Luận văn:Nghiên cứu xác định thành phần và cấu tạo một số hợp chất hóa học trong tinh dầu từ cây ngãi cứu ở Quảng Nam

Chia sẻ: Nhung Thi | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:13

Thêm vào BST

Báo xấu

194
lượt xem 41
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Cây ngải cứu có chứa glucose, absinthine, absinthol, tannin, chất diệp lục và axit malic. Chúng cũng chứa chất thujone, tanacetone, azulene và cadinene (những chất làm tăng cơ bắp và tăng cường sức khỏe).

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Luận văn:Nghiên cứu xác định thành phần và cấu tạo một số hợp chất hóa học trong tinh dầu từ cây ngãi cứu ở Quảng Nam

1 2 B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Công trình ñư c hoàn thành t i Đ I H C ĐÀ N NG Đ I H C ĐÀ N NG NGUY N TH H NG Ngư i hư ng d n khoa h c: GS.TS. Đào Hùng Cư ng Ph n bi n 1: GS.TSKH.Tr n Văn Sung NGHIÊN C U XÁC Đ NH THÀNH PH N VÀ C U T OM TS H P CH T HÓA H C TRONG TINH D UT CÂY NG I C U QU NG NAM Ph n bi n 2: PGS.TS. Trương Th Minh H nh. Chuyên ngành: Hóa h u cơ Mã s : 60.44.27 Lu n văn ñã ñư c b o v t i H i ñ ng b o v ch m Lu n văn t t nghi p Th c sĩ Khoa h c h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày. 30 tháng12 năm 2011 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm thông tin - H c li u - Đ i h c Đà N ng - Thư vi n trư ng Đ i h c Sư Ph m, Đ i h c Đà N ng. Đà N ng - Năm 2011
3 4 M Đ U 3. Đ i tư ng nghiên c u. 1. Lý do ch n ñ tài 4. Phương pháp nghiên c u. Nư c ta có khí h u nhi t ñ i m nên th m th c v t khá 4.1. Nghiên c u lý thuy t. phong phú và ña d ng. Dân t c Vi t nam có truy n th ng s d ng 4.2. Phương pháp th c nghi m. các loài th o m c làm thu c ch a b nh. Theo các s li u th ng kê - L y m u, thu hái và x lí m u. m i nh t th m th c v t Vi t Nam có trên 12000 loài, trong s ñó có - Xác ñ nh m t s ch tiêu hóa lý. trên 3200 loài th c v t ñư c s d ng làm thu c trong y h c dân gian - Phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c. [1], [2], [8], [10]. - Phương pháp chi t tách b ng dung môi h u cơ. Trong các lo i th c v t ñó, ng i c u là m t v thu c thông - Xác ñ nh thành ph n hóa h c c a tinh d u b ng phương d ng trong ñông y ñ ng th i cũng là m t v thu c dân gian ñư c ph pháp s c kí khí ghép kh i ph (GC/MS). bi n r ng rãi trong c nư c, nh t là các gia ñình nông thôn, phòng - Xác ñ nh thành ph n hóa h c c a d ch chi t trong các dung và ch a nhi u ch ng b nh. Dân gian thư ng s d ng ng i c u ñ ch môi h u cơ (metanol, cloroform, hexan) b ng phương pháp s c kí khí bi n làm các món ăn như rán tr ng gà v i ng i c u, n u c nh th t n c ghép kh i ph (GC/MS). v i ng i c u,...ñ c bi t m i ngư i còn s d ng làm thu c ch a b nh 5. Ý nghĩa khoa h c và th c ti n c a ñ tài. như ñau ñ u, làm thu c ñi u kinh, rong kinh, ñ ng thai, s y thai, tăng 6. C u trúc c a lu n văn. s c kh e cho cơ th , thi u máu, ho, viêm h ng, huy t áp th p,... Lu n văn g m 75 trang, trong ñó có 34 b ng và 18 hình. Đ làm sáng t nh ng công d ng c a cây ng i c u, tác gi Ph n m ñ u (4 trang), k t lu n và ki n ngh (2 trang), tài li u tham lu n văn ch n ñ tài: “Nghiên c u xác ñ nh thành ph n và c u t o kh o (2 trang) . N i dung c a lu n văn chia làm 3 chương. m t s h p ch t hóa h c trong tinh d u t cây ng i c u Qu ng Chương 1- T ng quan (21 trang). Nam” Chương 2- Nh ng nghiên c u th c nghi m (13 trang). 2. M c ñích nghiên c u Chương 3- K t qu và bàn lu n (33 trang). - Xác ñ nh hàm lư ng, ch tiêu hóa lý m t s h p ch t hóa h c trong tinh d u lá ng i c u t nh Qu ng Nam. - Xây d ng quy trình chi t tách m t s h p ch t hóa h c t d ch chi t lá ng i c u. - Xác ñ nh thành ph n hóa h c, công th c c u t o c a m t s h p ch t chính trong các d ch chi t.
5 6 Chương I - T NG QUAN t bào ch t, làm m m da và các v t chai, giúp máu lưu thông m nh hơn, làm d u các cơ ñang b ñau và ch b sưng hay viêm. Ngoài ra, 1.1. KHÁI QUÁT V H CÚC & GI I THI U M T S nó còn là món ăn hàng ngày c a ngư i Vi t. Đ C ĐI M V CÂY NG I C U 1.1.2.4. Y h c trong dân gian t cây ng i c u[12], [13]. 1.1.1. Khái quát v h cúc. 1.2. T NG QUAN V TINH D U 1.1.1.1. Phân lo i khoa h c. 1.2.1. Khái ni m. 1.1.1.2. Phân b . 1.2.2. Phân lo i. 1.1.1.3. Đ c tính th c v t. 1.2.3. Vai trò. 1.1.2. Gi i thi u m t s ñ c ñi m v cây ng i c u. 1.2.4. Cách s d ng. 1.1.2.1. Đ c ñi m v th c v t. 1.2.5. Tính ch t v t lí c a tinh d u. Ng i c u có tên khoa h c là Artemisia vulgris L. Ngoài ra nó 1.2.6. Thành ph n hóa h c ch y u c a tinh d u ñ bay hơi. còn có tên khác là: Ng i Di p, B c ng i, Nh ng i, Quá sú, Ng i, C 1.2.7. Ki m ñ nh và cách b o qu n tinh d u. linh chi. 1.2.8. Đ nh lư ng tinh d u Gi i: Plantae 1.3. LÝ THUY T V CHƯNG C T. Ngành: Angiospermae 1.3.1. Đ nh nghĩa. L p: Magnoliidae 1.3.2. Nh ng nh hư ng chính trong s chưng c t hơi nư c B : Cúc (Asterales) 1.3.3. Phân lo i. H : cúc (Asteraceae) 1.3.4. Phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c Chi: Astemisia L 1.3.5. Các phương pháp ti n hành tách s c ký Loài: Artemisia vulgris L 1.3.6. Các phương pháp s c kí. 1.1.2.2. Đ c ñi m v sinh thái. Chương 2: NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN 1.1.2.3. Dư c tính c a ng i c u C U Hi n nay Ng i c u là m t v thu c thư ng dùng trong nhân dân Vi t Nam, ñư c dùng ch a tr các b nh như kinh nguy t không 2.1. NGUYÊN LI U ñ u, b ng l nh ñau, t cung l nh không th có thai, th huy t, n c 2.1.1. Thu m u cây, xác ñ nh tên khoa h c huy t, băng l u kinh nhi u, có thai, ñ i h ph n . Tr m n tr ng cá, m n ng a, gh l , tăng s c kho cho cơ th . Ng i c u có th t y
7 8 Nguyên li u ñ nghiên c u là cây Ng i c u ñư c thu hái vào cu i tháng 3 ñ u tháng 4 năm 2011 t i huy n Đ i L c, t nh Qu ng Lá ng i c u non, lá ng i Nam. Cây Ng i c u còn ñư c g i là Ng i Di p, B c ng i, Nh ng i, c u già Quá sú, Ng i, C linh chi. Có tên khoa h c là Artemisia vulgris L, thu c h Cúc Asteraceae [5]. X lí 2.1.2. X lý m u. 2.2. HÓA CH T VÀ THI T B NGHIÊN C U. Xác ñ nh ñ m 2.2.1. Hóa ch t. Chi t b ng phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c 2.2.2. Thi t b thí nghi m. Xác ñ nh hàm lư ng tro 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U. 2.3.1. L y m u và x lý m u. Xác ñ nh hàm lư ng kim lo i Tinh d u Làm khan + Ph n tươi (lá ng i c u non và lá ng i c u già): dùng ñ xác ñ nh b ng Na2SO4 ñ m, hàm lư ng, chưng c t lôi cu n hơi nư c. + Ph n khô: dùng ñ chi t tách b ng các dung môi h u cơ. Xác ñ nh thành ph n, Kh o sát các y u t sát các 2.3.2. Xác ñ nh ñ m, hàm lư ng tro, hàm lư ng kim lo i. công th c c u t o nh hư ng ñ n quá 2.3.2.1. Xác ñ nh ñ m c a nguyên li u. c a các h p ch t trình chưng c t trìn 2.3.2.2. Xác ñ nh hàm lư ng tro c a nguyên li u. 2.3.2.3. Xác ñ nh hàm lư ng kim lo i. Đo GC-MS 2.3.3. Nghiên c u chi t tách m t s h p ch t hóa h c trong Hình 2.5. Sơ ñ chi t tách tinh d u lá ng i c u tinh d u lá ng i c u [9]. 2.3.3.2. Kh o sát các y u t nh hư ng ñ n lư ng tinh d u. 2.3.3.1. Chi t tách tinh d u . 2.3.3.3. Xác ñ nh hàm lư ng tinh d u. Quy trình chi t tách tinh d u hình 2.5. 2.3.3.4. Nghiên c u xác ñ nh thành ph n, c u t o m t s h p ch t trong tinh d u. 2.3.4. Nghiên c u chi t tách m t s h p ch t hóa h c c a d ch chi t lá ng i c u trong các dung môi . 2.3.4.1. Phương pháp chi t
9 10 a. Phương pháp chưng ninh b. Phương pháp soxhlet 2.3.4.2. Kh o sát ch n dung môi chi t - Dung môi: butanol, etanol và metanol. a. B ng phương pháp quang ph h p th phân t UV-VIS b. B ng phương pháp phân tích tr ng lư ng 2.3.4.3. Kh o sát ñi u ki n chi t a. B ng phương pháp chưng ninh a1. Kh o sát th i gian chi t a2. Kh o sát t l r n – l ng b. B ng phương pháp chi t soxhlet b1. Kh o sát th i gian chi t b2. Kh o sát t l r n-l ng. 2.3.4.3. Xác ñ nh thành ph n và c u t o m t s h p ch t chính Hình 2.6. Quy trình chi t tách các h p ch t trong các dung môi. trong d ch chi t. Chương 3. K T QU VÀ TH O LU N. S d ng phương pháp phân tích s c ký khí - kh i ph 3.1. XÁC Đ NH Đ M, HÀM LƯ NG TRO VÀ HÀM (GC/MS) ñ phân tích và xác ñ nh thành ph n, c u t o m t s h p LƯ NG KIM LO I. ch t chính trong d ch chi t. 3.1.1. Xác ñ nh ñ m. Quy trình chi t tách m t s h p ch t hóa h c trong lá ng i Đ m trung bình c a lá ng i c u non là 84,33%. c u b ng dung môi h u cơ, ñư c th c hi n theo sơ ñ hình 2.6. Đ m trung bình c a lá ng i c u già là 80,89%. 3.1.2. Hàm lư ng tro. Đ tro trung bình c a lá ng i c u non là 13,92%. Đ tro trung bình c a lá ng i c u già là 15,24%. 3.1.3. Hàm lư ng kim lo i Thu và x lý nguyên li u Căn c vào quy t ñ nh s 867/1998/ QĐ-BYT ngày 04 tháng 4 năm 1998 c a B y t v vi c ban hành danh m c “Tiêu B t lá ng i c u
11 12 chu n v sinh ñ i v i lương th c th c ph m”, ñ i chi u v i m c hàm B ng 3.8.Th tích tinh d u lá ng i c u già không xay lư ng kim lo i cho phép trong rau qu và thành ph n kim lo i n ng Th i gian (h) 2 3 4 5 6 7 trong lá ng i c u nghiên c u nh hơn nhi u so v i hàm lư ng t i ña Vtinh d u(ml) 0,3 0,7 0,9 1,0 1,0 1,0 cho phép nên s d ng, an toàn, không nh hư ng ñ n s c kho con * Nguyên li u xay nh : ngư i. B ng 3.9. K t qu kh o sát th tích tinh d u lá ng i c u non xay nh 3.2. K T QU NGHIÊN C U CHI T TÁCH TINH D U Th i gian (h) 2 3 4 5 6 7 3.2.1. Tính ch t c m quan c a tinh d u lá ng i c u non và Vtinh d u(ml) 0,4 0,6 0,9 1,1 1,1 1,1 lá ng i c u già: Tinh d u thu ñư c theo phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c t lá ng i c u non và lá ng i c u già ñ u B ng 3.10. K t qu kh o sát th tích tinh d u lá ng i c u già xay nh có màu màu vàng nh t, mùi hơi h c, v cay, nh hơn nư c, Th i gian (h) 2 3 4 5 6 7 không tan trong nư c. Vtinh d u(ml) 0,9 1,2 1,3 1,4 1,4 1,4 3.2.2. K t qu kh o sát các y u t nh hư ng ñ n hàm lư ng Nh n xét: Tinh d u thu ñư c có hi u su t cao nh t ñ i v i tinh d u. nguyên li u xay nh . 3.2.2.1. K t qu kh o sát nguyên li u không xay và nguyên li u 3.2.2.2. K t qu kh o sát th i gian chưng c t. xay: Ti n hành chưng c t 100g nguyên li u (lá ng i c u non và lá Cân kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non và lá ng i c u ng i c u già) v i th tích nư c là 300 ml trong th i gian 2-7 gi già), xay nh , ngâm v i 300 ml dung d ch NaCl 10% trong 1 gi , sau * Nguyên li u không xay: ñó ti n hành chưng c t lôi cu n hơi nư c trong th i gian t 2, 3, 4, 5, B ng 3.7.Th tích tinh d u lá ng i c u non không xay 6, 7 gi . K t qu thu tinh d u ñư c: Th i gian (h) 2 3 4 5 6 7 B ng 3.11.Tth i gian chưng c t tinh d u lá ng i c u non Vtinh d u(ml) 0,1 0,3 0,5 0,8 0,8 0,8 Th i gian (gi ) 2 3 4 5 6 7 Vtinh d u(ml) 0,8 1,0 1,1 1,2 1,2 1,2 B ng 3.12. Th i gian chưng c t tinh d u lá ng i c u già Th i gian (gi ) 2 3 4 5 6 7 Vtinh d u(ml) 0,8 1,1 1,3 1,4 1,4 1,4
13 14 Nh n xét: Theo phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c, 3.2.2.4. K t qu kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl: trong th i gian t 2 gi ñ n 4 gi , th tích tinh d u thu ñư c tăng Ngâm kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non và lá ng i c u già) nhanh, t 4 gi ñ n 5 gi , th tích tinh d u tăng thêm không ñáng k , xay nh trong 300 ml dung d ch mu i ăn NaCl v i các n ng ñ l n sau 5 gi th tích không tăng thêm n a. Do v y, chúng tôi ch n 5 gi lư t là 0%, 5%, 10%, 15% và 20% trong 1 gi . Sau ñó ti n hành là th i gian chưng c t thích h p nh t. chưng c t trong 5 gi . 3.2.2.3. K t qu kh o sát t l kh i lư ng lá tươi / th tích nư c B ng 3.15. Kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl ñ i v i lá ng i c u non Cân kho ng 100g nguyên li u (lá ng i c u non và lá ng i c u N ng ñ NaCl(%) 0 5 10 15 20 già) xay nh , v i th tích nư c l n lư t là 200 ml, 250 ml, 300 ml, Vtinh d u(ml) 0,9 1,3 1,5 1,5 1,5 350 ml, 400 ml ñun trong 5 gi b ng phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c. K t qu kh o sát t l kh i lư ng lá tươi/th tích nư c ñư c B ng 3.16. Kh o sát n ng ñ mu i ăn NaCl ñ i v i lá ng i c u già trình bày b ng 3.13 và 3.14, dư i ñây N ng ñ NaCl(%) 0 5 10 15 20 B ng 3.13. Kh o sát t l kh i lư ng lá ng i c u non/ th tích nư c Vtinh d u(ml) 1,2 1,5 1,6 1,6 1,6 mnguyên li u/Vnư c( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Nh n xét: Căn c vào th tích tinh d u thu ñư c khi kh o sát n ng Vtinh d u(ml) 0,8 1,1 1,2 1,2 1,2 ñ mu i ăn tăng d n t 0% ñ n 20%, ta có th l a ch n n ng ñ NaCl thích h p nh t dùng ñ ngâm nguyên li u trư c khi chưng c t B ng 3.14. Kh o sát t l kh i lư ng lá ng i c u già / th tích nư c tinh d u là 10% ñ i v i c hai lo i nguyên li u kh o sát. mnguyên li u/Vnư c( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Đi u ki n chưng c t lôi cu n hơi nư c thích h p là: Vtinh d u(ml) 0,9 1,2 1,5 1,5 1,5 + Nguyên li u: xay nh Nh n xét: Qua b ng chúng tôi ch n th tích nư c 300 ml là + Th i gian chưng c t: 5 gi . th tích thích h p nh t ñ chưng c t 100 g nguyên li u, hay nói cách + T l kh i lư ng lá tươi/th tích nư c: 1:3 (g/ml) khác, t l kh i lư ng nguyên li u / th tích nư c là 1:3 là t l thích +N ng ñ mu i ăn: 10% h p nh t cho quá trình chưng c t thu tinh d u lá ng i c u. K t qu 3.2.3. K t qu xác ñ nh hàm lư ng tinh d u này ñúng ñ i v i c 2 lo i lá non và lá già. Hàm lư ng tinh d u lá ng i c u non là 1,27%. Hàm lư ng tinh d u lá ng i c u già là 1,57%.
15 16 3.2.4. K t qu nghiên c u xác ñ nh thành ph n, hàm lư ng tetramethyl 15 germacrene B C15H24 14,178 0,67 và công th c c u t o m t s h p ch t hóa h c trong tinh 16 p-menth-3-ene,2-isopropenyl-1-vinyl C15H24 14,261 0,81 d u lá ng i c u. 17 alpha-cubebene C15H24 14,578 0,15 18 alpha-amorphene C15H24 15,261 0,14 So sánh s c kí ñ - kh i ph thu ñư c hình 3.2 v i thư vi n chu n 19 copaene C15H24 15,478 3,35 cho th y thành ph n chính c a tinh d u lá ng i c u t i Qu ng Nam 20 cyclobuta1,2:3,4dicyclopetene,decahydro- C15H24 15,678 0,36 3A-methyl có kho ng 52 c u t (b ng 3.25). Các c u t này ch y u thu c các 21 elemene C15H24 15,845 3,17 nhóm monoterpen, secquiterpen, diterpen bao g m d n xu t c a 22 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 phenol, ancol, xeton... Trong ñó có 51 h p ch t ñư c xác ñ nh v i 6 23 1H-cyclopenta 1,3cyclopropa 1,2bezene, C15H24 17,011 0,89 octahydro-7-methyl-3methylene thành ph n chính là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D 24 2-petanone,5-(2-methylenecyclohexyl)- C12H20O 17,245 0,40 (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth- stereoisomer 25 chưa ñ nh danh 17,345 0,35 8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina- 26 naphthalene,1,2,3,4,6,8a-hexahydro-1- C15H24 17,478 0,36 3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) isopropyl-4,7-dimethyl 27 bicyclo7.2.0 undec-4-ene,4,11,11-trimethyl- C15H24 17,561 0,50 B ng 3.19. Thành ph n hóa h c c a tinh d u lá cây ng i c u 8-methylene Th i 28 alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 TT H p ch t CTPT gian (%) 29 germacrene D C15H24 18,562 18,67 lưu 30 1H-cycloprop[E]azulene,decahydro-1,1,7- C15H24 18,811 2,70 01 beta-cis-ocimene C10H16 4,043 0,27 trimethyl-4-methylene 02 β-pinen C10H16 4,960 0,21 31 Delta cadinene C15H24 18,911 0,40 03 beta-mycrene C10H16 5,093 0,16 32 Delta muurolene C15H24 19,211 0,36 04 limonene C10H16 6,093 0,07 33 cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 05 2-norpinene,3,6,6- trimethyl C10H16 6,160 0,11 34 cadina-1,3,5-triene C15H22 19,478 0,30 06 tricyclene C10H16 6,433 0,44 35 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1- C15H26O 20,312 6,15 07 beta-limalool C10H18O 7,927 0,13 vinyl-(1S,2S,4R) 08 cyclohexen-5,6-diethenyl-3-methyl C11H16 8,777 1,63 36 caryophylleneoxide C15H24O 21,095 0,26 09 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 37 ledol C15H26O 21,428 0,41 10 p-menth-1-en-4-ol C10H18O 10,261 0,07 38 alpha-bisabolol C15H26O 22,178 0,92 11 linalyl propanoate C13H22O2 10,727 0,07 39 eudesmol C15H26O 22,345 1,02 12 isopyrethrone C11H14O 12,011 0,07 40 cadinol C15H26O 22,578 0,72 13 cyclohexen-3,4-diethenyl-3-methyl C11H16 12,161 0,11 41 1-cadin-4-en-10-ol C15H26O 22,662 1,11 14 tricyclo3.2.1.02,7oct-3-ene,2,3,4,5- C12H18 13,094 0,50 42 copaen-11-ol C15H24O 22,828 0,50
17 18 43 eudesm-4(14)-en-11-ol C15H26O 22,995 3,28 K t lu n: qua 2 phương pháp kh o sát ch n dung môi chi t, 44 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol C20H40O 25,995 0,06 ta ch n dung môi metanol ñ chi t các c u t trong lá ng i c u. 45 hexadecanoic acid C16H32O2 27,945 0,38 46 3,7,11,15-tetramethylhexadecen-1,3,6,10- C20H32 28,495 0,04 3.3.2. K t qu kh o sát ñi u ki n chi t các c u t t lá ng i pentaene c u. 47 2,4-dioctylphenol C22H38O 28,845 0,05 48 phytol C20H40O 29,495 3,72 3.3.2.1. B ng phương pháp chưng ninh. 49 hexadecanan diallyl acetal C22H42O2 29,795 0,09 a. Kh o sát th i gian chi t: th i gian chi t thích h p các c u t 50 kauren-18-ol,acetate,(4.beta) C22H34O2 29,895 0,14 trong lá ng i c u trong ñi u ki n trên là 4h. 51 pentacosane C25H52 33,396 0,08 52 bis(2-ethylhexyl)phthalate C24H38O4 33,979 0,15 b. Kh o sát t l r n – l ng: Như v y trong tinh d u lá ng i c u thu ñư c m t s h p ch t Như v y t l r n – l ng thích h p ñ chi t các c u t t lá có hàm lư ng cao trong b ng 3.22 như sau: ng i c u là 10g nguyên li u /100ml metanol. B ng 3.20. Thành ph n hóa h c có hàm lư ng cao c a tinh d u lá 3.3.2.2. B ng phương pháp chi t soxhlet ng i c u a. Kh o sát th i gian chi t: Qua b ng 3.25 th i gian thích h p ñ Th i gian chi t soxhlet là 8h thì thu ñư c kh i lư ng c n là l n nh t. TT H p ch t CTPT (%) lưu b. Kh o sát t l r n – l ng: Qua b ng 3.26 ta ch n ñư c t l r n – 01 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 02 germacrene D C15H24 18,562 18,67 l ng thích h p ñ chi t là 10g nguyên li u/ 100ml dung môi. 03 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 T s li u thu ñư c gi a phương pháp chưng ninh so sánh 04 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α- C15H26O 20,312 6,15 v i phương pháp chi t soxhlet ta th y phương pháp chưng ninh thu n 05 dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 l i hơn phương pháp chi t soxhlet vì v i cùng lư ng b t lá ng i c u 06 alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 ban ñ u và lư ng dung môi thì th i gian chi t ít hơn phương pháp chi t soxhlet mà kh i lư ng c n thu ñư c l i x p x . Do ñó ch n phương pháp chưng ninh ñ chi t các c u t t 3.3. K T QU NGHIÊN C U D CH CHI T LÁ NG I C U. lá ng i c u, v i t l r n – l ng là 10g nguyên li u/ 100ml dung môi 3.3.1. K t qu kh o sát ch n dung môi chi t. methanol và chưng ninh trong 4 gi . Dung môi kh o sát: butanol, etanol và metanol. 3.3.3. Phương pháp phân l p các ch t trong các dung môi. 3.3.1.1. B ng phương pháp quang ph h p th phân t UV-VIS. - Quá trình phân l p ti n hành l n lư t qua 4 dung môi có ñ phân 3.3.1.2. B ng phương pháp phân tích tr ng lư ng. c c tăng d n là: n-hexan, chloroform, etylaxetat, methanol.
19 20 - Cách t n hành: theo sơ ñ 3.3.3. Xác ñ nh thành ph n hóa h c c a d ch chi t cây ng i + Cho 25 ml dung môi n-hexan vào hòa tan cao methanol ñư c c u trong các dung môi. d ch chi t màu vàng ñ m, khu y ñ u ñ n khi cân b ng, cho vào ph u chi t 3.3.3.1. Thành ph n hóa h c c a d ch chi t lá ng i c u trong dung ñ yên trong 2 gi , chi t l y ph n d ch l ng màu vàng r t nh t trong dung môi hexan môi n-hexan. Sau ñó ti n hành chi t liên t c nhi u l n, m i l n 25 ml dung B ng 3.27. Thành ph n các c u t trong d ch chi t n-hexane môi n-hexan ñ n khi ph n d ch l ng trong n-hexan ñ n l n chi t cu i cùng tr nên không màu thu ñư c d ch n-hexan. + Cho ph n c n hexan sau khi qua n-hexan có màu vàng ñ m, ti p t c cho 25ml dung môi chloroform vào khu y ñ u, cũng làm tương t như trên cho ñ n khi ph n d ch l ng trong dung môi cloroform h t màu vàng nh t thu ñư c d ch chloroform. + Cho ph n c n chloroform sau khi qua dung môi cloroorm có màu vàng l i cho ti p dung môi etylaxetat vào, khu y ñ u và th c hi n các thao tác như trên cho ñ n khi ph n d ch l ng trong dung môi etylaxetat t màu vàng chuy n sang không màu thì d ng thu ñư c d ch etylaxetat + Cho ph n c n etylaxetat sau khi qua dung môi etylaxetat có màu ñ ñ m, ti p t c cho 25ml dung môi metanol vào, khu y ñ u và th c hi n các thao tác như trên cho ñ n khi ph n d ch l ng trong dung môi metanol chuy n sang không màu thì d ng thu ñư c d ch methanol. Qua quá trình phân l p như trên ta thu ñư c 4 d ch chi t trong các dung môi n-hexan, cloroform, etylaxetat, methanol. Đu i b t dung môi, ñem ño GC/MS máy ño s c ký khí ghép kh i ph (GC/MS) Perkin Elmer (Trung tâm d ch v phân tích thí nghi m Tp. H Chí Minh, s 2, Nguy n Văn Th , phư ng Đa Kao, qu n 1, Tp. H Chí Minh).
21 22 B ng 3.28. Thành ph n các c u t chính trong dung môi n-hexane B ng 3.30. Thành ph n các c u t chính trong dung môi chloroform TT Scan Tên các h p ch t Di n tích peak % TT Scan Tên Di n tích peak % 1 1373 Phytol 904589312 8,17 1 1273 Hexandecanoic acid 433549024 18,42 2 1415 9,12-Octadecadienoic acid 165849520 9,42 2 1365 Phytol 355174336 15,09 3 1406 Linolenic acid,methyl ester 189959520 8,07 3 1287 Hexandecanoic acid 2005697280 18,12 3.3.3.4. Thành ph n hóa h c c a d ch chi t cây ng i c u trong 3.3.3.2. Thành ph n các c u t trong d ch chi t cloroform dung môi metanol B ng 3.29. Thành ph n các c u t trong d ch chi t chloroform B ng 3.33. Thành ph n các c u t trong d ch chi t metanol Nh n xét: Thành ph n hoá h c các c u t trong d ch chi t metanol sau khi ñư c ño b ng GC/MS có 20 c u t và thành ph n các c u t chính ñư c trình bày b ng 3.46, như sau B ng 3.34. Thành ph n các c u t chính trong d ch chi t methanol TT Scan Công th c phân t Tên g i T l (%) 1 1190 C7H16O4 M=194 Myo-in ositol, 4-C-methyl 15,14 C16H32O2 2 1271 Hexa ñecanoic axit 16,98 M=256 C39H76O5 9,12-Octa decadienoic 3 1403 12,59 M=624 acid
23 24 Nh n xét: Thành ph n các ch t trong d ch metanol có hàm K T LU N VÀ KI N NGH lư ng l n g m có 3 c u t , trong ñó c u t có công th c ph c t p 1. K T LU N nh t và hàm lư ng l n l à Myo-inositol, 4-C-methyl v i hàm lư ng 15,14% 1. Đã xác ñ nh ñư c ñ m, hàm lư ng tro vô cơ, hàm lư ng kim lo i n ng, hàm lư ng tinh d u trong lá ng i c u. - Đ m (lá ng i c u non là 84,33%, lá ng i c u già là 80,89%), hàm lư ng tro vô cơ (lá ng i c u non là 13,92%, lá ng i c u già là 15,24%), hàm lư ng tinh d u (lá ng i c u non là 1,27%, lá ng i c u già là 1,57%). - Hàm lư ng kim lo i n ng trong lá ng i c u n m trong gi i h n cho phép s d ng c a B y t . 2. Đã kh o sát ñi u ki n thích h p ñ chi t tách tinh d u cũng như các c u t có trong d ch chi t trong các dung môi h u cơ. - Đi u ki n thích h p ñ chi t tinh d u là: + Lá ng i c u già, + Nguyên li u: xay nh 1 phút + Th i gian chưng c t: 5 gi . + T l kh i lư ng lá tươi/th tích nư c: 1:3 ( g/ml) +N ng ñ mu i ăn: 10% - Kh o sát dung môi t i ưu ñ chi t tách các c u t trong lá ng i c u là metanol. Đi u ki n thích h p ñ chi t tách các c u t trong lá ng i c u là phương pháp chưng ninh trong dung môi metanol v i th i gian là 4 gi , t l r n- l ng là 10g nguyên li u/100ml metanol. c. Đã ñ nh danh ñư c các ch t có trong tinh d u ng i c u và trong d ch chi t lá ng i c u trong các dung môi. - Trong tinh d u: các c u t ch y u thu c các nhóm monoterpen, secquiterpen, diterpen bao g m d n xu t c a phenol, ancol, xeton...
25 Trong ñó có 51 h p ch t ñư c xác ñ nh v i 6 thành ph n chính là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth-8-ene-4-methanol,α,α- dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina-3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) Trong các d ch chi t n-hexan, cloroform,etylaxetat: S lư ng c u t , c u t có hàm lương cao trong d ch chi t các dung môi là: S lư ng C u t hàm lư ng cao Hàm lư ng Dung môi c ut nh t (%) n-hexan 49 Hexadecanoic 18,12 Clorofom 35 Hexadecanoic 18,42 Etylaxetat 28 Phthalic anhydride 25,07 Metanol 20 Hexadecanoic 16,98 2. KI N NGH Ti p t c nghiên c u theo hư ng sâu hơn: ch y s c ký c t ñ tách ñư c các c u t tinh khi t t tinh d u và d ch chi t lá ng i c u, ño c ng hư ng t h t nhân ñ xác ñ nh c u trúc các h p ch t chính. Làm giàu các c u t chính, th ho t tính sinh h c và nghiên c u các ph n ng chuy n hóa chúng. Có th nghiên c u theo hư ng m r ng ñ xác ñ nh thành ph n các ch t có trong hoa c a cây ng i c u, so sánh v i thành ph n các ch t có trong lá ng i c u. T ñó, s l a ch n ñư c ngu n nguyên li u thích h p ñ ti p t c nghiên c u các ho t tính sinh h c ph c v cho y h c.