Góp phần nghiên cứu sự tạo phức của methionine với nguyên tố vi lượng đồng (Cu)

Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005<br /> <br /> Nghieân cöùu Y hoïc<br /> <br /> GOÙP PHAÀN NGHIEÂN CÖÙU SÖÏ TAÏO PHÖÙC CUÛA METHIONINE<br /> VÔÙI NGUYEÂN TOÁ VI LÖÔÏNG ÑOÀNG (Cu)<br /> Nguyeãn Hoaøng Haø*, Nguyeãn Thò Tuyeát Trinh*, Ca Thò Thuùy*, Nguyeãn Thaønh Trung*<br /> <br /> TOÙM TAÉT<br /> Ñoàng coù trong thaønh phaàn cuûa enzim, noù ñoùng vai troø quan troïng trong nhieàu chöùc naêng sinh lyù cuûa<br /> con ngöôøi vaø ñoäng vaät. Ñoàng caàn trong lónh vöïc phaùt trieån vaø baûo veä heä tim maïch, xöông, caáu taïo vaø chöùc<br /> naêng cuûa thaàn kinh trung öông vaø chöùc naêng taïo hoàng caàu bao goàm caû söï chuyeån hoùa saét. Gaàn nhö taát caû<br /> ion ñoàng trong dòch vaø teá baøo toàn taïi döôùi daïng lieân keát vôùi protein vaø ít hôn nhö laø hôïp chaát phöùc vôùi acid<br /> amin.<br /> Ñeà taøi khaûo saùt söï taïo thaønh phöùc chaát giöõa ñoàng vaø methionine ñöôïc thöïc hieän baèng phöông phaùp<br /> quang phoå töû ngoaïi – nhìn thaáy vaø öùng duïng ñeå ñònh löôïng methionine.<br /> <br /> SUMMARY<br /> RESEARCH COMPLEX – FORMATION OF METHIONINE WITH MICROELEMENT Cu<br /> Nguyen Hoang Ha, Nguyen Thi Tuyet Trinh, Ca Thi Thuy, Nguyen Thanh Trung<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 9 * Supplement of No 1 * 2005: 1 - 5<br /> <br /> Copper, as a component of numerous cuproenzymes, play a vital role in many physiologic function<br /> in man and animals. Copper is involved the development and mantenance of cardiovascular and skeletal<br /> integrity, centra nervous system structure and function, and erythropoietic function including iron<br /> metabolism. Nearly all the copper ions in fluids and cells exists in a protein- bound form and lesser extent,<br /> as complexes with amino acids.<br /> The study on the complex formation between copper and methionine was carried out by UV-VIS<br /> spectrophotometry method and its use for quantitative determination.<br /> <br /> TOÅNG QUAN<br /> Methionine: (acid D,L-α-amino-γ-metyltiobutiric)<br /> <br /> H3C<br /> <br /> S<br /> <br /> CH2<br /> <br /> CH2<br /> <br /> CH<br /> <br /> C<br /> <br /> NH2 O<br /> Methionine laø boät tinh theå maøu traéng, coù muøi ñaëc<br /> tröng, vò hôi ngoït, hôi khoù tan trong nöôùc.<br /> Methionine laø moät acid amin thieát yeáu coù trong thaønh<br /> phaàn cuûa cheá ñoä aên vaø trong coâng thöùc cuûa caùc cheá<br /> phaåm ña acid amin ñeå nuoâi döôõng. Methionine taêng<br /> cöôøng toång hôïp gluthation vaø ñöôïc söû duïng thay theá<br /> cho acetylcystein ñeå ñieàu trò ngoä ñoäc paracetamol.<br /> Methionine söû duïng ñeå chöõa, phoøng caùc beänh vaø bò<br /> <br /> OH<br /> <br /> hay<br /> <br /> R<br /> <br /> CH<br /> <br /> COOH<br /> <br /> NH2<br /> ngoä ñoäc gan: sô gan, beänh gan do nhieãm arsenit,<br /> nhieãm cloroform, benzol vaø caùc hoùa chaát khaùc, beänh<br /> nghieän röôïu maõn tính. Methionine theå hieän coâng<br /> hieäu trong ñieàu trò beänh nhieãm môõ gan. Ngoaøi ra,<br /> methionine söû duïng ñeå trò beänh loaïn döôõng do thieáu<br /> protit ôû treû em vaø ngöôøi lôùn bò maéc beänh lî vaø caùc<br /> beänh nhieãm khuaån maõn tính. Ñoái vôùi beänh sô vöõa<br /> ñoäng maïch, methionine laøm giaûm cholesteron vaø<br /> taêng phospholipit trong maùu.<br /> <br /> * Khoa Khoa Hoïc Cô Baûn, Ñaïi Hoïc Y Döôïc - TP.HCM<br /> <br /> Khoa Hoïc Cô Baûn<br /> <br /> 1<br /> <br /> Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005<br /> Nguyeân toá vi löôïng ñoàng (Cu)<br /> <br /> Nghieân cöùu Y hoïc<br /> <br /> thaønh melamin saéc toá cuûa da, ñoàng thôøi can thieäp vaøo<br /> hoaït ñoäng chuyeån hoùa moâ lieân keát cuõng nhö tham gia<br /> vaøo chuoãi hoâ haáp. Ñoàng ñoùng vai troø quan troïng trong<br /> chuyeån hoùa saét, thieáu ñoàng daãn tôùi roái loaïn chuyeån<br /> hoùa saét vaø daãn tôùi thieáu maùu.<br /> <br /> Ñoàng raát caàn thieát cho cô theå, nhöng vôùi haøm<br /> löôïng raát nhoû, dö ñoàng thöôøng gaëp hôn thieáu vaø raát<br /> nguy hieåm. Ñoàng laø hôïp phaàn caáu thaønh nhieàu<br /> enzime kim loaïi. Ñoàng hoaït ñoäng nhö coenzime, chaát<br /> daãn truyeàn thaàn kinh cuûa khaû naêng thöùc tænh vaø chuù<br /> yù. Noù cuõng laø coenzime caàn thieát cho quaù trình taïo<br /> Phöùc methionine vôùi Cu2+<br /> <br /> O<br /> <br /> O<br /> <br /> C<br /> H3C<br /> <br /> S<br /> <br /> CH2<br /> <br /> CH2<br /> <br /> O<br /> <br /> CH<br /> <br /> O<br /> Cu<br /> <br /> NH2<br /> <br /> C<br /> CH<br /> <br /> CH2 S<br /> <br /> CH2<br /> <br /> CH3<br /> <br /> H2N<br /> <br /> [Cu(Meth)2] laø phöùc chelat, trong ñoù ion Cu2+<br /> ñoùng vai troø laø chaát taïo phöùc vaø methionine laø caùc<br /> phoái töû. Moãi phaân töû methionine söû duïng caû hai<br /> nhoùm chöùc. Tröôøng hôïp thöù nhaát noù lieân keát vôùi ion<br /> Cu2+ qua nitô cuûa nhoùm amin theo cô cheá cho nhaän,<br /> tröôøng hôïp thöù 2 noù lieân keát qua oxy cuûa nhoùm<br /> carbonyl bôûi lieân keát coäng hoùa trò thoâng thöôøng.<br /> <br /> Phöùc methionin-Cu2+ goùp phaàn giaûi thích söï vaän<br /> chuyeån cuûa Cu2+ vaø methionin trong cô theå ngöôøi.<br /> Methionin laø acid amin quan troïng do tính chaát döôïc<br /> lyù cuõng nhö öùng duïng, nhöõng hieåu bieát veà phöùc<br /> methionin-Cu2+ goùp phaàn laøm saùng toû cô cheá taùc<br /> duïng cuûa methionin cuõng nhö cuûa nguyeân toá vi<br /> löôïng.<br /> <br /> ÖÙng duïng cuûa phöùc methionin-Cu2+<br /> Phöông phaùp phoå UV-VIS<br /> Nguoàn saùng<br /> <br /> hν<br /> <br /> Cuvet<br /> ñöïng<br /> maãu<br /> <br /> hν<br /> <br /> Ñôn saéc<br /> <br /> hν<br /> <br /> Thu<br /> böùc<br /> xaï<br /> <br /> Khuyeách<br /> ñaïi<br /> <br /> Phaùt hieän tín<br /> hieäu<br /> <br /> Sô ñoà toång quaùt cuûa maùy so maøu<br /> <br /> Ion Cu2+ taïo phöùc maøu xanh döông vôùi hai phaân<br /> töû methionin. Phöùc beàn khoaûng pH töø 2,0-3,0, coù<br /> λmax ôû 748nm. Döïa vaøo caùc döõ kieän naøy ta tính ñöôïc<br /> löôïng methionin coù trong cheá phaåm.<br /> Phöông phaùp Pope-stevens<br /> <br /> Nguyeân lyù<br /> <br /> ÔÛ moâi tröôøng dung dòch ñeäm borat hoaëc<br /> phosphat, caùc acid amin keát hôïp vôùi muoái ñoàng thaønh<br /> moät phöùc chaát “acid amin-ñoàng” hoøa tan theo phaûn<br /> öùng:<br /> <br /> O<br /> COOH<br /> R<br /> <br /> CH<br /> NH2<br /> <br /> 2<br /> <br /> C<br /> <br /> HOOC<br /> <br /> +<br /> <br /> Cu2+ +<br /> <br /> O<br /> <br /> CH<br /> H2N<br /> <br /> R<br /> <br /> R<br /> <br /> O<br /> <br /> O<br /> Cu<br /> <br /> CH<br /> NH2<br /> <br /> C<br /> CH R<br /> <br /> H2N<br /> <br /> Chuyeân ñeà Khoa Hoïc Cô Baûn vaø Y Teá Coâng Coäng<br /> <br /> Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005<br /> <br /> Nghieân cöùu Y hoïc<br /> <br /> Ñònh löôïng Cu2+ trong phöùc chaát theo phöông<br /> phaùp ñònh löôïng baèng iod giaùn tieáp:<br /> 2Cu2+ + 4KI<br /> <br /> Ñoà thò khaû o saù t khoaû ng tuyeá n tính<br /> <br /> 2CuI + I2<br /> <br /> I2 + 2Na2S2O3<br /> <br /> 1.1<br /> 1<br /> <br /> Na2S4O6 + 2NaI<br /> <br /> 0.9<br /> <br /> Töø ñoù tính ra haøm löôïng nitô acid amin trong<br /> maãu thöû.<br /> <br /> 0.8<br /> <br /> KEÁT QUAÛ VAØ BAØN LUAÄN<br /> <br /> 0.6<br /> <br /> 0.7<br /> <br /> 0.5<br /> <br /> Queùt böôùc soùng ñeå tìm böôùc soùng cöïc ñaïi (λmax)<br /> cuûa phöùc methionin-Cu2+<br /> Chuaån bò dung dòch phöùc methionin (0,08M) –<br /> Cu (0,04M). Tieán haønh queùt böôùc soùng töø 1100190nm, thu ñöôïc λmax = 748nm.<br /> 2+<br /> <br /> Khaûo saùt söï thay ñoåi noàng<br /> methionin tham gia phaûn öùng<br /> <br /> ñoä<br /> <br /> Chuùng toâi giöõ noàng ñoä Cu2+ khoâng ñoåi, taêng daàn<br /> noàng ñoä methionin. Sau ñoù ño ñoä haáp thu cuûa phöùc<br /> chaát. Keát quaû thu ñöôïc nhö sau:<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> [Cu2+] (M)<br /> 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04<br /> [Methionin] (M) 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12<br /> Ñoä haáp thu (A) 0,639 0,813 0,940 0,997 0,972 0,867<br /> <br /> 0<br /> <br /> 0.05<br /> <br /> 0.1<br /> <br /> 0.15<br /> <br /> [Methionine]<br /> <br /> Töø nhöõng keát quaû treân, chuùng toâi keát luaän, khi<br /> taêng tæ leä noàng ñoä methionin tham gia phaûn öùng thì<br /> coù söï taêng ñoä haáp thu cuûa phöùc, ñoàng thôøi coù söï dòch<br /> chuyeån cöïc ñaïi haáp thu veà böôùc soùng ngaén hôn vaø coù<br /> söï taêng cöôøng ñoä maøu cuûa phöùc taïo thaønh. Ñieàu naøy<br /> cho thaáy phaûn öùng taïo phöùc ñaõ xaûy ra. Vaø khoaûng<br /> noàng ñoä tuyeán tính öùng vôùi [methionin]: 0,01-0,08M<br /> Khaûo saùt thôøi gian taïo phöùc beàn<br /> Pha dung dòch phöùc vôùi noàng ñoä Cu2+ (0,04M)methionin (0,08M). Ño ñoä haáp thu cuûa phöùc theo thôøi<br /> gian taïo phöùc ta ñöôïc keát quaû sau:<br /> Ño lieàn<br /> 1,043<br /> <br /> Sau 10 phuùt<br /> 1,016<br /> <br /> Sau 20 phuùt<br /> 0,934<br /> <br /> Sau 30 phuùt<br /> 0,748<br /> <br /> Vôùi keát quaû treân ta thaáy neân ño lieàn maãu sau khi<br /> pha xong ñeå ñaït ñöôïc ñoä haáp thu toái öu.<br /> Xaùc ñònh gaàn ñuùng haèng soá beàn cuûa phaûn öùng taïo phöùc methionin-Cu2+ (0,08M –<br /> 0,04M) baèng phöông phaùp ño quang phoå haáp thu UV-VIS.<br /> [Methionin]<br /> <br /> 1<br /> [Methionin ]<br /> <br /> Abs phöùc<br /> <br /> 0,02<br /> 0,03<br /> 0,04<br /> 0,06<br /> 0,08<br /> <br /> 50<br /> 33,33<br /> 25<br /> 16,66<br /> 12,5<br /> <br /> 0,650<br /> 0,707<br /> 0,770<br /> 0,880<br /> 0,980<br /> <br /> [Cu 2+ ]<br /> AbsCu 2+ .[Cu 2+ ] − Abs phöùc<br /> -<br /> <br /> 0,0669<br /> 0,0588<br /> 0,0541<br /> 0,0471<br /> 0,0426<br /> <br /> [Cu2+] = 0,04M; Abs Cu2+ = 0,517; b = -3,937;<br /> tgα = -0,0006; β = 6,56.103<br /> <br /> Khoa Hoïc Cô Baûn<br /> <br /> 3<br /> <br /> Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005<br /> <br /> 0<br /> <br /> 20<br /> <br /> 60<br /> <br /> 40<br /> <br /> -0.04<br /> <br /> Y<br /> <br /> -0.06<br /> <br /> α<br /> <br /> -0.08<br /> <br /> 1<br /> <br /> Ñoä haáp thu (A)<br /> <br /> -0.02<br /> <br /> 1.1<br /> <br /> X<br /> <br /> 0<br /> <br /> Nghieân cöùu Y hoïc<br /> <br /> 0.9<br /> 0.8<br /> 0.7<br /> 0.6<br /> 0.5<br /> 0.4<br /> 0<br /> <br /> Vôùi X:<br /> <br /> 0.02<br /> <br /> 0.04<br /> <br /> 0.06<br /> <br /> 1<br /> [Methionin ]<br /> <br /> Xaùc ñònh methionin trong döôïc phaåm<br /> daïng vieân nang.<br /> Xaùc ñònh theo phöông phaùp quang phoå<br /> UV-VIS<br /> Laäp ñoà thò chuaån<br /> <br /> Cho vaøo 5 bình ñònh möùc 10 ml chính xaùc 1 ml<br /> dung dòch Cu2+ 0,2M. Theâm chính xaùc vaøo caùc bình<br /> laàn löôït caùc theå tích: 1; 1,5; 2; 3; 4 ml dung dòch<br /> methionin 0,2M. Roài theâm nöôùc caát 2 laàn ñeán vaïch<br /> möùc, laéc ñeàu. Ño ñoä haáp thu cuûa caùc dung dòch chuaån<br /> naøy trong cuvet 1 cm. Keát quaû thu ñöôïc nhö sau:<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 0,02 0,03 0,04 0,06<br /> 0,650 0,707 0,770 0,880<br /> <br /> 0.1<br /> <br /> Chuaån bò maãu<br /> <br /> [Cu 2+ ]<br /> Y:<br /> AbsCu 2+ .[Cu 2+ ] − Abs phöùc<br /> <br /> Soá thöù töï<br /> [Methionin] (M)<br /> Abs<br /> <br /> 0.08<br /> <br /> Methionin (M)<br /> <br /> 5<br /> 0,08<br /> 0,980<br /> <br /> Ñoà thò ñöôøng chuaån: phöông trình tuyeán tính y<br /> = 5,5207x + 0,5434; R2 = 0.9985<br /> <br /> Caân chính xaùc 20 vieân nang methionin 250 mg<br /> (saûn xuaát taïi: coâng ty coå phaàn hoùa – döïoc phaåm<br /> MEKOPHAR, soá loâ saûn xuaát: 0070904), tính ra khoái<br /> löôïng trung bình cuûa moãi vieân 0,3086 g. Troän ñeàu,<br /> nghieàn mòn. Caân chính xaùc 0,4992 g ñem hoøa tan<br /> trong nöôùc caát hai laàn ñun noùng vaø ñònh möùc ñeán 50<br /> ml baèng nöôùc caát hai laàn. Ñeå yeân 30 phuùt, loïc qua<br /> giaáy loïc khoâ vaø höùng dung dòch loïc vaøo 1 bình khoâ<br /> khaùc. Thu ñöôïc dung dòch maãu.<br /> Caùch tieán haønh:<br /> <br /> Chuaån bò 3 bình ñònh möùc 10 ml, theâm vaøo moãi<br /> bình 1 ml dung dòch Cu2+ 0,2M vaø 8 ml dung dòch<br /> maãu. Ñònh möùc baèng nöôùc caát 2 laàn ñeán vaïch. Keát<br /> quaû thu ñöôïc nhö sau:<br /> 2+<br /> <br /> [Cu ] (M)<br /> V dung dòch maãu (ml)<br /> Ñoä haáp thu (Abs)<br /> Ñoä haáp thu trung bình<br /> <br /> Bình 1<br /> 0,02<br /> 8<br /> 0,773<br /> <br /> Bình 2<br /> 0,02<br /> 8<br /> 0,774<br /> 0,773<br /> <br /> Bình 3<br /> 0,02<br /> 8<br /> 0,772<br /> <br /> Döïa vaøo ñoà thò chuaån tính ra haøm löôïng<br /> methionin coù trong 1 vieân nang laø:<br /> m = 245 ± 14 mg.<br /> <br /> Xaùc ñònh baèng phöông phaùp Pope –<br /> Stevens<br /> Chuaån bò dung dòch<br /> <br /> - Dung dòch thymolphatalein 0,25% trong coàn.<br /> - Hoãn dòch ñoàng photphat goàm 3 dung dòch, khi<br /> duøng pha vôùi nhau:<br /> <br /> 4<br /> <br /> Chuyeân ñeà Khoa Hoïc Cô Baûn vaø Y Teá Coâng Coäng<br /> <br /> Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005<br /> <br /> Nghieân cöùu Y hoïc<br /> <br /> Dung dòch A: - CuCl2.2H2O 27,3g; nöôùc caát vöøa<br /> ñuû 1000 ml<br /> <br /> Haøm löôïng nitô acid amin trong 1000 ml chaát<br /> thöû nitô acid amin (g/l)<br /> <br /> Dung dòch B: - Na2HPO4.12H2O 64,5 g; NaOH 7,2<br /> g; nöôùc caát vöøa ñuû 2000 ml.<br /> Dung dòch C: - Na2HPO4.12H2O 64,5 g; nöôùc caát<br /> vöøa ñuû 1000 ml.<br /> Dung dòch treo ñoàng photphat goàm:<br /> Dung dòch A: 1 theå tích<br /> <br /> m = 0,00028(N – n)<br /> <br /> 100 1000<br /> .<br /> V1 V2<br /> <br /> Vôùi:<br /> N: soá mol Na2S2O3 0,01N söû duïng ñeå ñònh löôïng<br /> maãu thöû.<br /> n: soá mol Na2S2O3 0,01N söû duïng ñeå ñònh löôïng<br /> maãu traéng.<br /> <br /> Dung dòch B: 1 theå tích<br /> <br /> V1: soá ml chaát thöû (ôû ñaây laø 10 ml)<br /> <br /> Dung dòch C: 4 theå tích<br /> Laéc ñeàu. Dung dòch treo naøy caàn chuaån bò 2, 3<br /> ngaøy khi duøng.<br /> - Acid acetic ñaäm ñaëc<br /> <br /> V2: soá ml dòch loïc (ôû ñaây 40 ml)<br /> Vaäy haøm löôïng methionin coù trong vieân nang<br /> methionin 250 mg:<br /> m = 240,2 ± 4,4 (mg)<br /> <br /> - Kali iodur tinh theå<br /> - Dung dòch NaOH 1N<br /> <br /> KEÁT LUAÄN<br /> <br /> - Dung dòch Na2S2O3 0,01N<br /> <br /> Sau moät thôøi gian thöïc hieän ñeà taøi chuùng toâi ñaõ<br /> thu ñöôïc moät soá keát quaû:<br /> <br /> - Dung dòch hoà tinh boät 1% trong nöôùc.<br /> Caùch tieán haønh<br /> <br /> Cho vaøo bình ñònh möùc 100 ml: chaát thöû 5 ml,<br /> thymolphtalein: 4 gioït. Nhoû töøng gioït NaOH 1N cho<br /> ñeán khi coù maøu xanh nhaït. Cho 30 ml dung dòch treo<br /> ñoàng photphat vaø theâm nöôùc caát vöøa ñuû 100 ml<br /> (löôïng ñoàng photphat phaûi chaéc chaén thöøa ñoái vôùi<br /> löôïng acid amin). Laéc kyõ, ñeå yeân 5 phuùt, loïc qua giaáy<br /> loïc khoâ.<br /> Cho vaøo bình noùn dung tích 100 ml: dòch loïc 40<br /> ml, acid acetic ñaäm ñaëc 2 ml, KI tinh theå 2 g. Chuaån<br /> ñoä iod ñöôïc giaûi phoùng ra baèng Na2S2O3 0,01N cho<br /> ñeán vaøng nhaït cho theâm 1 ml hoà tinh boät vaø tieáp tuïc<br /> chuaån ñoä baèng Na2S2O3 0,01N cho ñeán maát maøu hoaøn<br /> toaøn.<br /> Laøm song song moät maãu traéng, trong ñoù 400 ml<br /> nöôùc caát 2 laàn thay cho 40 ml dòch loïc.<br /> <br /> - Ñoä haáp thu cuûa phöùc methionin – ñoàng phuï<br /> thuoäc tuyeán tính vaøo noàng ñoä cuûa methionin. Vì vaäy<br /> coù theå söû duïng ñeå xaùc ñònh ñònh löôïng methionin<br /> trong caùc cheá phaåm.<br /> - Xaùc ñònh ñöôïc löôïng methionin coù trong thuoác<br /> methionin baèng phoå UV-VIS vaø baèng phöông phaùp<br /> hoùa hoïc. Keát quaû thu ñöôïc coù theå chaáp nhaän ñöôïc<br /> theo tieâu chuaån cuûa döôïc ñieån Vieät Nam, 2002, NXB<br /> Haø Noäi.<br /> <br /> TAØI LIEÄU THAM KHAÛO<br /> 1.<br /> 2.<br /> 3.<br /> 4.<br /> <br /> Tính keát quaû<br /> <br /> VNa 2S2O3<br /> Maãu 1<br /> Maãu 2<br /> Maãu 3<br /> <br /> - Ño ñöôïc phoå cuûa phöùc methionin vôùi Cu2+ theo<br /> tyû leä noàng ñoä 2:1 coù giaù trò böôùc soùng cöïc ñaïi khaùc vôùi<br /> phoå rieâng cuûa methionin vaø ion Cu2+.<br /> <br /> 3,30<br /> 3,10<br /> 3,40<br /> <br /> Khoa Hoïc Cô Baûn<br /> <br /> 3,20<br /> 3,20<br /> 3,30<br /> <br /> Vtb<br /> <br /> (ml)<br /> 3,30<br /> 3,20<br /> 3,30<br /> <br /> 3,267<br /> 3,167<br /> 3,333<br /> <br /> 5.<br /> 6.<br /> <br /> Döôïc ñieån Vieät Nam, NXB Haø Noäi, 176 – 177, 2002<br /> British Pharmacopoeia 2001<br /> Döôïc thö quoác gia Vieät Nam – Boä y teá, 678, Haø Noäi<br /> 2002<br /> Jean – Paul Curtay Josette Lyon, Baùch khoa toaøn toaøn<br /> thö veà vitamin, muoái khoaùng vaø caùc nguyeân toá vi<br /> löôïng, NXB Y hoïc, 271 (2001).<br /> Osterberg R. J. Biol. Chem, 243 (1968).<br /> Phaïm Vaên Soå, Buøi Thò Nhö Thuaän, Kieåm nghieäm<br /> löông thöïc thöïc phaåm, NXB Khoa hoïc vaø Kyõ thuaät,<br /> 141 (1975).<br /> <br /> 5<br /> <br />