Xây dựng quy trình giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin ở bệnh nhân mắc bệnh loạn dưỡng cơ duchenne

Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br /> XÂY DỰNG QUY TRÌNH GIẢI TRÌNH TỰ XÁC ĐỊNH  <br /> ĐỘT BIẾN ĐIỂM CỦA GEN DYSTROPHIN  <br /> Ở BỆNH NHÂN MẮC BỆNH LOẠN DƯỠNG CƠ DUCHENNE <br /> Nguyễn Thị Băng Sương* <br /> <br /> TÓM TẮT <br /> Đặt vấn đề: Loạn dưỡng cơ Duchenne (DMD: Duchenne muscular dystrophy) là bệnh di truyền lặn liên <br /> kết giới tính X, gây nên bởi đột biến gen dystrophin. Dạng đột biến phổ biến nhất là đột biến xóa đoạn gen, chiếm <br /> tỷ lệ 60‐65%. Đột biến điểm đứng thứ hai về mức độ thường gặp, chiếm 20‐30%. Đột biến lặp đoạn, khoảng 10‐<br /> 15%. Việc phát hiện đột biến điểm chưa được thực hiện rộng rãi tại Việt Nam do khó khăn trong việc xây dựng <br /> quy trình chẩn đoán. <br /> Mục tiêu: Xây dựng quy trình giải trình tự phát hiện đột biến điểm của gen dystrophin <br /> Đối  tượng  và  phương  pháp  nghiên  cứu:  Hai gia đình bệnh nhân mắc bệnh DMD, hai bệnh nhân này <br /> được  phân  tích  gen  dystrophin  bằng  kỹ  thuật  MLPA  nhưng  không  có  đột  biến  mất  đoạn  và  lặp  đoạn  gen <br /> dystrophin.  Ly  trích  DNA  của  hai  bệnh  nhân  cùng  hai  người  mẹ,  tiến  hành  giải  trình  tự  trực  tiếp  gen <br /> dystrophin để phát hiện đột biến điểm. <br /> Kết quả: Một bệnh nhân bị đột biến tại vị trí p.E2468X, một bệnh nhân đột biến dạng p.N2414fr*X2425. <br /> Kết luận: Xây dựng thành công quy trình giải trình tự để xác định đột biến điểm của gen dystrophin, đây <br /> là tiền đề giúp ứng dụng xác định bản đồ đột biến gen dystrophin trên các bệnh nhân loạn dưỡng cơ Duchenne <br /> tại Việt Nam. <br /> Từ khóa: DMD, loạn dưỡng cơ Duchenne, dystrophin, đột biến điểm <br /> <br /> ABSTRACT <br /> ESTABLISH SEQUENCING PROCEDURE TO IDENTIFY DYSTROPHIN GENE POINT MUTATION  <br /> CAUSING DUCHENE MUSCULAR DYSTROPHY <br /> Nguyen Thi Bang Suong* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 508 ‐ 513 <br /> Introduction:  Duchenne  muscular  dystrophy (DMD)  is  a  recessive X‐linked form  of muscular  dystrophy <br /> caused by mutations on dystrophin gene. DMD disease results in muscle degeneration and eventual death. The <br /> most common dyptrosin gene mutation is deletion, accounting for 60‐65%. Point mutation is the second common <br /> mutation which accounting for 20‐30%. Duplication attributes about 10‐15% mutations. The detection of point <br /> mutations has not been widely applied in Vietnam because of difficulties in establishing diagnostic procedures. <br /> Objective: Establish diagnosis procedure to identify point mutations on dystrophin gene.  <br /> Patients and Methods: Two DMD patients whosedystrophin genes were analyzed by MLPA method but <br /> no  deletion  or  duplication  mutants  were  identified.  The  DNA  of  these  two  patients  and  their  mothers  were <br /> sequenced to found point mutants.  <br /> Results: One patient carries p.E2468X mutant, the other patient have p.N2414fr*X2425 mutant. <br /> Conclusion: Successfully establishing sequencing procedure to diagnose point mutations of the dystrophin <br /> gene, which is the premise for mapping mutations in dystrophin gene of Duchenne Vietnam patients.  <br /> Keywords: DMD, Duchenne muscular dystrophy, dystrophin gene, point mutation.  <br /> * Bộ môn Hóa sinh, Trung Tâm Y Sinh Học Phân Tử, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh <br /> Tác giả liên lạc: TS. BS. Nguyễn thị Băng Sương, ĐT: 0914007038 Email: suongnguyenmd@gmail.com <br /> <br /> 508<br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ <br /> Loạn  dưỡng  cơ  Duchenne  (DMD: <br /> Duchenne  muscular  dystrophy)  là  bệnh  lý  cơ <br /> do  di  truyền  với  tần  suất  bệnh  vào  khoảng <br /> 1/3500  trẻ  trai.  Đây  là  bệnh  di  truyền  lặn  liên <br /> kết  giới  tính,  gây  nên  bởi  đột  biến  gen <br /> dystrophin. Gen này nằm trên nhiễm sắc thể X <br /> ở  locus  Xp21,  gồm  79  exon  với  7  promoter <br /> khác  nhau.  Gen  dystrophin  sao  mã  ra  mRNA <br /> 14kb và tổng hợp sản phẩm protein tương ứng <br /> là  dystrophin.  Đột  biến  gen  làm  ảnh  hưởng <br /> đến  quá  trình  tổng  hợp  protein  dystrophin, <br /> cấu  trúc  protein  thay  đổi  và  mất  chức  năng <br /> bảo  vệ  tế  bào  cơ,  do  vậy  tế  bào  cơ  của  bệnh <br /> nhân  bị  tổn  thương(9).  Triệu  chứng  điển  hình <br /> của bệnh DMD là yếu cơ đối xứng gốc chi, teo <br /> cơ tiến triển và bệnh nhân thường tử vong do <br /> suy  hô  hấp.  Bên  cạnh  đó  nồng  độ  enzyme <br /> creatine  kinase  tăng  cao  do  tế  bào  cơ  bị  thoái <br /> hóa.  Theo  các  nhà  nghiên  cứu,  dạng  đột  biến <br /> phổ  biến  nhất  xảy  ra  trên  gen  dystrophin  là <br /> đột biến xóa đoạn gen, chiếm tỷ lệ 60‐65%. Đột <br /> biến  điểm  đứng  thứ  hai  về  mức  độ  thường <br /> gặp, chiếm 20‐30%. Đột biến lặp đoạn, khoảng <br /> 10‐15%(9,11).  Hiện  nay  có  nhiều  phương  pháp <br /> giúp  chẩn  đoán  đột  biến  mất  đoạn  gen <br /> dystrophin  như  kỹ  thuật  multiplex  PCR <br /> (polymerase  chain  reaction),  RT‐PCR  (reverse <br /> transcriptase  PCR),  MLPA  (multiplex  ligation <br /> probe  amplification),...Trong  đó,  kỹ  thuật <br /> MLPA  được  đánh  giá  cao  khi  ứng  dụng  để <br /> chẩn đoán đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen <br /> dystrophin. Ở Việt Nam, đã có nhiều tác giả sử <br /> dụng kỹ thuật multiplex PCR và MLPA để xác <br /> định  đột  biến  mất  đoạn  gen  gây  bệnh  loạn <br /> dưỡng cơ Duchenne(4, 5).  <br /> <br /> Để  phát  hiện  đột  biến  điểm  của  gen <br /> dystrophin,  kỹ  thuật  giải  trình  tự  thường <br /> được sử dụng và có hiệu quả cao(3). Tại Việt <br /> Nam, việc chẩn đoán đột biến điểm của gen <br /> dystrophin  gặp  nhiều  khó  khăn  do  kích <br /> thước gen khá lớn (gồm 79 exon), vì vậy đa <br /> số  phòng  xét  nghiệm  Sinh  học  phân  tử <br /> <br /> Nhi Khoa<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> không  xây  dựng  quy  trình  chẩn  đoán  này. <br /> Tuy  nhiên,  dạng  đột  biến  điểm  chiếm  tỷ  lệ <br /> 20‐30%  ở  bệnh  nhân  Duchenne  nên  việc <br /> chẩn đoán chính xác dạng và vị trí đột biến <br /> của  gen  dystrophin  ở  bệnh  nhân  DMD  là <br /> điều  rất  cần  thiết,  từ  đó  có  thể  giúp  chẩn <br /> đoán  người  lành  mang  gen  và  chẩn  đoán <br /> trước  sinh  cho  thai  nhi.  Bên  cạnh  đó  nếu <br /> không xây dựng quy trình xác định đột biến <br /> điểm chúng ta sẽ không xác định được bản <br /> đồ  đột  biến  gen  dystrophin  trên  các  bệnh <br /> nhân DMD Việt Nam. Xuất phát từ thực tiễn <br /> đó chúng tôi tiến hành đề tài này nhằm mục <br /> tiêu: “Xây dựng kỹ thuật giải trình tự xác định <br /> đột biến điểm của gen dystrophin”. <br /> ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU <br /> Đối tượng nghiên cứu <br /> Gồm 2 bệnh nhân được chẩn đoán mắc bệnh <br /> loạn dưỡng cơ Duchenne trên lâm sàng với các <br /> triệu chứng sau: Yếu cơ tiến triển nặng dần, dấu <br /> hiệu  giả  phì  đại  cẳng  chân,  khó  leo  cầu  thang, <br /> dấu  hiệu  Gower  dương  tính.  Định  lượng  CK <br /> huyết thanh tăng cao (tăng ít nhất 40 lần so bình <br /> thường), xét nghiệm đo điện cơ đồ có biểu hiện <br /> bệnh lý Duchenne. <br /> Hai  bệnh  nhân  này  đã  được  phân  tích  gen <br /> dystrophin  bằng  kỹ  thuật  MLPA  nhưng  không <br /> phát  hiện  được  đột  biến  mất  đoạn  và  lặp  đoạn <br /> gen dystrophin. <br /> <br /> Phương pháp nghiên cứu <br /> ‐ Thiết kế nghiên cứu: mô tả loạt ca <br /> ‐ Các kỹ thuật thực hiện: <br /> <br /> Ly trích DNA từ máu ngoại vi <br /> Lấy 2 ml máu tĩnh mạch của các bệnh nhân <br /> và mẹ bệnh nhân cho vào ống nghiệm có  chứa <br /> chất  chống  đông  EDTA.  Sau  đó  tiến  hành  ly <br /> trích DNA từ tế bào bạch cầu máu ngoại vi theo <br /> quy trình của kit QiAgen. <br /> Tiến hành phản ứng PCR <br /> Tiến  hành  khuếch  đại  toàn  bộ  gen <br /> dystrophin  bằng  các  cặp  mồi  đặc  hiệu,  các  cặp <br /> mồi  được  chúng  tôi  thiết  kế  bằng  phần  mềm <br /> <br /> 509<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> LightScanner  Primer  Design.  Các  mồi  được <br /> kiểm  tra  nhiệt  độ  bắt  cặp,  không  có  các  SNP <br /> (single  nucleotide  polymorphism),  không  tạo <br /> cấu trúc hairpin và dimer. <br /> Điện di sản phẩm PCR trên agarose 1,5% để <br /> kiểm tra kết quả của phản ứng khuếch đại: Phản <br /> ứng  PCR  được  tối  ưu  hóa  về  thành  phần  phản <br /> ứng, chu kỳ luân nhiệt sao cho sản phẩm điện di <br /> chỉ xuất hiện 1 băng ứng với kích thước của sản <br /> phẩm  khuếch  đại.  Băng  điện  di  rõ,  có  bờ  đều, <br /> sắc gọn, không có băng phụ. <br /> <br /> ‐ Tinh sạch sản phẩm PCR: sử dụng kit của <br /> hãng QiAgen  <br /> ‐  Thực  hiện  phản  ứng  cycle  sequencing  với <br /> BigDye  version  3.1  của  công  ty  Applied <br /> Biosystems, theo 2 chiều xuôi và ngược: <br /> ‐ Đọc trình tự DNA bằng máy sequencer ABI <br /> PRISMR 3500. <br /> ‐ Phân tích kết quả, so sánh trình tự chuẩn từ <br /> NCBI  Blast  server  để  chẩn  đoán  tình  trạng  đột <br /> biến  của  các  exon,  trình  tự  chuẩn  của  gen <br /> dystrophin mang accession number NG_012232. <br /> <br /> Giải trình tự gen dystrophin <br /> KẾT QUẢ <br /> <br /> Kết quả của gia đình bệnh nhân DMD 28 <br /> Kết quả giải trình tự của bệnh nhân DMD 28 <br /> <br /> GenBank<br /> <br /> BN MD 28<br /> <br />  <br /> Hình 1: Kết quả giải trình tự exon 51 của bệnh nhân DMD_28 <br /> glutamin) thành TAG là codon kết thúc, làm quá <br /> Nhận  xét:  Tại  vị  trí  c.7402,  nucleotid  của <br /> trình  tổng  hợp  protein  dystrophin  bị  kết  thúc <br /> genbank  là  G,  trong  khi  đó  của  bệnh  nhân  là <br /> sớm.  Đột  biến  được  ký  hiệu  là  p.E2468X  và  đã <br /> nucleotid  T.  Đột  biến  làm  thay  đổi  codon  2468 <br /> được Hwa công bố vào năm 2008(6). <br /> bình  thường  là  GAG  (mã  hóa  cho  acid  amin <br /> <br /> Kết quả giải trình tự của mẹ bệnh nhân DMD 28 <br /> <br /> GenBank<br /> <br /> Mẹ BN DMD 28<br /> <br />  <br /> Hình 2: Kết quả phân tích exon 51 của mẹ bệnh nhân <br /> <br /> 510<br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 <br /> Nhận xét: Kết quả của mẹ bệnh nhân DMD <br /> 28 cho thấy, tại vị trí c.7402 mà bệnh nhân bị đột <br /> biến, chúng ta thấy xuất hiện sóng đôi, trong đó <br /> 1  đỉnh  tương  ứng  với  nucleotid  G  (giống <br /> genbank) và 1 đỉnh nucleotid T (giống kết quả bị <br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> đột biến ở bệnh nhân). Điều này chứng tỏ người <br /> mẹ bị đột biến dị hợp tử tại c.7402G>T, và người <br /> mẹ đã truyền allele bị bệnh cho con trai là bệnh <br /> nhân DMD 28. <br /> <br /> Kết quả của gia đình bệnh nhân DMD 45 <br /> <br /> GenBank<br /> <br /> BN DMD_45<br /> <br /> Mẹ DMD_45<br /> <br /> Hình 3: Kết quả phân tích exon 50 của bệnh nhân DMD 45 và người mẹ <br /> khẳng định, đột biến chủ yếu của gen là đột biến <br /> Nhận xét: <br /> xóa <br /> đoạn  gen,  chiếm  tỷ  lệ  60‐65%,  đột  biến  lặp <br /> ‐  Đối  với  mẫu  bệnh  nhân:  Vị  trí  c.7241  và <br /> đoạn chiếm khoảng 10‐15%, phần còn lại là đột <br /> c.7242 của genbank lần lượt là 2 nucleotid A và <br /> biến  điểm,  đột  biến  nhỏ  hoặc  đột  biến  tại  vị  trí <br /> C,  tuy  nhiên  ở  bệnh  nhân  không  xuất  hiện  2 <br /> cắt <br /> nối  intron‐exon(9).  Do  tần  suất  phân  bố  kiểu <br /> nucleotid  này.  Ngoài  ra,  nucleotid  vị  trí  c.7243 <br /> đột  biến  như  vậy  nên  quy  trình  chẩn  đoán  đột <br /> bình thường là C bị thay đổi thành T. Đột biến <br /> biến  gen  dystrophin  được  bắt  đầu  bằng  việc <br /> này làm xuất hiện codon kết thúc tại codon 2425. <br /> chẩn đoán đột biến mất đoạn, có nhiều phương <br /> Đột biến có ký hiệu là p.N2414fr*X2425. <br /> pháp để phát hiện kiểu đột biến này, năm 2010 <br /> ‐ Đối với mẹ bệnh nhân: tại vị trí c.7243 bắt <br /> Madania đã phối hợp 2 phương pháp multiplex <br /> đầu  xuất  hiện  sóng  đôi,  phân  tích  trình  tự  các <br /> PCR  và  real  time  PCR  để  chẩn  đoán  đột  biến <br /> đỉnh  chúng  ta  nhận  thấy  mẹ  bệnh  nhân  có  1 <br /> mất  đoạn  gen  dystrophin(8).  Bên  cạnh  đó  các <br /> allele bình thường (trình tự giống genbank) và 1 <br /> nghiên  cứu  cho  thấy  kỹ  thuật  MLPA  có  rất <br /> allele bị đột biến (có trình tự giống bệnh nhân). <br /> nhiều ưu điểm trong nghiên cứu bệnh DMD, vì <br /> BÀN LUẬN <br /> ngoài việc phát hiện đột biến mất đoạn, nó còn <br /> giúp phát hiện các đột biến lặp đoạn gen(5,2). Một <br /> Loạn dưỡng cơ Duchenne là bệnh di truyền <br /> trong những trở ngại lớn của việc chẩn đoán di <br /> liên  kết  với  nhiễm  sắc  thể  giới  tính  X,  do  đột <br /> truyền  bệnh  DMD  là  việc  phân  tích  phát  hiện <br /> biến gen Dystrophin nằm trên nhiễm sắc thể giới <br /> đột biến điểm, đây là nguyên nhân thường gặp <br /> tính X, do vậy bệnh  thường  biểu  hiện  ở  trẻ  em <br /> thứ  hai  sau  đột  biến  mất  đoạn.  Do  gen <br /> và  hiếm  khi  gặp  ở  trẻ  nữ.  Các  nhà  nghiên  cứu <br /> <br /> Nhi Khoa<br /> <br /> 511<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br /> dystrophin  là  một  gen  lớn,  cấu  trúc  gồm  79 <br /> exon, trong khi đó đột biến điểm lại rải rác khắp <br /> chiều dài gen chứ không tập trung tại các vùng <br /> trọng  điểm  như  đột  biến  mất  đoạn  nên  việc <br /> phân tích rất tốn kém về  công  sức  và  thời  gian <br /> cũng  như  kinh  phí.  Năm  2006,  Hamed  cùng <br /> cộng sự đã xây dựng quy trình RT‐PCR để giải <br /> trình  tự  cDNA  của  gen  dystrophin.  Hamed  đã <br /> thiết  kế  76  đoạn  mồi  gắn  đặc  hiệu  với  phân  tử <br /> cDNA, sau đó tác giả khuếch đại cDNA và giải <br /> trình  tự  toàn  bộ  vùng  gen  mã  hóa  của <br /> dystrophin. Nghiên cứu này đã phát hiện được <br /> 10 bệnh nhân bị đột biến điểm và đột biến nhỏ(3). <br /> Ở  Việt  Nam,  vào  năm  2009,  nhóm  nghiên  cứu <br /> chúng  tôi  đã  ứng  dụng  kỹ  thuật  RT‐PCR  trong <br /> chẩn  đoán  đột  biến  mất  đoạn  của  gen <br /> dystrophin(10).  Tuy  nhiên  kỹ  thuật  RT‐PCR  đòi <br /> hỏi nhiều công đoạn, kinh nghiệm cũng như kỹ <br /> năng cao của người phân tích, do vậy tỷ lệ thành <br /> công của kỹ thuật không cao. Trong nghiên cứu <br /> của  Hamed,  tác  giả  phân  tích  15  bệnh  nhân <br /> DMD không có đột biến mất đoạn và lặp đoạn <br /> gen  dystrophin,  nhưng  chỉ  phát  hiện  10  bệnh <br /> nhân  bị  đột  biến  điểm,  trong  khi  đó  theo  lý <br /> thuyết thì hầu hết các bệnh nhân này phải có đột <br /> biến  điểm.  Trong  nghiên  cứu  trước  của  chúng <br /> tôi,  kỹ  thuật  RT‐PCR  chỉ  phát  hiện  được  50% <br /> bệnh nhân DMD bị đột biến mất đoạn(10), trong <br /> khi  đó  nếu  ứng  dụng  kỹ  thuật  MLPA  thì  tỷ  lệ <br /> này là 63,6%(2). Do các hạn chế đó nên một số tác <br /> giả vẫn sử dụng kỹ thuật giải trình tự trên DNA <br /> của  vùng  gen  dystrophin(12),  trong  nghiên  cứu <br /> này chúng tôi cũng ứng dụng giải trình tự trực <br /> tiếp trên phân tử DNA.  <br /> Đối  với  gia  đình  bệnh  nhân  thứ  nhất,  khi <br /> phân tích kết quả giải trình tự exon 51 của bệnh <br /> nhân  DMD  28  chúng  ta  nhận  thấy  tại  vị  trí <br /> c.7402, nucleotid của genbank là G, trong khi đó <br /> của bệnh nhân là nucleotid T. Đột biến làm thay <br /> đổi  codon  2468  bình  thường  là  GAG  (mã  hóa <br /> cho  acid  amin  glutamin)  thành  TAG  là  codon <br /> kết  thúc,  làm  quá  trình  tổng  hợp  protein <br /> dystrophin  bị  kết  thúc  sớm.  Việc  tổng  hợp <br /> protein  dystrophin  bị  cắt  cụt  sẽ  làm  mất  chức <br /> năng  của  protein,  làm  protein  không  bảo  vệ <br /> <br /> 512<br /> <br /> được tế bào cơ, do vậy tế bào cơ bị thoái hóa dần <br /> và gây nên bệnh lý DMD. Kiểm tra kết quả trên <br /> NCBI chúng tôi xác định đột biến này đã được <br /> Hwa  công  bố  vào  năm  2008  trên  tạp  chí  J <br /> Formos  Med  Assoc(6).  Đột  biến  được  ký  hiệu  là <br /> p.E2468X. Một đặc điểm của bệnh nhân DMD là <br /> 2/3 bệnh nhân nhận gen bệnh từ người mẹ mang <br /> kiểu gen dị hợp tử, 1/3 bệnh nhân là do đột biến <br /> mới phát sinh. Do vậy khi phát hiện đột biến ở <br /> bệnh nhân chúng ta phải kiểm tra kiểu gen của <br /> người  mẹ  xem  có  mang  gen  bệnh  hay  không, <br /> điều này rất quan trọng trong tư vấn di truyền <br /> cũng như giúp chẩn đoán trước sinh bệnh DMD. <br /> Kết quả của mẹ bệnh nhân DMD 28 cho thấy, tại <br /> vị trí c.7402 mà bệnh nhân bị đột biến xuất hiện <br /> sóng  đôi,  trong  đó  1  đỉnh  tương  ứng  với <br /> nucleotid G (giống genbank) và 1 đỉnh nucleotid <br /> T (giống kết quả bị đột biến ở bệnh nhân).Điều <br /> này chứng tỏ người mẹ bị đột biến dị hợp tử tại <br /> c.7402G>T, và người mẹ đã truyền allele bị bệnh <br /> cho con trai là bệnh nhân DMD 28. <br /> Đối với gia đình thứ hai, kết quả giải trình tự <br /> của bệnh nhân DMD 45 cho thấy ở vị trí c.7241 <br /> và c.7242 của genbank lần lượt là 2 nucleotid A <br /> và C, tuy nhiên ở bệnh nhân không xuất hiện 2 <br /> nucleotid  này.  Ngoài  ra,  nucleotid  vị  trí  c.7243 <br /> bình thường là C bị thay đổi thành T. Đột biến ở <br /> bệnh  nhân  làm  thay  đổi  codon  2414  AAC  (mã <br /> hóa  cho  acid  amin  asparagine)  thành  ATG  (mã <br /> hóa  cho  acid  amin  methionine),  đồng  thời  gây <br /> lệch  toàn  bộ  khung  đọc  kể  từ  codon  2414  đến <br /> codon 2425, và codon 2425 là TAG, đây là codon <br /> kết  thúc.  Như  vậy  sự  tổng  hợp  protein <br /> dystrophin  bị  cắt  cụt,  làm  thay  đổi  cấu  trúc  và <br /> chức  năng  của  protein  dystrophin  và  gây  bệnh <br /> DMD.  Dạng  đột  biến  này  được  ký  hiệu  là <br /> p.N2414fr*X2425.  Đối  với  mẹ  bệnh  nhân:  tại  vị <br /> trí c.7243 bắt đầu xuất hiện sóng đôi, phân tích <br /> trình  tự  các  đỉnh  chúng  ta  nhận  thấy  mẹ  bệnh <br /> nhân  có  1  allele  bình  thường  (trình  tự  giống <br /> genbank)  và  1  allele  bị  đột  biến  (có  trình  tự <br /> giống  bệnh  nhân).  Như  vậy  chúng  ta  kết  luận <br /> người  mẹ  mang  kiểu  gen  dị  hợp  tử  và  truyền <br /> gen bệnh cho con trai. <br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br />