroxyl acid theo giai nồng độ từ 0 – 200<br /> <br /> Sau 16 ngày nuôi cấy, tiến hành đông khô<br /> sinh khối nấm, tán thành bột mịn, bảo quản sinh<br /> khối ở 4oC đến khi chiết monacolin K.<br /> <br /> mg/L. Phương trình thu được từ hai dạng đường<br /> <br /> monacolin K chuẩn (Sigma): dạng lacton và<br /> <br /> chuẩn trình bày trong bảng sau:<br /> Bảng 4. Phương trình tuyến tính của monacolin K<br /> dạng lacton và hydroxyl acid<br /> <br /> Qui trình chiết(6): Cân 0,5g bột sinh khối, thêm<br /> 8 ml ethanol 75%, tán trong bể siêu âm 30 phút,<br /> sau đó ly tâm ở tốc độ 3000 rpm trong 10 phút,<br /> hút lấy dịch nổi. Chiết lại thêm 2 lần. gộp dịch<br /> nổi của 3 lần chiết vào bình định mức 25 ml, bổ<br /> sung ethanol 75% vừa đủ 25ml. Đem lọc qua<br /> màng 0,45µm rồi phân tích bằng sắc ký lỏng cao<br /> áp (HPLC).<br /> <br /> Dạng monacolin Phương trình tuyến Hệ số tương quan<br /> 2<br /> K<br /> tính<br /> (R )<br /> Lacton<br /> y = 93,844x<br /> 0,993<br /> Hydroxyl acid<br /> y = 96,117x<br /> 0,9867<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Định lượng monacolin K<br /> Từ sắc ký đồ monacolin K chuẩn (Hình 1)<br /> cho thấy, monacolin K dạng hydroxyl acid<br /> chuẩn có thời gian lưu là 12,1 phút, và<br /> monacolin K dạng lacton chuẩn có thời gian lưu<br /> là 15,7 phút.<br /> <br /> Định lượng monacolin K<br /> Điều kiện sắc ký<br /> Cột Europher RP 18 (150 x 4,6mm, 5µm), đầu<br /> dò UV-vis, thể tích bơm mẫu 20 µl, tốc độ dòng<br /> 1 ml/phút. Pha động: gradient tiệm tiến của<br /> acetonitril (dung môi A) và TFA 0,1% (dung môi<br /> MK hydroxyl acid<br /> tR 12,1 phút<br /> <br /> Đ<br /> ộhấpthu(m<br /> A<br /> U<br /> )<br /> <br /> 1<br /> 0,8<br /> <br /> MK lacton<br /> tR 15,7 phút<br /> <br /> 0,6<br /> <br /> (a)<br /> <br /> 0,4<br /> 0,2<br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 5<br /> <br /> 10<br /> <br /> 15<br /> <br /> 20<br /> <br /> 30<br /> <br /> 25<br /> <br /> Đ<br /> ộhấpthu(m<br /> A<br /> U<br /> )<br /> <br /> 0,8<br /> <br /> MK hydroxyl acid<br /> <br /> 0,6<br /> 0,4<br /> <br /> MK lacton<br /> <br /> 0,2<br /> <br /> (b)<br /> <br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 5<br /> <br /> 10<br /> <br /> 15<br /> <br /> 20<br /> <br /> 25<br /> <br /> 30<br /> <br /> Thời gian (phút)<br /> <br /> Hình 3. Sắc ký đồ của monacolin K (MK) chuẩn (a), và sắc ký đồ định lượng monacolin K từ mẫu nấm (b).<br /> <br /> 198<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> Khảo sát ảnh hưởng của độ ẩm<br /> Dựa vào đồ thị hình 2, chúng tôi nhận thấy,<br /> hàm lượng monacolin K tăng dần từ độ ẩm 50%<br /> đến 65% và sau đó giảm dần từ độ ẩm 65% đến<br /> 75%, như vậy độ ẩm thấp (dưới 60%) hoặc cao<br /> (trên 70%) đều làm giảm hàm lượng monacolin<br /> K. Hàm lượng này đạt giá trị cao ở khoảng độ<br /> ẩm 60-65%, trong đó cao nhất ở độ ẩm 65%<br /> (965,65 µg/g sinh khối khô (SKK)).<br /> 868,55<br /> <br /> 965,65<br /> <br /> Khảo sát hàm lượng monacolin K trên 2 loại<br /> <br /> 800<br /> <br /> chất nền gạo và củ từ. Kết quả được trình bày<br /> <br /> 600<br /> <br /> 511,06<br /> <br /> 479,35<br /> <br /> 405,46<br /> <br /> môi trường gạo thì hàm lượng monacolin K thu<br /> <br /> 204,60<br /> <br /> được (973,58 µg/g SKK) cao hơn gấp 3 lần so với<br /> <br /> 0<br /> 50<br /> <br /> 55<br /> <br /> 60<br /> <br /> 65<br /> <br /> 70<br /> <br /> 75<br /> <br /> dưỡng tối ưu theo phương pháp Taguchi.<br /> <br /> Hình 4. Ảnh hưởng của độ ẩm đến hàm lượng<br /> monacolin K<br /> <br /> 1200<br /> <br /> Khảo sát ảnh hưởng của chế độ nhiệt độ<br /> khác nhau<br /> Nấm Monascus purpureus được nuôi cấy ở<br /> các chế độ nhiệt độ khác nhau, trên môi trường<br /> nền là gạo với độ ẩm tối ưu là 65%. Hàm lượng<br /> monacolin K trong sinh khối nấm ở các chế độ<br /> nhiệt khác nhau được trình bày trong hình 3.<br /> Monacolin K (μg/g)<br /> <br /> 1200<br /> <br /> 973,58<br /> <br /> 800<br /> 600<br /> 319,09<br /> <br /> 400<br /> 200<br /> 0<br /> Gạo<br /> <br /> Củ từ<br /> Chất nền<br /> <br /> Khảo sát các nguồn dinh dưỡng bổ sung<br /> <br /> 823,19<br /> <br /> 711,71<br /> <br /> 800<br /> <br /> 1000<br /> <br /> Hình 6. Hàm lượng monacolin K trên 2 loại chất nền<br /> <br /> 979,08<br /> <br /> 1000<br /> <br /> củ từ (319,09 µg/g SKK). Do đó, chúng tôi chọn<br /> là gạo làm chất nền để khảo sát môi trường dinh<br /> <br /> Độ ẩm (% )<br /> <br /> Dựa vào phương pháp Taguchi, với 2 loại<br /> <br /> 538,67<br /> <br /> 600<br /> 400<br /> <br /> trong Hình 4. Ta nhận thấy khi nuôi nấm trên<br /> <br /> Monacolin K (μg/g)<br /> <br /> Monacolin K (µg/g)<br /> <br /> 1000<br /> <br /> 200<br /> <br /> Dựa vào hình 3, hàm lượng monacolin K<br /> chênh lệch đáng kể khi nuôi M. purpureus ở các<br /> chế độ nhiệt khác nhau. Ở chế độ nhiệt III,<br /> Monascus tạo monacolin K cao nhất (979,08 µg/g<br /> SKK), tiếp theo là chế độ nhiệt IV (823,19 µg/g<br /> SKK), II (711,71 µg/g SKK), V (538,67 µg/g SKK),<br /> và thấp nhất ở chế độ nhiệt I (331,36 µg/g). Như<br /> vậy, yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng nhiều đến sự tạo<br /> monacolin K.<br /> <br /> Khảo sát chất nền tối ưu<br /> <br /> 1200<br /> <br /> 400<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> nguồn carbon bổ sung (ethanol và glucose), tiến<br /> <br /> 331,36<br /> <br /> hành 18 thử nghiệm tương đương với 18 môi<br /> <br /> 200<br /> <br /> trường được trình bày trong bảng sau:<br /> <br /> 0<br /> I<br /> <br /> II<br /> <br /> III<br /> <br /> IV<br /> <br /> V<br /> <br /> o<br /> <br /> Chế độ nhiệt ( C)<br /> <br /> Hình 5. Ảnh hưởng của chế độ nhiệt độ đến hàm lượng<br /> monacolin K (I): Nuôi ở 30oC trong 16 ngày; [II]: Nuôi ở<br /> 26oC trong 16 ngày; (III): Nuôi ở 30oC trong 2 ngày sau đó<br /> duy trì ở 26oC trong 14 ngày; (IV): Nuôi ở 32oC trong 2<br /> ngày, sau đó duy trì ở 26oC trong 14 ngày; (V): Nuôi ở<br /> 28oC trong 2 ngày, sau đó duy trì ở 26oC trong 14 ngày.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Bảng 5. Hàm lượng monacolin K và tỉ lệ S/N tương<br /> ứng của các môi trường<br /> STT<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> <br /> Nguồn C ethanol<br /> S/N<br /> 69,46<br /> 65,32<br /> 69,42<br /> 68,13<br /> 63,65<br /> <br /> Lượng (μg/g)<br /> 2972<br /> 1844<br /> 2957<br /> 255<br /> 1522<br /> <br /> STT<br /> 10<br /> 11<br /> 12<br /> 13<br /> 14<br /> <br /> Nguồn C glucose<br /> S/N<br /> 67,40<br /> 63,40<br /> 68,00<br /> 68,88<br /> 63,62<br /> <br /> Lượng (μg/g)<br /> 2343<br /> 1478<br /> 2511<br /> 2779<br /> 1517<br /> <br /> 199<br /> <br />