Xây dựng qui trình xác định hàm lượng vitamin B1, B2, B3 và B6 trong sữa bột bổ sung vi chất dinh dưỡng

Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014<br /> <br />  <br /> <br /> XÂY DỰNG QUI TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN B1, B2, B3 <br /> VÀ B6 TRONG SỮA BỘT BỔ SUNG VI CHẤT DINH DƯỠNG <br /> Trần Thị Mỹ Ngọc* <br /> <br /> TÓM TẮT <br /> Đặt vấn đề: Hiện nay, các phương pháp xác định hàm lượng vitamin B trong sữa được phát triển rất đa <br /> dạng. Tuy nhiên ứng với mỗi loại vitamin B lại có một qui trình phân tích khác nhau nên khá tốn thời gian cũng <br /> như chi phí phân tích. Trong khi đó sữa bột được bổ sung cùng lúc nhiều loại vitamin B. Để hạn chế nhược điểm <br /> trên nghiên cứu này tập trung xây dựng qui trình xác định đồng thời hàm lượng các vitamin B1, B2, B3 và B6 <br /> trong sữa bột bổ sung vi chất dinh dưỡng. <br /> Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng qui trình xác định hàm lượng vitamin B1, B2, B3 và B6 trong sữa bột bổ <br /> sung vi chất dinh dưỡng.  <br /> Phương pháp nghiên cứu: Triển khai trên máy sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần, tối ưu hóa qui trình xử lý <br /> mẫu, xác định giá trị sử dụng của phương pháp. <br /> Kết quả: Hoàn chỉnh qui trình xác định hàm lượng vitamin B1, B2, B3 và B6 trong mẫu sữa bột bổ sung vi <br /> chất dinh dưỡng bằng kỹ thuật sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần. <br /> Kết luận: Áp dụng qui trình này để kiểm tra hàm lượng vitamin B1, B2, B3 và B6 trong mẫu sữa bột bổ <br /> sung vi chất dinh dưỡng trên địa bàn thành phố Hồ Chí Minh năm 2013. <br /> Từ khóa: Vitamin B1, vitamin B2, vitamin B3, vitamin B6, sữa bột, LC‐MS/MS. <br /> <br /> ABSTRACT <br /> CONSTRUCTING A METHOD FOR DETERMINATION OF VITAMIN B1, B2, B3 AND B6 IN MILK <br /> POWDER HAVING MICRONUTRIENT SUPPLEMENT  <br /> Tran Thi My Ngoc * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6 ‐ 2014: 703 ‐ 708 <br /> Background:  Methods  for  determination  of  vitamins  B  in  milk  have  been  developed  for  a  long  time  ago. <br /> However  each  type  of  vitamin  group  B  has  a  different  analysis  procedure  that  consumes  time  and  costs  for <br /> analysis. Many types of vitamin B have been added in milk powder as micronutrient supplement. Thus, the study <br /> aims to construct a method that can determine four types of Vitamin group B in milk powder with micronutrient <br /> supplement. <br /> Objectives:  Construct  a  process  to  determine  vitamin  B1,  B2,  B3  and  B6  in  milk  powder  having <br /> micronutrient supplement.  <br /> Methods:  Implemented  on  a  liquid  chromatography  mass  spectrometry  LC‐MS/MS,  optimized  sample <br /> preparation, validated the method. <br /> Results: The method of determination of the amount of vitamin B1, B2, B3 and B6 in in milk powder having <br /> micronutrient supplement by liquid chromatography mass spectrometry LC‐MS/MS was constructed. <br /> Conclusion: The study suggests that the method of liquid chromatography mass spectrometry LC‐MS/MS <br /> can be applied for determination of vitamin B1, B2, B3 and B6 in milk powder having micronutrient supplement <br /> in Ho Chi Minh City. <br /> * Viện Y tế công cộng thành phố Hồ Chí Minh <br /> Tác giả liên lạc: CN. Trần Thị Mỹ Ngọc  <br /> ĐT: 0169 689 5534  Email: myphone820668@yahoo.com.vn <br /> <br /> 702<br /> <br /> Chuyên Đề Y Tế Công Cộng <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 <br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br />  <br /> Keywords: Vitamin B1, vitamin B2, vitamin B3, vitamin B6, milk powder, LC‐MS/MS. <br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ <br /> Vitamin nhóm B đóng vai trò quan trọng đối <br /> với  sức  khỏe  con  người.  Nhóm  này  bao  gồm <br /> thiamine (B1), riboflavin (B2), nicotinamide (B3), <br /> pyridoxine (B6) và những loại vitamin tan trong <br /> nước khác. Mặc dù những chất này có sẵn trong <br /> thực  phẩm  nhưng  việc  thiếu  vitamin  B  trong <br /> khẩu phần ăn của mỗi người là có thể xảy ra và <br /> ảnh hưởng đến sức khỏe. Tùy theo màu sắc, khả <br /> năng chống oxy hóa và giá trị dinh dưỡng, việc <br /> bổ sung vitamin nhóm B vào thực phẩm là cần <br /> thiết. Do đó, đòi hỏi có những phương pháp xác <br /> định những vitamin này trong thực phẩm(3). <br /> Tuy  nhiên  việc  phân  tích  vitamin  B  trong <br /> thực phẩm khá phức tạp bởi vì: các vitamin có <br /> cấu  trúc  hóa  học  và  tính  chất  khác  nhau  nên <br /> khó  tìm  một  phương  pháp  chung  thích  hợp <br /> phân  tích  đồng  thời  tất  cả  các  vitamin  trong <br /> thực  phẩm;  thực  phẩm  bổ  sung  vitamin <br /> thường là những nền mẫu phức tạp; có những <br /> vitamin  được  bổ  sung  với  hàm  lượng  thấp; <br /> một vài vitamin dễ bị phân hủy bởi ánh sáng, <br /> không khí và nhiệt độ. Nhiều phương pháp đã <br /> được  nghiên  cứu  để  có  thể  xác  định  vitamin <br /> nhóm  B  trong  thực  phẩm  và  thực  phẩm  bổ <br /> sung.  Blake  và  Konings  đã  tổng  hợp  nhiều <br /> phương  pháp  phân  tích  vitamin  nhóm  B  bao <br /> gồm kỹ thuật vi sinh, HPLC, biosensor/ ELISA. <br /> Trước đây kỹ thuật vi sinh được sử dụng khá <br /> phổ  biến  có  thể  phân  tích  vitamin  B  ở  hàm <br /> lượng  thấp.  Kỹ  thuật  này  phụ  thuộc  vào  sự <br /> phát  triển  của  những  vi  sinh  vật  đặc  trưng <br /> thực  hiện  phản  ứng  sinh  hóa  cho  từng  loại <br /> vitamin.  Chẳng  hạn  như  định  lượng  thiamine <br /> ở  hàm  lượng  vết  với  sự  hiện  diện  của <br /> L.viridescens(6). Quá trình ủ mất 16‐20 giờ ở 30 ± <br /> 20C  và  có  độ  lặp  lại  kém.  Do  đó  hạn  chế  lớn <br /> nhất  của  kỹ  thuật  vi  sinh  là  tốn  nhiều  thời <br /> gian,  không  thể  phân  tích  nhiều  loại  vitamin <br /> cùng lúc, độ lặp lại kém nên không được xem <br /> là  phương  pháp  tối  ưu  cho  việc  phân  tích <br /> vitamin(2). <br /> <br /> Chuyên Đề Y Tế Công Cộng <br /> <br /> Kỹ  thuật  sắc  ký  lỏng  với  đầu  dò  UV  có  thể <br /> đo được một hoặc một vài vitamin B trong thực <br /> phẩm  như  việc  định  lượng  niacin  trong  sữa <br /> dùng  HPLC  là  một  phương  pháp  của  AOAC. <br /> Một vài loại vitamin với hàm lượng thấp nên độ <br /> nhạy  kém  không  thể  đo  trực  tiếp  được.  Chẳng <br /> hạn như để có thể đo được thiamine trong mẫu <br /> thực  phẩm  với  hàm  lượng  thấp  phải  chuyển <br /> thiamine về dạng thiochrome, tiến hành đo trên <br /> máy  HPLC  –  RF  (AOAC  986.27)(1).  Kết  quả  là <br /> ứng với từng loại vitamin mà ta có phương pháp <br /> xác định khác nhau dẫn đến việc tốn nhiều thời <br /> gian cũng như chi phí. Nhu cầu phân tích ngày <br /> càng  tăng  với  mong  muốn  có  thể  định  lượng <br /> đồng  thời  nhiều  loại  vitamin  B  trong  một  lần <br /> chay là xu hướng phát triển ngày nay.  <br /> Kỹ  thuật  LC‐MS/MS  có  thể  đáp  ứng  các <br /> yêu  cầu  trên  như  phân  tích  đồng  thời  nhiều <br /> vitamin B nhưng vẫn đảm bảo độ chính xác và <br /> độ đúng. Hơn nữa kỹ thuật này có độ nhạy và <br /> độ  đặc  hiệu  cao  thích  hợp  phân  tích  những <br /> mẫu có hàm lượng thấp và nền phức tạp. Qui <br /> trình  xử  lý  mẫu  đơn  giản,  nhanh  giúp  tiết <br /> kiệm  đáng  kể  thời  gian  phân  tích.  Với  những <br /> ưu  điểm  vừa  nêu,  kỹ  thuật  LC‐MS/MS  được <br /> chọn để tiến hành xây dựng qui trình xác định <br /> hàm lượng vitamin B trong sữa. <br /> <br /> ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU <br /> Đối tượng nghiên cứu <br /> 31 mẫu sữa bột bổ sung vi chất dinh dưỡng <br /> được thu thập ngẫu nhiên tại các chợ và siêu thị <br /> trên địa bàn thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 7 <br /> đến tháng 11 năm 2013. <br /> <br /> Hóa chất – Thiết bị – Dụng cụ <br /> Thiết bị – Dụng cụ <br /> Hệ  thống  sắc  ký  lỏng  ghép  khối  phổ  LC‐<br /> MS/MS  bao  gồm  khối  phổ  ba  tứ  cực  AB  Sciex <br /> Qtrap 5500 với nguồn ion hóa Turbo‐V ghép nối <br /> với  sắc  ký  lỏng  Shimadzu  UFLCXR  bao  gồm <br /> bơm  Shimadzu  20ADXR,  bộ  tiêm  mẫu <br /> Shimadzu  SIL‐20ACXR,  bộ  điều  khiển <br /> <br /> 703<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014<br /> <br />  <br /> Shimadzu CBM‐20A. Toàn bộ hệ thống sắc ký và <br /> khối  phổ  được  kiểm  soát,  điều  khiển  bởi  phần <br /> mềm Analyst 1.5.1 của hang AB Sciex. Cột phân <br /> tích  được  sử  dụng  là  cột  HiQ  sil  C18HS‐3  4.6  x <br /> 150 mm, kích thước hạt 3 μm và cột bảo vệ được <br /> cung cấp bởi All‐tech. <br /> Các thiết bị, dụng cụ thông thường khác: cân <br /> phân  tích,  máy  ly  tâm,  máy  lắc,  dụng  cụ  thủy <br /> tinh (bình mức, pipet). <br /> <br /> Hóa chất – Chất chuẩn <br /> Hóa chất: loại tinh khiết dùng cho HPLC <br /> Các  chất  chuẩn:  vitamin  B1  (thiamine <br /> hydrochloride),  vitamin  B2  (riboflavin),  vitamin <br /> B3  (nicotinamide),  vitamin  B6  (pyridoxine <br /> hydrochloride)  của  Sigma  –  Aldrich  có  độ  tinh <br /> khiết > 98%. <br /> <br /> Phương pháp nghiên cứu <br /> Xử lý mẫu <br /> Qui trình xử lý mẫu đóng góp tới 80% sai số <br /> của kết quả phân tích, do đó việc tìm ra qui trình <br /> xử lý mẫu thích hợp là điều quan trọng. Hầu hết <br /> các vitamin B1, B2, B3 và B6 nhạy cảm với nhiệt <br /> độ, ánh sáng nên dễ bị phân hủy trong thời gian <br /> ngắn. Việc chiết các vitamin này từ nền mẫu sữa <br /> bột cần lưu ý đến tính bền vững của chúng như <br /> điều  kiện  pH,  nhiệt  độ,  ánh sáng,  tác  nhân oxy <br /> hóa từ môi trường, lực ion và sự có mặt của các <br /> ion kim loại nặng có trong mẫu. <br /> <br /> Phương pháp phân tích <br /> Vitamin  B1,  B2,  B3  và  B6  được  phân  tích <br /> định  tính  và  định  lượng  bằng  LC‐MS/MS. <br /> Khảo sát lựa chọn mảnh ion mẹ và ion con, sử <br /> dụng  mảnh  ion  con  cho  tín  hiệu  lớn  nhất  để <br /> định  lượng,  lấy  thêm  một  mảnh  ion  con  khác <br /> để định tính. <br /> <br /> Xác định giá trị sử dụng của phương pháp <br /> Thực  hiện  đánh  giá  các  thông  số  kỹ  thuật <br /> bao gồm khoảng tuyến tính, giới hạn phát hiện <br /> và giới hạn định lượng, độ lặp lại, độ chính xác <br /> trung  gian,  độ  đúng  và  hiệu  suất  thu  hồi  của <br /> phương pháp. <br /> <br /> 704<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN <br /> Khảo sát điều kiện khối phổ <br /> Trong kỹ thuật ion hóa phun điện tử với chế <br /> độ  bắn  ion  dương,  các  ion  mẹ  thường  ở  dạng <br /> (M+1). Để thu được mảnh ion con có tín hiệu cao <br /> thì cần phải chọn được mức năng lượng bắn phá <br /> thích  hợp.  Tiến  hành  khảo  sát  bắn  phá  các  ion <br /> mẹ, kết quả được trình bày trong bảng 1. <br /> Bảng 1: Kết quả khảo sát ion mẹ và ion con (cặp ion <br /> được in đậm là cặp ion định lượng, cặp ion còn lại là <br /> cặp ion định tính) <br /> Chất phân<br /> tích<br /> Vitamin B1<br /> Vitamin B1<br /> Vitamin B2<br /> Vitamin B2<br /> Vitamin B3<br /> Vitamin B3<br /> Vitamin B6<br /> Vitamin B6<br /> <br /> Ion mẹ<br /> (m/z)<br /> 265<br /> 265<br /> 377<br /> 377<br /> 124<br /> 124<br /> 170<br /> 170<br /> <br /> Ion con<br /> (m/z)<br /> 122<br /> 144<br /> 243<br /> 198<br /> 80<br /> 78<br /> 134<br /> 152<br /> <br /> DP (V) CE (eV)<br /> 35<br /> 35<br /> 70<br /> 70<br /> 60<br /> 60<br /> 45<br /> 45<br /> <br /> 21<br /> 21<br /> 35<br /> 35<br /> 30<br /> 30<br /> 31<br /> 31<br /> <br /> Khảo sát điều kiện sắc ký lỏng <br /> Pha động: <br /> +  Pha  động  A  (Acetonitrile  bổ  sung  0,05% <br /> Acid formic) <br /> +  Pha  động  B  (H2O  bổ  sung  0,05%  Acid <br /> formic) <br /> Bảng 2: Chương trình gradient nồng độ <br /> Thời gian (phút)<br /> Pha động<br /> Tỷ lệ nồng độ (%)<br /> 0,01<br /> B<br /> 100<br /> 13,00<br /> B<br /> 35<br /> 13,01<br /> B<br /> 100<br /> 14,00<br /> Dừng chương trình<br /> <br /> Tốc độ dòng: 0,5 mL/phút. <br /> Thể tích bơm mẫu: <br /> <br /> 5 μL. <br /> <br /> Cột  phân  tách:  Cột  HiQ  sil  C18HS‐3,  4.6  x <br /> 150 mm, kích thước hạt 3μm với bộ phận bảo <br /> vệ cột. <br /> <br /> Xử lý mẫu <br /> Quá  trình  xử  lý  mẫu  được  thực  hiện  như <br /> sau: cân 1g mẫu đã đồng nhất vào tube nhựa 50 <br /> ml. Thêm 50 ml dung dịch chiết 5mM HCl chứa <br /> 20% MeOH cho mỗi tube. Mẫu được lắc Vortex <br /> <br /> Chuyên Đề Y Tế Công Cộng <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 <br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br />  <br /> và  siêu  âm  30  phút.  Sau  đó  ly  tâm  4500  vòng <br /> trong  4  phút.  Lọc  qua  màng  PTFE  0,45μm  vào <br /> vial màu nâu. Đem vial tiến hành phân tích mẫu <br /> trên máy sắc ký lỏng ghép khối phổ 2 lần. Dung <br /> dịch 5mM HCl chứa 20% MeOH được chọn làm <br /> dung dịch chiết vì những lý do sau đây: <br /> Vitamin B1 có bản chất ion nên có khả năng <br /> hấp phụ lên thành bình, dung dung dịch có tính <br /> acid mạnh chống lại ảnh hưởng này (vitamin B1 <br /> ổn  định  hơn  10  tiếng  sau  khi  chiết  bằng  5mM <br /> HCl trong khi trước đó dung dịch pH 7 thì sau 1 <br /> tiếng vitamin B1 giảm 30% tín hiệu). <br /> Sử  dụng  dung dịch  5mM  HCl  có  chứa  20% <br /> MeOH để tủa protein trong mẫu sữa, sau khi ly <br /> tâm  lấy  phần  dung  dịch  nổi  phía  trên  lọc  qua <br /> màng PTFE dễ dàng hơn. <br /> Qui  trình  xử  lý  mẫu  đơn  giản,  nhanh,  giúp <br /> tiết kiệm đáng kể thời gian phân tích cũng như <br /> hạn  chế  đáng  kể  sự  phân  hủy  của  các  vitamin <br /> B1, B2, B3 và B6. <br /> <br /> Các thông số của phương pháp phân tích <br /> Khoảng tuyến tính <br /> Khoảng tuyến tính của hỗn hợp các vitamin <br /> với  nồng độ  từ  0,05  đến  0,6  mg/kg  cho  kết  quả <br /> như trong bảng 3. <br /> Bảng 3: Các thông số về khoảng tuyến tính của <br /> chuẩn các chất phân tích <br /> Chất phân<br /> tích<br /> Vitamin B1<br /> Vitamin B2<br /> Vitamin B3<br /> Vitamin B6<br /> <br /> Khoảng nồng độ<br /> 2<br /> Hệ số tương quan R<br /> (mg/kg)<br /> 0,9991<br /> 0,9996<br /> 0,05 – 0,1 – 0,2 –<br /> 0,4 – 0,6<br /> 0,9993<br /> 0,9982<br /> <br /> Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của <br /> phương pháp <br /> Phân tích các mẫu trắng thêm chuẩn ở nồng <br /> độ thấp và xác định tỷ lệ S/N, LOD và LOQ lần <br /> lượt được xác định tại các giá trị S/N tương ứng <br /> là 3 và 10. Qua thực nghiệm cho giá trị LOD từ <br /> <br /> Độ chính xác của phương pháp phân tích <br /> Độ lặp lại <br /> Qua quá trình phân tích mẫu xác định độ lặp <br /> lại  của  phương  pháp  trong  cùng  một  lần  thí <br /> nghiệm,  chúng  tôi  nhận  thấy  độ  lặp  lại  của <br /> phương pháp có hệ số biến động (% RSD) nằm <br /> trong khoảng từ 5.55 đến 8.82. Chất phân tích có <br /> hệ  số  biến  động  thấp  nhất  trên  cùng  một  thí <br /> nghiệm là vitamin B2 và chất có hệ số biến động <br /> cao nhất trên cùng một thí nghiệm là vitamin B1. <br /> Kết quả chi tiết được trình bày trong bảng 4. <br /> Độ tái lặp nội bộ <br /> Qua quá trình phân tích mẫu xác định độ tái <br /> lặp  nội  bộ  của  phương  pháp  tại  phòng  thí <br /> nghiệm  trong  các  ngày  phân  tích  khác  nhau, <br /> chúng  tôi  nhận  thấy  độ  tái  lặp  nội  bộ  của <br /> phương pháp có hệ số biến động (% RSD) nằm <br /> trong khoảng từ 6,27 đến 9,10. Chất phân tích có <br /> hệ  số  biến  động  thấp  nhất  trên  các  ngày  phân <br /> tích  khác  nhau  là  vitamin  B3  và  chất  có  hệ  số <br /> biến động cao nhất trên các ngày phân tích khác <br /> nhau  là  vitamin  B2.  Kết  quả  chi  tiết  được  trình <br /> bày trong bảng 4. <br /> Độ đúng của phương pháp phân tích <br /> Độ  đúng  của  phương  pháp  phân  tích  được <br /> đánh giá dựa trên việc xác định mẫu CRM thong <br /> qua độ chệch (bias). Mẫu CRM có mã số là SRM <br /> 1894a  được  cung  cấp  bởi  tổ  chức  National <br /> Institue  of  Standard  &  Technology.  Qua  quá <br /> trình thực nghiệm chúng tôi thu được độ chệch <br /> nằm trong khoảng 2.39% đến 11.66%. Độ chệch <br /> thấp  nhất  là  vitamin  B1  và  cao  nhất  là  vitamin <br /> B6. Kết quả chi tiết được trình bày trong bảng 4. <br /> Hơn  nữa  khi  so  với  giá  trị  nồng  độ  được  cung <br /> cấp trong CA của mẫu CRM chúng tôi thu được <br /> độ thu hồi  của  từng  chất  phân tích. Độ thu hồi <br /> nằm  trong  khoảng  88%  đến  100%,  trong  đó  độ <br /> thu hồi của vitamin B1, B2, B3 và B6 lần lượt là <br /> 98%, 95%, 100% và 88%. <br /> <br /> 0,010 đến 0,015 mg/kg và LOQ từ 0,030 đến 0,045 <br /> <br /> Hiệu suất thu hồi của phương pháp <br /> <br /> mg/kg.  Kết  quả  chi  tiết  được  trình  bày  trong <br /> <br /> Hiệu  suất  thu  hồi  của  phương  pháp  được <br /> khảo sát tại các nồng độ 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg và <br /> <br /> bảng 4. <br /> <br /> Chuyên Đề Y Tế Công Cộng <br /> <br /> 705<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014<br /> <br />  <br /> 0,4 mg/kg. Qua quá trình thực nghiệm chúng tôi <br /> vitamin B3. Kết quả này phù hợp khi so sánh với <br /> nhận  thấy hiệu  suất thu  hồi trung  bình  của  các <br /> độ thu hồi khi thực hiện trên mẫu CRM. Kết quả <br /> vitamin  từ  82.25%  đến  101.97%.  Hiệu  suất  thu <br /> chi tiết được trình bày trong bảng 4. <br /> hồi  thấp  nhất  là  vitamin  B6  và  cao  nhất  là <br /> Bảng 4: Bảng thông số giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, độ lặp lại, độ tái lặp nội bộ, độ chệch và hiệu suất <br /> thu hồi của phương pháp phân tích <br /> Chất phân<br /> tích<br /> Vitamin B1<br /> Vitamin B2<br /> Vitamin B3<br /> Vitamin B6<br /> <br /> Giới hạn phát hiện<br /> (mg/kg)<br /> 0,014<br /> 0,010<br /> 0,010<br /> 0,015<br /> <br /> Giới hạn định lượng<br /> (mg/kg)<br /> 0,043<br /> 0,030<br /> 0,031<br /> 0,045<br /> <br /> Độ lặp lại<br /> (% RSD)<br /> 8,82<br /> 5,55<br /> 5,16<br /> 7,37<br /> <br /> Độ tái lặp nội bộ Độ chệch<br /> (% RSD)<br /> (%)<br /> 7,35<br /> 6,73<br /> 9,10<br /> 8,27<br /> 4,95<br /> 5,21<br /> 8,58<br /> 11,22<br /> <br /> Hiệu suất<br /> thu hồi (%)<br /> 93,50<br /> 100,93<br /> 101,97<br /> 85,25<br /> <br /> địa  bàn  thành  phố  Hồ  Chí  Minh.  Các  kết  quả <br /> được tổng hợp trong bảng sau: <br /> <br /> Kết quả phân tích mẫu thực tế <br /> <br /> Áp dụng qui trình đã xây dựng để phân tích <br /> các mẫu sữa bột bổ sung vi chất dinh dưỡng trên <br /> Bảng 5: Kết quả hàm lượng vitamin B1, B2, B3 và B6 trong mẫu sữa bột <br /> Mã số<br /> S - 01<br /> S - 02<br /> S - 03<br /> S - 04<br /> S - 05<br /> S - 06<br /> S - 07<br /> S - 08<br /> S - 09<br /> S - 10<br /> S - 11<br /> S - 12<br /> S - 13<br /> S - 14<br /> S - 15<br /> <br /> B1<br /> 3,21<br /> 6,99<br /> 10,50<br /> 6,83<br /> 25,85<br /> 8,43<br /> 8,70<br /> 8,91<br /> <br /> Kết quả (mg/kg)<br /> B2<br /> B3<br /> 7,96<br /> 36,28<br /> 6,70<br /> 84,43<br /> 7,89<br /> 102,24<br /> 6,58<br /> 98,13<br /> 27,41<br /> 76,07<br /> 8,74<br /> 56,60<br /> 9,36<br /> 72,00<br /> 8,43<br /> 86,62<br /> <br /> 11,01<br /> 14,08<br /> 9,39<br /> 9,63<br /> 2,12<br /> 9,30<br /> <br /> 9,36<br /> 10,79<br /> 8,53<br /> 6,81<br /> 13,62<br /> 8,48<br /> <br /> 83,55<br /> 79,04<br /> 87,19<br /> 71,36<br /> 6,23<br /> 91,29<br /> <br /> B6<br /> 4,84<br /> 8,18<br /> 6,36<br /> 8,83<br /> 29,58<br /> 5,47<br /> 11,42<br /> 10,59<br /> 7,09<br /> 10,53<br /> 13,31<br /> 12,68<br /> 9,1<br /> 1,90<br /> 11,95<br /> <br /> Nhận  xét: hàm  lượng  vitamin B1,  B2,  B3  và <br /> B6 thu được khi so sánh với hàm lượng của các <br /> chất được nhà sản xuất ghi trên bao bì, kết quả <br /> sai khác trong khoảng 10%.  <br /> <br /> KẾT LUẬN  <br /> Qua nghiên cứu chúng tôi đã xây dựng được <br /> một phương pháp đơn giản, nhanh, có độ tin cậy <br /> cao  để  xác  định  đồng  thời  hàm  lượng  các <br /> vitamin B1, B2, B3 và B5 trong nền mẫu sữa bột <br /> bổ sung vi chất dinh dưỡng. Phương pháp này <br /> được tiến hành nhanh chóng, độ nhạy và độ đặc <br /> hiệu cao nhờ sử dụng công cụ phân tích hiện đại <br /> <br /> 706<br /> <br /> Mã số<br /> S - 16<br /> S - 17<br /> S - 18<br /> S - 19<br /> S - 20<br /> S - 21<br /> S - 22<br /> S - 23<br /> S - 24<br /> S - 25<br /> S - 26<br /> S - 27<br /> S - 28<br /> S - 29<br /> S - 30<br /> S - 31<br /> <br /> B1<br /> 18,09<br /> 15,43<br /> 4,34<br /> 10,84<br /> 18,07<br /> 4,83<br /> 6,77<br /> 6,76<br /> 4,79<br /> 3,63<br /> 3,94<br /> 6,13<br /> 3,89<br /> 6,03<br /> 7,65<br /> 14,87<br /> <br /> Kết quả (mg/kg)<br /> B2<br /> B3<br /> 17,96<br /> 98,08<br /> 16,77<br /> 205,67<br /> 8,65<br /> 45,04<br /> 8,74<br /> 91,29<br /> 22,63<br /> 188,01<br /> 5,69<br /> 58,13<br /> 8,81<br /> 53,81<br /> 7,07<br /> 59,13<br /> 6,97<br /> 68,52<br /> 9,01<br /> 32,71<br /> 9,65<br /> 34,47<br /> 12,39<br /> 48,94<br /> 9,65<br /> 63,05<br /> 9,40<br /> 60,20<br /> 8,03<br /> 69,15<br /> 16,50<br /> 202,74<br /> <br /> B6<br /> 10,20<br /> 21,19<br /> 3,30<br /> 11,95<br /> 18,83<br /> 4,15<br /> 8,80<br /> 5,90<br /> 6,28<br /> 3,17<br /> 3,69<br /> 6,77<br /> 3,15<br /> 2,80<br /> 3,30<br /> 20,31<br /> <br /> là hệ thống sắc ký ghép khối phổ ba tứ cực. Qui <br /> trình  phân  tích  có  độ  đúng  được  kiểm  chứng <br /> thông qua việc xác định trên mẫu CRM. Độ lặp <br /> lại của phương pháp có hệ số biến động (% RSD) <br /> từ  5,16  đến  8,82.  Độ  tái  lặp  nội  bộ  của  phương <br /> pháp  có  hệ  số  biến  động  (%  RSD)  từ  4,95  đến <br /> 9,10.  Giới  hạn  định  lượng  của  phương  pháp  từ <br /> 0,010 mg/kg đến 0,015 mg/kg.  <br /> <br /> KIẾN NGHỊ <br /> Mở  rộng  phương  pháp  để  phân  tích  các <br /> đối tượng thực phẩm khác và các loại vitamin <br /> <br /> Chuyên Đề Y Tế Công Cộng <br /> <br />