Xây dựng quy trình định lượng đồng thời Triamcinolon, Methylparaben và Propylparaben trong chế phẩm dạng gel bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI TRIAMCINOLON,<br /> METHYLPARABEN VÀ PROPYLPARABEN<br /> TRONG CHẾ PHẨM DẠNG GEL BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG<br /> HIỆU NĂNG CAO<br /> Nguyễn Hữu Lạc Thủy*, Trần Hữu Tài*, Võ Thị Bạch Huệ*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu – Mục tiêu nghiên cứu: Triamcinolon acetonid (TA) là glucocorticoid được sử dụng khá phổ biến<br /> để điều trị các triệu chứng viêm. Các dạng bào chế dùng ngoài của TA được sử dụng phổ biến như dạng kem,<br /> thuốc mỡ; dạng bào chế gel của TA là dạng bào chế hiện đại. Trong các dạng bào chế này thường có hai chất bảo<br /> quản methylparaben (MPB) và propylparaben (PPB). Các tiêu chuẩn kiểm nghiệm phần lớn tập trung định<br /> lượng hoạt chất chính, các chất bảo quản được phân tích với mức chất lượng xác định giới hạn. Vì vậy, chúng tôi<br /> thực hiện đề tài với mục tiêu xây dựng và thẩm định quy trình định lượng đồng thời cả 03 đối tượng<br /> triamcinolon acetonid, methylparaben và propylparaben trong chế phẩm gel bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu<br /> năng cao (HPLC).<br /> Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát các điều kiện hòa tan mẫu; các điều kiện sắc ký để định<br /> lượng đồng thời triamcinolon acetonid, methylparaben và propylparaben trong chế phẩm dạng gel có hàm lượng<br /> TA (0,1 %); MPB (0,18 %) và PPB (0,02 %).<br /> Kết quả: Xác định dung môi hòa tan mẫu thử dạng gel và các điều kiện sắc ký thích hợp để tách hoàn toàn<br /> các đối tượng phân tích bằng phương pháp HPLC. Quy trình được thẩm định theo ICH. Dung dịch thử: cân 1,5g<br /> gel; chiết bằng methanol; điền đầy trong bình định mức 50 ml, thu được dung dịch thử nghiệm. Dung dịch đối<br /> chiếu: các chất đối chiếu được pha trong methanol với các nồng độ 30; 54 và 6 ppm tương ứng với TA, MPB và<br /> PPB. Điều kiện sắc ký: Cột C18 Knauer (150 x 4,6 mm; 5 m); pha động: acetonitril  nước (50 : 50); nhiệt độ cột:<br /> 40 oC; tốc độ dòng: 1 ml/phút; thể tích tiêm: 20 µl; đầu dò PDA (255 nm). Kết quả thẩm định: quy trình đạt độ<br /> đặc hiệu; phương trình đường tuyến tính ŷ = 29146x; ŷ = 123076x và ŷ = 104666x tương ứng với TA; MPB và<br /> PPB – các hệ số tương quan R2 ≥ 0,999; độ lặp lại và độ chính xác trung gian đều có RSD% < 2 %; độ đúng với tỷ<br /> lệ phục hồi trong giới hạn 98 – 102 %; giới hạn phát hiện – giới hạn định lượng lần lượt của TA (0,30 và 0,99<br /> µg/ml); MPB (5,20 và 17,76 µg/ml) và PPB (0,10 và 0,33 µg/ml).<br /> Kết luận: xây dựng thành công quy trình định lượng đồng thời TA, MPB và PPB bằng HPLC. Quy trình<br /> đạt tất cả các yêu cầu về thẩm định nên có thể ứng dụng để xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho chế phẩm dạng<br /> gel có thành phần TA, MPB và PPB.<br /> Từ khóa: HPLC, triamcinolon acetonid, methylparaben, propylparaben.<br /> ABTRACT<br /> SIMULTANEOUS QUANTITATIVE DETERMINATION TRIAMCINOLONE ACETONIDE,<br /> METHYLPARABEN AND PROPYLPARABEN IN GEL PRODUCT BY HIGH PERFORMANCE LIQUID<br /> CHROMATOGRAPHY (HPLC) METHOD<br /> Nguyen Huu Lac Thuy, Tran Huu Tai, Vo Thi Bach Hue<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 2 - 2016: 365 - 370<br /> <br /> <br /> *Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: TS. Nguyễn Hữu Lạc Thủy ĐT: 0903 838 274 Email: nguyenhuulacthuy@gmail.com<br /> <br /> Chuyên Đề Dược 365<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> Background – Objectives: Triamcinolone acetonide (TA) is a glucocorticoid used to treat fairly common<br /> symptoms of arthritis. The dosage forms for external use of TA are commonly used as creams, ointments; gels<br /> dosage forms of TA is a modern dosage form. In dosage forms often have methylparaben (MPB) and<br /> propylparaben (PPB). The assay focus largely quantitative main active ingredient, the preservative is analyzed to<br /> determine the quantitative limits. Hence, development method with high precision and low detection limit<br /> (HPLC) for simultaneous quantitative determination of TA, MPB and PPB in gels dosage forms is necessary.<br /> Methods: HPLC method with PDA detector mode were developed for simultaneous quantitative<br /> determination of TA, MPB and PPB in gels dosage forms. The suitable chromatography conditions were found<br /> out for complete separation of TA, MPB and PPB.<br /> Results: Test solution: 1.5 g sample was extracted by methanol in 50 ml volumetric flash. Reference solution:<br /> a solution containing 30; 54 and 6 ppm each of triamcinolone; methylparaben and propylparaben RS in mobile<br /> phase. A mixture of TA, MPB and PPB in sample were completely separated with chromatographic conditions: a<br /> stainless steel column (150 x 4.6 mm), packed with octadecylsilane bonded to porous silica (5 m); mobile phase: a<br /> mixture of 50 volumes of acetonitrile and 50 volumes of water; isocratic mode; flow rate 1 ml per minute; injection<br /> volume 20 µl; column temperature 40 oC; PDA at 255 nm. These methods were validated and showed linearity<br /> range ŷ = 29146x; ŷ = 123076x and ŷ = 104666x respectively TA, MBP and PPB, with high correlation coefficient<br /> (R2 > 0.999), accuracy with recovery ratio in 98 – 102 % and precision with RSD ≤ 2.0 %; LOD and LOQ are<br /> (0.30; 0.99); MPB (5.20; 17.76) and PPB (0.10 and 0.33) µg/ml respectively TA, MBP and PPB.<br /> Conclusions: HPLC method was successfully developed for TA, MPB and PPB in gels dosage form.<br /> Key words: HPLC, triamcinolone acetonide, methylparaben and propylparaben.<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ chất lượng thuốc có thành phần là các chất bảo<br /> quản nhóm paraben.<br /> Triamcinolon acetonid (TA) là glucocorticoid<br /> được sử dụng khá phổ biến để điều trị các triệu PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> chứng viêm. Các dạng bào chế dùng ngoài của Đối tượng<br /> TA được sử dụng phổ biến như dạng kem, thuốc Triamcinolon acetonid (TA), methylparaben<br /> mỡ; dạng bào chế gel của TA là dạng bào chế (MPB) và propylparaben (PPB) có trong chế<br /> hiện đại. Trong các dạng bào chế này thường có phẩm gel với hàm lượng trong 1 đơn vị gel (10<br /> song song hai chất bảo quản methylparaben g): TA (0,1 %); MPB (0,18 %) và PPB (0,02 %).<br /> (MPB) và propylparaben (PPB). Một vài công<br /> trình nghiên cứu về phương pháp định lượng Chất đối chiếu<br /> triamcinolon bằng quang phổ Uv-Vis(2), HPLC(1), TA (98,12%), MPB (99,95%) và PPB (99,93%)<br /> định lượng đồng thời MPB và PPB bằng HPLC , (3) do Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Tp. HCM phân<br /> định lượng đồng thời hydrocortison, MPB và phối.<br /> PPB bằng HPLC(5). Các tiêu chuẩn kiểm nghiệm Dung môi – Hóa chất<br /> phần lớn tập trung định lượng hoạt chất chính, Methanol, acetonitril do Merck sản xuất và<br /> các chất bảo quản được phân tích với mức chất nước cất dùng cho HPLC.<br /> lượng xác định giới hạn. Vì vậy, chúng tôi thực<br /> Thiết bị<br /> hiện đề tài với mục tiêu xây dựng và thẩm định<br /> quy trình định lượng đồng thời cả 03 đối tượng Hệ thống HPLC Alliance 2695-2996, đầu dò<br /> triamcinolon acetonid, methylparaben và PDA; cột C18 Knauer (250 x 4,6 mm; 5m).<br /> propylparaben trong chế phẩm gel bằng phương Phương pháp nghiên cứu<br /> pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Kết quả<br /> nghiên cứu sẽ góp phần vào công tác đánh giá<br /> <br /> <br /> 366 Chuyên Đề Dược<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Khảo sát điều kiện phân tích TA, MPB, PPB bằng (III) acetonitril - acid acetic 1%. Tiến hành sắc ký<br /> HPLC: trên mẫu đối chiếu và mẫu thử với các pha động<br /> Xử lý mẫu: khảo sát dung môi chiết là hệ dung môi (I) với các tỷ lệ thay đổi.<br /> (methanol, acetonitril và cloroform); số lần Kết quả khảo sát cho thấy: với dung môi<br /> chiết lên mẫu gel để chọn dung môi và số lần methanol – nước (50:50) cho sắc ký đồ có các<br /> chiết cho hiệu quả chiết lớn nhưng ít tạp chất thông số sắc ký đáp ứng các yêu cầu, vì vậy chọn<br /> hòa tan theo. tỷ lệ này để khảo sát tiếp trên hệ (II) và (III). Kết<br /> Thành phần và pH pha động: methanol và quả khảo sát được trình bày ở bảng 1 như sau:<br /> acetonitril được phối hợp với nước hoặc dung Bảng 1: Kết quả khảo sát pha động<br /> dịch acid có pH thay đổi nhằm tìm pha động cho Pha TR<br /> S (µV*sec)<br /> Rs (Rs ≥ AF (0,8 –<br /> động (phút) 1,5 ) 1,5)<br /> các thông số sắc ký đạt yêu cầu.<br /> MPB 5,4 6666777 16,8 1,6<br /> Xây dựng và thẩm định quy trình phân tích TA, Hệ I TA 13,7 655287 16,8 1,2<br /> MPB, PPB bằng HPLC: PPB 16,7 880169 4,1 1,2<br /> Tổng hợp các điều kiện khảo sát để xây dựng MPB 4,1 6644019 3,6 1,7<br /> Hệ II TA 4,7 847872 3,6 1,6<br /> quy trình định lượng đồng thời TA, MPB và PPB<br /> PPB 5,9 643580 5,7 1,6<br /> bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao. Xác định khả<br /> MPB 3,9 6526272 3,4 1,8<br /> năng phù hợp của quy trình lên hệ thống thử<br /> Hệ III TA 4,6 814166 3,4 1,6<br /> nghiệm.<br /> PPB 5,7 647309 5,2 1,6<br /> Việc thẩm định được tiến hành theo hướng<br /> Từ kết quả khảo sát ở bảng 1 cho thấy hệ<br /> dẫn của ICH(4) với các yêu cầu về tính đặc hiệu,<br /> dung môi (II) acetonitril – nước được lựa chọn,<br /> khoảng tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, giới<br /> tuy nhiên hệ số bất đối AF tương đối lớn. Vì vậy,<br /> hạn phát hiện, giới hạn định lượng.<br /> giải pháp giảm chiều dài cột được tiến hành để<br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN cải thiện hệ số này và giảm thời gian phân tích.<br /> Khảo sát quy trình xử lý mẫu Bảng 2: Kết quả phân tích giữa cột sắc ký 150 và 250<br /> Dung dịch đối chiếu: các chất đối chiếu được (mm)<br /> TR Rs (≥ 1,5 AF (0,8–<br /> pha trong pha động, các nồng độ 30; 54 và 6 ppm Cột S (µV*sec)<br /> (phút) ) 1,5 )<br /> tương ứng với TA, MPB và PPB. Dung dịch thử: MPB 4,0 6644019 3,7 1,7<br /> 250<br /> cân 1,5 g gel; chiết 3 lần (20; 20; 10 ml) dung môi (mm) TA 4,7 847872 3,7 1,6<br /> (acetonitril, methanol hoặc cloroform), siêu âm PPB 5,9 643580 5,7 1,6<br /> trong 30 phút ở 50 oC. Để nguội, cho vào bình MPB 2,1 6542446 4,0 1,4<br /> 150<br /> định mức 50 ml và điền đầy bằng dung môi TA 2,6 888797 4,0 1,2<br /> (mm)<br /> PPB 3,4 657714 5,6 1,2<br /> tương ứng.<br /> Kết quả ở bảng 2 cho thấy hệ số bất đối và<br /> Kết quả khảo sát cho thấy dịch chiết bằng<br /> dung môi methanol cho diện tích pic của các tổng thời gian phân tích được cải thiện khi<br /> chất khảo sát tương ứng với diện tích pic của giảm chiều dài cột còn 150 mm. Vì vậy, chọn<br /> dung dịch hỗn hợp chất đối chiếu tương ứng về cột C18 (150 nm x 4,6 mm, 5 µm) cho các thử<br /> nồng độ. Vì vậy chọn methanol làm dung môi nghiệm tiếp theo.<br /> chiết hoạt chất trong mẫu thử. Quy trình định lượng<br /> Kết quả khảo sát pha động Mẫu trắng: pha động theo tỷ lệ khảo sát.<br /> Khảo sát các tỷ lệ pha động trên các hệ dung Mẫu placebo: hỗn hợp thành phần tương tự<br /> môi: (I) methanol - nước; (II) acetonitril - nước; như chế phẩm gel, không có các đối tượng<br /> nghiên cứu. Dung dịch đối chiếu: các chất đối<br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Dược 367<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> chiếu được pha trong pha động, các nồng độ hệ thống, kết quả trình bày ở bảng 3; 4 và 5 của<br /> 30; 54 và 6 ppm tương ứng với TA, MPB và các pic TA; PPB và MPB.<br /> PPB. Bảng 3: Kết quả khảo sát tính phù hợp hệ thống của<br /> Dung dịch thử: cân 1,5 g gel cho vào cốc có mẫu đối chiếu TA<br /> mỏ, siêu âm trong 30 phút ở 50 oC với (20; 20; 10 TR<br /> S H AF Rs N<br /> (phút)<br /> ml) methanol. Gộp các dịch chiết methanol, cho<br /> TB 2,62 893519 186176 1,26 3,81 7337<br /> vào bình định mức 50 ml và điền đầy bằng<br /> RSD<br /> methanol. %<br /> 0,16 0,39 0,38 0,44 0,31 0,58<br /> <br /> Điều kiện sắc ký: cột Eurospher II 100 C18 Bảng 4: Kết quả khảo sát tính phù hợp hệ thống của<br /> (150 x 4,6 mm; 5 m); pha động: acetonitril  mẫu đối chiếu MPB<br /> nước (50 : 50); nhiệt độ cột: 40 oC; tốc độ dòng: TR<br /> S H AF Rs N<br /> 1 ml/phút; thể tích tiêm: 20 µl; đầu dò PDA tại (phút)<br /> 255 nm. TB 2,18 6611869 1480768 1,34 3,81 5948<br /> RSD% 0,0 0,27 0,32 0,31 0,31 0,43<br /> Hàm lượng mg của TA, MPB, PPB trong 1<br /> đơn vị 10 g được tính theo công thức: Bảng 5: Kết quả khảo sát tính phù hợp hệ thống của<br /> mẫu đối chiếu PPB<br /> TR<br /> S H AF Rs N<br /> (phút)<br /> Trong đó: TB 3,41 648915 95182 1,245 5,29 5932<br /> - Sc: diện tích pic của chất đối chiếu RSD % 0,0 0,28 0,36 0,44 0,21 0,24<br /> <br /> - Cc: nồng độ chất đối chiếu (µg/ml) Kết quả thẩm định quy trình: Tính đặc hiệu: sắc<br /> - mt: khối lượng cân mẫu thử (g) ký đồ mẫu trắng, mẫu placebo không xuất hiện<br /> pic trong khoảng thời gian lưu tương ứng với<br /> - St: diện tích pic của mẫu thử<br /> thời gian lưu trên sắc ký đồ của mẫu đối chiếu.<br /> - C%: hàm lượng % của chất đối chiếu Sắc ký đồ mẫu thử cho pic có thời gian lưu tương<br /> - 0,5: hệ số quy đổi ứng với pic trên mẫu đối chiếu (Hình 3 và 4).<br /> Tiến hành khảo sát tính phù hợp hệ thống của Các pic cần định lượng trên mẫu thử và đối<br /> quy trình: quy trình đạt yêu cầu về tính phù hợp chiếu đạt yêu cầu về độ tinh khiết pic được tính<br /> trên phần mềm của hệ thống.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1: Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 2: Sắc ký đồ mẫu placebo<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 3: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu Hình 4: Sắc ký đồ mẫu thử chiết từ gel<br /> <br /> <br /> <br /> 368 Chuyên Đề Dược<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 6: Kết quả khảo sát độ đặc hiệu của quy trình Bảng 9: Tỷ lệ phục hồi của TA; MPB và PPB<br /> định lượng TA, PPB và MPB Tỷ lệ phục hồi TB (%)<br /> Khoảng nồng độ<br /> Mẫu đối chiếu Mẫu thử TA MPB PPB<br /> 80 % 100,1 100,6 101,3<br /> tR (phút) max (nm) tR (phút) max (nm)<br /> 100 % 100,5 100,1 99,6<br /> TA 2,62 240,3 2,63 240,3<br /> 120 % 100,6 98,7 99,0<br /> MPB 2,18 255,7 2,18 255,7<br /> Giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định<br /> PPB 3,41 255,7 3,41 255,7<br /> lượng LOQ:<br /> Khoảng tuyến tính: pha các mẫu đối chiếu có<br /> Bảng 10: Giới hạn phát hiện và định lượng của TA,<br /> nồng độ 40 đến 140 % so với nồng độ định<br /> MPB và PPB<br /> lượng, tiến hành sắc ký theo điều kiện đã chọn.<br /> LOD (µg/ml) LOQ (µg/ml)<br /> Các kết quả được trình bày như bảng 7, có sự TA 0,3 0,99<br /> tương quan giữa diện tích pic và khoảng nồng MPB 5,2 17,16<br /> độ khảo sát. PPB 0,1 0,33<br /> Bảng 7: Tương quan nồng độ và diện tích pic của TA, Ứng dụng quy trình định lượng để khảo<br /> PPB và MPB sát hàm lượng TA, MPB và PPB trong một số<br /> TA MPB PPB chế phẩm có thành phần triamcinolon trên thị<br /> C trường, kết quả khảo sát được trình bày ở<br /> C (ppm) S C (ppm) S S<br /> (ppm)<br /> bảng 11.<br /> 12 349752 22 2707672 2 209332<br /> 18 524628 33 4061508 3 313998 Bảng 11: Hàm lượng (mg/10g) của TA, MPB và<br /> 25 728650 44 5415344 4 418664 PPB trong chế phẩm X, Y<br /> 30 874380 55 6769180 6 627996 Chế phẩm TA (mg/10g) MPB (mg/10g) PPB (mg/10g)<br /> 37 1078402 67 8246092 7 732662 X 10,01 18,20 1,89<br /> 43 1253278 78 9599928 8 837328 Y 10,22 18,14 1,98<br /> ŷ = 29146x ŷ = 123076x ŷ = 104666x<br /> 2<br /> R = 0,9993<br /> 2<br /> R = 0,9991<br /> 2<br /> R = 0,9994 KẾT LUẬN:<br /> Độ lặp lại – Độ chính xác trung gian: Dựa vào kết quả thu được từ thực nghiệm,<br /> Tiến hành sắc ký 6 lần trên mẫu thử. Kết quả có thể áp dụng quy trình để định lượng đồng<br /> được trình bày ở bảng 8. thời triamcinolon, methylparaben và<br /> propylparaben trong các chế phẩm thuốc. Đây là<br /> Bảng 8: Kết quả khảo sát độ lặp lại của quy trình định<br /> dạng chế phẩm đa thành phần nên các yếu tố<br /> lượng TA, MPB và PPB<br /> ảnh hưởng đến độ phân giải giữa các pic được<br /> Số TA MPB PPB<br /> mẫu S C (mg) S C (mg) S C (mg) quan tâm hàng đầu. Các điều kiện ảnh hưởng đã<br /> 1 870934 9,94 6455724 17,67 628078 1,91 được khảo sát và thẩm định đầy đủ nên có thể<br /> 2 870669 9,89 6460235 17,59 629979 1,91 ứng dụng với độ chọn lọc, độ chính xác và độ<br /> 3 872532 10,02 6466752 17,82 628871 1,93 đúng cao.<br /> 4 877969 9,83 6498300 17,42 634766 1,89 TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 5 875972 9,88 6493028 17,57 631918 1,90 1. Adriana DFP (2012), “Development and validation of a HPLC<br /> 6 878294 9,77 6510948 17,36 633913 1,88 Method for detemination of Triamcinolone acetonide from<br /> TB = 9,89 mg TB = 17,58 mg TB = 1,90 mg Polyurethane intracular implants”, International Journal of<br /> Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 24, pp. 132-136.<br /> RSD% = 0,91 RSD% = 0,92 RSD% = 0,84<br /> 2. Aquino (2011), “Validation of quantitative analysis method<br /> Độ đúng: thực hiện trên mẫu placebo ở 3 for triamcinolone in ternary complexes by UV-Vis<br /> spectrophotometry”, Journal of Basic and Applied<br /> khoảng nồng độ 80; 100 và 120 % so với nồng độ<br /> Pharmaceutical Sciences, 32(1), pp. 35-40<br /> định lượng. Kết quả được trình bày ở bảng 9, 3. Basima A, Mohammad A(2013), “Development of A<br /> cho thấy quy trình có tỷ lệ phục hồi đạt yêu cầu. Validated HPLC Method for the Analysis of Two Preservative<br /> Agents MPB, PPB in Topical Creams Containing Steroids in<br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Dược 369<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> the Patient’s Terms of Use”, International Journal of products in a topical cream by RP-HPLC”, Journal of<br /> Pharmaceutical Sciences Review and Research, 22(2), pp. 200 - Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 32, pp. 921 – 927.<br /> 205.<br /> 4. I.C.H. Harmonised tripartite guildeine, (2005), Validation of<br /> analytical procedure: Text and Methodology, pp.1 - 13. Ngày nhận bài báo: 30/10/2015<br /> 5. Hajkova R, Solich P (2003), “Simultaneous determination of Ngày phản biện nhận xét bài báo: 20/11/2015<br /> MPB, PPB, hydrocortisone acetate and its degradation Ngày bài báo được đăng: 20/02/2016<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 370 Chuyên Đề Dược<br />